【摘要】：背景:研究證明,富血小板血漿可促進骨髓間充質(zhì)干細胞、脂肪來源干細胞及骨骼肌衛(wèi)星細胞的增殖及成骨分化,但其是否可促進人臍帶間充質(zhì)干細胞的增殖及成骨分化目前尚不清楚。目的:觀察不同質(zhì)量濃度富血小板血漿對體外培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細胞增殖及成骨分化的影響。方法:將第5代人臍帶間充質(zhì)干細胞分6組培養(yǎng),分別以含0,250,500,750,1 000,2 000 ng/L活化富血小板血漿的培養(yǎng)基中培養(yǎng),1,3,5,7 d后,檢測細胞增殖,篩選最佳富血小板血漿質(zhì)量濃度,進行以下實驗。將第5代細胞人臍帶間充質(zhì)干細胞分4組培養(yǎng),空白對照組添加完全培養(yǎng)基,富血小板血漿組添加最佳濃度的富血小板血漿,成骨誘導(dǎo)組添加成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基,聯(lián)合組添加最佳濃度的富血小板血漿與成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基,培養(yǎng)3,7,14 d,檢測細胞堿性磷酸酶活性;培養(yǎng)7,14,21 d,檢測骨標(biāo)志基因骨橋蛋白、骨特異性轉(zhuǎn)錄因子、骨鈣蛋白m RNA的相對表達量;培養(yǎng)21 d,檢測細胞外基質(zhì)的礦化。結(jié)果與結(jié)論:(1)培養(yǎng)5,7 d時,500,750,1 000 ng/L富血小板血漿組的細胞增殖高于0 ng/L富血小板血漿組(P0.05),其中以750 ng/L質(zhì)量濃度促增殖效果最明顯,以此濃度進行以下實驗;(2)聯(lián)合組培養(yǎng)不同時間點的堿性磷酸酶活性高于其余3組(P0.05);(3)聯(lián)合組培養(yǎng)不同時間點的骨橋蛋白、骨特異性轉(zhuǎn)錄因子、骨鈣蛋白m RNA相對表達量高于其余3組(P0.05);(4)聯(lián)合組細胞外基質(zhì)礦化程度高于其余3組(P0.05);(5)結(jié)果表明,750 ng/L富血小板血漿可促進人臍帶間充質(zhì)干細胞的增殖及成骨分化。
[Abstract]:Background: studies have shown that platelet-rich plasma can promote the proliferation and osteogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells, adipose derived stem cells and skeletal muscle satellite cells. However, it is not clear whether it can promote the proliferation and osteogenic differentiation of human umbilical cord mesenchymal stem cells. Aim: to observe the effects of platelet-rich plasma at different concentrations on proliferation and osteogenic differentiation of human umbilical cord mesenchymal stem cells in vitro. Methods: the fifth generation of human umbilical cord mesenchymal stem cells were cultured in 6 groups. The cells were cultured in a culture medium containing 1 000 ng/L for 1 000 ng/L to activate platelet-rich plasma. After 7 days, cell proliferation was detected and the best plasma concentration of platelet-rich plasma was screened. Do the following experiments. The fifth generation of human umbilical cord mesenchymal stem cells were cultured in four groups: blank control group, platelet-rich plasma group and osteoblast induction medium. In the combined group, the best concentration of platelet-rich plasma and osteoblast induction medium was added to culture for 714 days, the activity of alkaline phosphatase was detected, and the bone marker gene osteopontin and osteo-specific transcription factor were detected for 21 days. The relative expression of osteocalcin m RNA and the mineralization of extracellular matrix were detected after 21 days of culture. Results and conclusion: (1) the proliferation of the cells in the platelet-rich plasma group was higher than that in the 0 ng/L platelet-rich plasma group (P0.05), and the proliferation effect was most obvious when the concentration of 750 ng/L was used to promote the proliferation of the platelet-rich plasma (P < 0.05). The activity of alkaline phosphatase at different time points in the combined group was higher than that in the other three groups (P0.05); (3), and the osteopontin, osteospecific transcription factor at different time points in the combined group were higher than those in the other three groups (P0.05). The relative expression of osteocalcin m RNA was higher than that of the other three groups (P0.05); (4) and the mineralization degree of extracellular matrix in the combination group was higher than that in the other three groups (P0.05); (5). The results showed that the platelet-rich plasma of ng/L could promote the proliferation and osteogenic differentiation of human umbilical cord mesenchymal stem cells.
【作者單位】： 鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院骨科;鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院神經(jīng)外科;
【基金】：河南省醫(yī)學(xué)科技攻關(guān)計劃項目(201503206)~~
【分類號】：R329.2

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