發(fā)布時(shí)間：2018-09-11 14:37

【摘要】：目的：探討B(tài)MP-2聯(lián)合低氧環(huán)境誘導(dǎo)BMSCs向成軟骨生成分化的可行性，并進(jìn)一步研究其生物學(xué)機(jī)制。 方法：體外培養(yǎng)4周齡健康清潔級雌性SD大鼠BMSCs，取第2代細(xì)胞根據(jù)培養(yǎng)條件不同將實(shí)驗(yàn)分為4組：常氧對照組（A組）、常氧加BMP-2誘導(dǎo)液組（B組）、低氧對照組（C組）和低氧加BMP-2誘導(dǎo)液組（D組）。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化，阿利新藍(lán)染色檢測各組軟骨基質(zhì)糖胺聚糖（glycosaminoglycans，GAG）分泌水平，Western blot檢測細(xì)胞內(nèi)Ⅱ型膠原和低氧誘導(dǎo)因子1α（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）蛋白表達(dá)水平，RT-PCR檢測成軟骨、成骨以及低氧相關(guān)基因表達(dá)水平。 結(jié)果：D組誘導(dǎo)21天，細(xì)胞變?yōu)轭悎A形，細(xì)胞密度明顯減少，細(xì)胞周邊呈陷窩樣，基質(zhì)包裹細(xì)胞，而A、B和C組均未見上述典型變化。D組阿利新藍(lán)染色較其他組明顯深染，并隨誘導(dǎo)時(shí)間延長，藍(lán)染加深，21天時(shí)出現(xiàn)成片深染藍(lán)色，其他實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間點(diǎn)僅見散在少量的淡染藍(lán)色。Western Blot檢測細(xì)胞內(nèi)Ⅱ型膠原蛋白表達(dá)水平D組較其他實(shí)驗(yàn)組顯著增高（P0.05），HIF-1α蛋白表達(dá)水平C、D組較A、B組顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。RT-PCR檢測D組成軟骨分化相關(guān)指標(biāo)COL2α1、Agg表達(dá)最高，而B組成骨分化相關(guān)指標(biāo)COL1α1、ALP、RUNX2表達(dá)水平最高，C和D組低氧相關(guān)的指標(biāo)HIF-1α較A和B組顯著增強(qiáng)（P0.05）。 結(jié)論：BMP-2聯(lián)合低氧環(huán)境可以很好地誘導(dǎo)BMSCs向軟骨表型分化，并抑制其成骨表型分化，，HIF-1α是參與其促軟骨生成過程可能機(jī)制的一個(gè)重要信號分子。
[Abstract]:Aim: to investigate the feasibility and biological mechanism of BMP-2 combined with hypoxia in inducing BMSCs into chondrogenic differentiation. Methods: the second passage of BMSCs, cells of healthy clean grade female SD rats cultured in vitro were divided into four groups: normoxic control group (group A), normoxic plus BMP-2 induction solution group (group B) and hypoxic control group (group C). And hypoxia plus BMP-2 induction solution group (group D). The changes of cell morphology were observed under inverted microscope. The levels of glycosaminoglycan (glycosaminoglycans,GAG) secretion in chondrocytes were detected by alisin blue staining and the expression levels of collagen 鈪

本文編號：2236976