【摘要】：建立了適合佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠脾臟組織G蛋白偶聯(lián)受體激酶2(GRK2)免疫熒光測(cè)定法�？疾炝嗣庖邿晒鉁y(cè)定的4個(gè)關(guān)鍵條件:(1)滲透劑Triton X-100的影響;(2)不同抗原修復(fù)液:檸檬酸緩沖液和p H 9.0乙二胺四乙酸(EDTA)緩沖液的影響;(3)5%胎牛血清封閉不同時(shí)間(20、30、40、50min)的影響;(4)不同一抗?jié)舛?1∶50、1∶100、1∶200、1∶400、1∶500)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,Triton X-100通透增強(qiáng)了抗原的表達(dá);1∶100的一抗?jié)舛葘?duì)熒光信號(hào)強(qiáng)度最合適;封閉50 min能顯著去除背景非特異性染色;檸檬酸緩沖液優(yōu)于p H 9.0 EDTA緩沖液,提高了抗原表達(dá)。
[Abstract]:An immunofluorescence assay was developed for the determination of G protein coupled receptor kinase 2 (GRK2) in spleen of adjuvant arthritis rats. Four key conditions for immunofluorescence determination were investigated: (1) the effect of osmotic agent Triton X-100, (2) the effect of different antigen repair solution: citric acid buffer and pH 9.0 ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA) buffer, (3) 5% fetal bovine serum blocking for different time (2030 ~ 4050min). (4) the effect of different concentrations (1: 50, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 500). The results showed that Triton X-100 permeable enhanced the expression of antigen 1: 100 and the first antibody concentration of 1: 100 was the most suitable for the intensity of fluorescence signal; blocking 50 min could significantly remove background nonspecific staining; citric acid buffer was superior to pH 9.0 EDTA buffer. The antigen expression was improved.
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)臨床藥理研究所抗炎免疫藥物教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室抗炎免疫藥物安徽協(xié)同創(chuàng)新中心;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(編號(hào):81330081、81673444、81502123)
【分類號(hào)】：R-332

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本文編號(hào)：2225590