【摘要】：Grb7蛋白是一種接頭蛋白,該蛋白是Grb7蛋白家族的成員之一,這個蛋白家族包括Grb7, Grb10和Grb14三個成員。現(xiàn)在研究發(fā)現(xiàn),Grb7蛋白在一些惡性腫瘤組織中,尤其是高轉(zhuǎn)移性腫瘤組織中處于高表達(dá)狀態(tài),比如乳腺癌,食管癌,胃癌等。編碼Grb7蛋白的基因位于人染色體17q12-q21,該區(qū)域在臨床檢驗中已被證實在某些腫瘤中有明顯的擴(kuò)增,這一基因基礎(chǔ),決定了Grb7蛋白有可能成為臨床治療腫瘤的一個重要靶點。在Grb7蛋白中,一共有三個主要的功能區(qū)域,N末端富含脯氨酸,中間序列和Caenorhabditis elegans的Mig-10蛋白有很高的相似性,該結(jié)構(gòu)域在細(xì)胞遷移中發(fā)揮了重要作用,C末端是一個SH2結(jié)構(gòu)域。SH2結(jié)構(gòu)域在Grb7蛋白參與的細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路中發(fā)揮了重要作用。雖然Grb7蛋白SH2結(jié)構(gòu)域主要是以結(jié)合磷酸化酪氨酸模序為主,但近年來的研究發(fā)現(xiàn)Grb7蛋白SH2結(jié)構(gòu)域也可以結(jié)合非磷酸化模序,而且由于非磷酸化肽段較磷酸化肽段在體內(nèi)更加易穩(wěn)定存在,所以研究Grb7蛋白SH2結(jié)構(gòu)域結(jié)合非磷酸化肽段的特性更有助于研制針對Grb7蛋白高表達(dá)的腫瘤治療的藥物。在本文的研究中,我們使用酵母雙雜交的方法,在隨機(jī)多肽文庫中篩選到了可結(jié)合Grb7蛋白SH2結(jié)構(gòu)域的一系列非磷酸化肽段,這些肽段的共同之處在于,每個肽段序列中均含一個22個氨基酸序列,該序列N末端為GIPT/N/K的保守序列,C末端為G/WD/IP的保守序列,中間為15個隨機(jī)排列的氨基酸,富含絲氨酸,蘇氨酸和脯氨酸,突變實驗表明22個氨基酸序列中,兩端保守的7個氨基酸對非磷酸化肽段結(jié)合Grb7蛋白SH2結(jié)構(gòu)域發(fā)揮重要作用,這種新的結(jié)合形式在體外免疫共沉淀和活細(xì)胞內(nèi)的熒光能量轉(zhuǎn)移實驗已得到證實。
[Abstract]:Grb7 protein is a kind of junction protein, which is a member of Grb7 protein family, which consists of three members: Grb7, Grb10 and Grb14. Now it has been found that Grb7 protein is highly expressed in some malignant tissues, especially in high metastatic tumors, such as breast cancer, esophageal cancer, gastric cancer and so on. The gene encoding Grb7 protein is located on human chromosome 17q12-q21. This region has been confirmed to be significantly amplified in some tumors in clinical laboratory. This gene basis determines that Grb7 protein may become an important target for clinical treatment of tumors. In the Grb7 protein, there are three major functional regions, the N-terminal of which is rich in proline, and the intermediate sequence is highly similar to the Mig-10 protein of Caenorhabditis elegans. This domain plays an important role in cell migration. C terminal is a SH2 domain. SH2 domain plays an important role in the cellular signal transduction pathway in which Grb7 protein is involved. Although the SH2 domain of Grb7 protein is mainly phosphorylated tyrosine motif, it has been found in recent years that the SH2 domain of Grb7 protein can also bind to non-phosphorylated motifs. Since non-phosphorylated peptides are more stable than phosphorylated peptides in vivo, it is more helpful to study the characteristics of SH2 domain binding to non-phosphorylated peptide domain of Grb7 protein and to develop drugs for the treatment of tumor with high expression of Grb7 protein. In our study, we used yeast two-hybrid method to screen a series of non-phosphorylated peptides binding to the SH2 domain of Grb7 protein in a random polypeptide library. Each peptide sequence contained a 22-amino acid sequence. The N-terminal conserved sequence of GIPT/N/K was conserved at the C-terminal of G/WD/IP, with 15 randomly arranged amino acids, rich in serine, threonine and proline. Mutation analysis showed that 7 amino acids conserved at both ends of the 22 amino acid sequences play an important role in the SH2 domain of non-phosphorylated peptide binding to Grb7 protein. This new binding form has been confirmed by in vitro immunoprecipitation and fluorescence energy transfer in living cells.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R363

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本文編號：2237580