【摘要】：流感一直是人類社會的一個巨大威脅。應對流感,最好的辦法就是接種疫苗。相對于傳統的滅活疫苗和減毒活疫苗,新出現的核酸疫苗基于它的眾多優(yōu)點,很有希望成為新一代的流感疫苗。由于流感病毒表面抗原血凝素(HA)是流感病毒核酸疫苗最好的靶點,而針對血凝素抗原表位產生的抗體是主要的具保護性的中和抗體,因此對基于血凝素抗原表位的核酸疫苗進行的研究具有一定的探索性意義。本文在小鼠模型中探討了血凝素單個抗原表位的改變對于核酸疫苗保護效果的影響；并嘗試構建基于血凝素表位的具有交叉保護效果的核酸疫苗。 本論文包括以下幾個部分：(一)流感病毒,流感病毒疫苗和流感病毒血凝素的簡介；(二)含甲型H1N1流感病毒血凝素單個抗原表位核酸疫苗的構建及其免疫小鼠后的保護效果比較研究；(三)含流感病毒血凝素多個抗原表位核酸疫苗的構建及其免疫小鼠后的交叉保護效果研究。 (一)流感病毒,流感病毒疫苗和流感病毒血凝素的簡介：以綜述的形式簡單介紹了流感病毒及其變異性；流感病毒疫苗的分類和特點；流感病毒血凝素的特性。 (二)含甲型H1N1流感病毒血凝素單個抗原表位的核酸疫苗的構建及其免疫小鼠后的保護效果比較研究：試驗中構建了多個以A/PR/8流感病毒HA1為骨架,含不同甲型H1N1流感病毒單個表位的核酸疫苗。分別將各疫苗30微克使用肌肉注射后輔以電擊的方式免疫BALB/c雌性小鼠,一次免疫三周后或兩次免疫一周后用致死量(20×LD50)甲型H1N1流感病毒攻擊小鼠,通過觀察小鼠的體重丟失率和存活率來比較評價各個疫苗的保護作用。結果顯示,含甲型H1N1流感病毒血凝素單個抗原表位的核酸疫苗能夠提供小鼠抗致死量流感病毒攻擊的能力,一次免疫后可以提供部分保護,兩次免疫后基本能達到完全保護。 (三)含流感病毒血凝素多個抗原表位核酸疫苗的構建及其免疫小鼠后的交叉保護效果研究：我們在試驗中構建了以甲型H1N1流感病毒HA1為骨架,含兩個A/PR/8流感病毒表位的核酸疫苗。分別用含甲型H1N1流感病毒全長HA和A/PR/8流感病毒全長HA的核酸疫苗為對照。將各疫苗都用30微克間隔三周兩次電擊免疫BALB/c雌性小鼠,兩免二周后分別用致死量(20×LD50)甲型H1N1流感病毒和致死量(20×LD50)A/PR/8流感病毒攻擊小鼠,通過觀察小鼠的體重丟失率和存活率來評價該疫苗的交叉保護作用。結果顯示,兩次免疫后,該核酸疫苗對甲型H1N1流感病毒和A/PR/8流感病毒的攻擊都能提供完全的保護,達到了和含相應病毒株全長HA核酸疫苗一樣的效果,而對照組基本沒有或只有很小的保護效果。因此我們認為,基于流感病毒血凝素多個抗原表位的核酸疫苗方案是可行的,可以到達對于多個病毒株的交叉保護效果。
[Abstract]:Influenza has always been a great threat to human society. The best way to deal with influenza is to get vaccinated. Compared with the traditional inactivated vaccine and attenuated live vaccine, the new nucleic acid vaccine is expected to become a new generation of influenza vaccine because of its many advantages. Because influenza virus surface antigen hemagglutinin (HA) is the best target for influenza virus nucleic acid vaccine, antibodies against hemagglutinin epitopes are the main protective neutralizing antibodies. Therefore, the research of nucleic acid vaccine based on hemagglutinin epitope has some exploratory significance. In this paper, we studied the effect of the change of single antigen epitope of hemagglutinin on the protective effect of nucleic acid vaccine in mice, and tried to construct a cross-protective nucleic acid vaccine based on hemagglutinin epitope. This paper includes the following parts: (1) Influenza virus, influenza virus vaccine and influenza virus hemagglutinin; (2) Construction of single epitope nucleic acid vaccine containing hemagglutinin of influenza A H1N1 virus and comparative study on its protective effect after immunizing mice; (3) Construction of multiantigen epitope nucleic acid vaccine containing hemagglutinin of influenza virus and its cross-protective effect after immunizing mice. Introduction of influenza virus, influenza virus vaccine and influenza virus hemagglutinin: a brief introduction to influenza virus and its variability; classification and characteristics of influenza virus vaccine; and characteristics of influenza virus hemagglutinin (2) Construction of nucleic acid vaccine containing hemagglutinin epitope of influenza A H1N1 virus and comparative study of its protective effect after immunizing mice: in the experiment, several A/PR/8 influenza virus HA1 was constructed as skeleton. Nucleic acid vaccine containing a single epitope of different influenza A H1N1 viruses. 30 micrograms of each vaccine were injected intramuscularly to immunize BALB/c female mice with electric shock. The mice were immunized three weeks later or two weeks later with a lethal dose of (20 脳 LD50) H1N1 influenza virus. The protective effects of each vaccine were evaluated by observing the weight loss rate and survival rate of mice. The results showed that the nucleic acid vaccine containing hemagglutinin epitopes of influenza A H1N1 virus could provide the ability of resisting lethal influenza virus attack in mice. (3) Construction of multi-antigen epitope nucleic acid vaccine containing hemagglutinin of influenza virus and its cross-protective effect after immunizing mice: we constructed a H1N1 influenza virus HA1 skeleton in our experiment. Nucleic acid vaccine containing two A/PR/8 influenza epitopes. Nucleic acid vaccines containing full-length HA of A H1N1 influenza virus and full length HA of A/PR/8 influenza virus were used as control group. BALB/c female mice were immunized with 30 micrograms of each vaccine twice every three weeks. After two weeks of immunization, the mice were attacked with 20 脳 LD50 H1N1 influenza virus and 20 脳 LD50 A/PR/8 influenza virus, respectively. The cross-protection of the vaccine was evaluated by observing the weight loss rate and survival rate of the mice. The results showed that after twice immunization, the nucleic acid vaccine could provide complete protection against influenza A H1N1 virus and A/PR/8 influenza virus, and achieved the same effect as the full-length HA nucleic acid vaccine containing the corresponding virus strain. The control group had little or no protective effect. Therefore, we believe that the nucleic acid vaccine based on multiple antigen epitopes of influenza virus hemagglutinin is feasible and can achieve cross-protection for multiple virus strains.
【學位授予單位】：湖南師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R392.1

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本文編號：2240277