發(fā)布時(shí)間：2018-09-07 10:59

【摘要】：糖原合成酶激酶(Glycose synthase kinase 3, GSK3),是最初在糖原合成中發(fā)現(xiàn)的一個(gè)重要的絲氨酸／蘇氨酸激酶,在細(xì)胞各種信號通路包括WNT通路,胰島素敏感性調(diào)節(jié),造血干細(xì)胞,細(xì)胞周期和凋亡,腫瘤細(xì)胞的存活中都扮演著重要的角色。GSK3具有兩個(gè)由不同基因編碼翻譯的剪切體：GSK3α(51KD)和GSK3β(47kD)。llS調(diào)節(jié)蛋白復(fù)合物γ亞單位REGy(11S regulator complex gamma sub unit),是一類蛋白酶體激活因子,它能與20s蛋白酶體結(jié)合而參與泛素與ATP非依賴的蛋白降解。本文研究了蛋白酶體激活因子REGγ與糖原合成酶激酶GSK3p之間的相互作用。 首先,我們發(fā)現(xiàn)蛋白酶體激活因子REGγ能結(jié)合并降解糖原合成酶激酶GSK3p。過量表達(dá)REGγ會增加GSK3β降解,敲低REGγ會增加內(nèi)源GSK3p蛋白水平。REGγ基因敲除小鼠MEF細(xì)胞內(nèi)GSK3β蛋白水平也會增加。另外,REGγ能影響GSK3β蛋白在細(xì)胞內(nèi)的定位。同時(shí)我們探究了REGγ降解GSK3β的機(jī)制。 然后,我們探究了REGγ與GSK3β之間的作用,所引起的細(xì)胞內(nèi)生物學(xué)功能的變化。在REGγ敲低的細(xì)胞內(nèi),我們發(fā)現(xiàn)GSK3β蛋白水平上升,腫瘤抑制因子P53的Ser315位磷酸化修飾升高。已有報(bào)道表明GSK3β能磷酸化修飾p53的Ser315,而p53的Ser315磷酸化修飾能促進(jìn)p53的轉(zhuǎn)錄活性,增加p53的泛素化降解。因此,REGγ可能通過GSK3β,間接參與P53的磷酸化修飾、轉(zhuǎn)錄活性及降解調(diào)控。同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)GSK3β下游蛋白β-catenin蛋白水平降低。REGγ也有可能通過GSK3β間接調(diào)節(jié)β-catenin,從而調(diào)控β-catenin參與的腫瘤相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。流式細(xì)胞儀FACS技術(shù)檢測細(xì)胞周期和凋亡實(shí)驗(yàn)時(shí),發(fā)現(xiàn)過量表達(dá)REGγ會抑制GSK3β誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。 綜上所述我們主要研究了REGγ能結(jié)合并降解GSK3β蛋白,從而影響GSK3β下游蛋白的活性,生物功能和與之相關(guān)的腫瘤發(fā)生,并為以后研究GSK3β及其所參與的細(xì)胞信號通路提供一些線索。
[Abstract]:Glycose synthase kinase 3 (GSK3) is an important serine/threonine kinase first discovered in glycogen synthesis. GSK3 plays an important role in various cell signaling pathways including WNT pathway, insulin sensitivity regulation, hematopoietic stem cells, cell cycle and apoptosis, and tumor cell survival. There are two splicers encoded and translated by different genes: GSK3alpha (51KD) and GSK3beta (47kD). llS regulator complex gamma sub unit (REGy), a class of proteasome-activating factors that bind to 20S proteasome and participate in ubiquitin-and ATP-independent protein degradation. The interaction between live factor REG gamma and glycogen synthase kinase GSK3p.
First, we found that proteasome-activated factor REGgamma binds to and degrades glycogen synthase kinase GSK3p. Overexpression of REGgamma increases the degradation of GSK3p, and knockdown of REGgamma increases the level of endogenous GSK3p protein. At the same time, we explored the mechanism of REG GSK3 degradation.
We then explored the role of REG-gamma and GSK3-beta in the changes in cellular biological functions. In REG-gamma knocked-down cells, we found that GSK3-beta protein levels rose and the phosphorylation of tumor suppressor P53 Ser315 increased. It has been reported that GSK3-beta phosphorylated p53 Ser315, while p53 Ser315 phosphorylated p53. Therefore, REG-gamma may indirectly participate in the phosphorylation modification, transcriptional activity and degradation regulation of P53 through GSK3 beta. At the same time, we found that the level of downstream protein beta-catenin of GSK3 beta decreased. REG-gamma may also indirectly regulate beta-catenin through GSK3 beta, thereby regulating the participation of beta-catenin. Flow cytometry (FACS) was used to detect cell cycle and apoptosis. Overexpression of REGgamma inhibited GSK3 beta-induced apoptosis.
In summary, we mainly studied the binding and degradation of GSK3 beta protein by REGgamma, thereby affecting the activity, biological function and tumorigenesis of GSK3 beta downstream protein, and providing some clues for the future study of GSK3 beta and its involved cell signaling pathways.
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R341

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本文編號：2228068