【摘要】：目的:了解人冠狀病毒OC43(Human coronavirus OC43,HCoV-OC43)逃避人樹突狀細胞(Dendritic cell,DC)免疫監(jiān)視作用的初步機制。方法:利用HCoV-OC43陽性病人的標本感染BSC-1細胞分離OC43病毒,相差顯微鏡觀察細胞病變(Cytopathic effect,CPE),實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time PCR)進行鑒定;利用人細胞因子GM-CSF和IL-4聯(lián)合體外誘導(dǎo)DC分化,于誘導(dǎo)7 d后用HCoV-OC43病毒感染DC。采用透射電鏡觀察DC感染后的形態(tài),Real-time PCR檢測DC功能相關(guān)細胞因子的表達水平;流式細胞術(shù)檢測DC比例及其功能相關(guān)共刺激分子的表達。結(jié)果:成功建立HCoV-OC43體外感染DC的體系。HCoV-OC43能感染DC并刺激其產(chǎn)生免疫應(yīng)答,但培養(yǎng)上清中不能檢測到病毒核酸;HCoV-OC43感染會導(dǎo)致DC細胞表達IFN-α、IFN-β、CCL3和CCL5的量顯著下調(diào),但其共刺激分子HLA-DR、CD1c和CD86的表達不受抑制。結(jié)論:HCoVOC43可感染人DC細胞并刺激其產(chǎn)生免疫應(yīng)答,但不能產(chǎn)生活的子代病毒;HCoV-OC43可通過抑制宿主DC細胞IFN-α等相關(guān)炎癥因子和趨化因子的分泌,來實現(xiàn)免疫逃逸。
[Abstract]:Aim: to investigate the mechanism of human coronavirus OC43 (Human coronavirus OC43 (HCoV-OC43) escaping the immune surveillance of human Dendritic cells. Methods: OC43 virus was isolated from BSC-1 cells infected with HCoV-OC43 positive patients, detected by phase contrast microscope and identified by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (Real-time PCR), differentiation of DC was induced by human cytokine GM-CSF and IL-4 combination. After 7 days of induction, DC2 was infected with HCoV-OC43 virus. The expression of DC function-related cytokines and the ratio of DC and the expression of function-related costimulatory molecules were detected by transmission electron microscopy (TEM) and real-time PCR. Results: the system of DC infected with HCoV-OC43 in vitro. HCoV-OC43 could infect DC and stimulate its immune response. However, the infection of HCoV-OC43 could significantly down-regulate the expression of IFN- 偽 -IFN- 尾 CCL3 and CCL5 in DC cells. However, the expression of HLA-DRN CD1c and CD86 was not inhibited. ConclusionHCoVOC43 can infect human DC cells and stimulate them to produce immune response, but HCoV-OC43 can prevent immune escape by inhibiting the secretion of IFN- 偽 and other related inflammatory factors and chemokines in host DC cells.
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)學(xué)院病原生物學(xué)與免疫學(xué)教研室;中山大學(xué)熱帶病防治研究教育部重點實驗室;中山大學(xué)香港大學(xué)粵港傳染病監(jiān)測聯(lián)合實驗室;中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院MICU室;
【基金】：國家傳染病防治科技重大專項(No.2012ZX10004-213) 國家自然科學(xué)基金項目(No.81000230) 廣東省自然科學(xué)基金青年項目(No.A030310282)資助
【分類號】：R392

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本文編號：2199367