【摘要】：目的研究陽(yáng)離子脂質(zhì)體DOTAP佐劑對(duì)H5N1型流感病毒裂解疫苗免疫效果的影響。方法制備DOTAP陽(yáng)離子脂質(zhì)體流感病毒裂解疫苗(簡(jiǎn)稱(chēng)DOTAP流感裂解疫苗),檢測(cè)其包封率。將BALB/c小鼠分為13組,分別用含0.1、1.0、10.0μg HA/只劑量以DOTAP、Al(OH)3、CPG-ODN為佐劑以及不含佐劑的流感裂解疫苗于0、21天皮下免疫,PBS作為對(duì)照組,用血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)小鼠初次免疫后21、42天血清HI抗體滴度;用ELISA檢測(cè)初次免疫后21、42天血清特異性IgG抗體、IgG1、IgG2a亞類(lèi)抗體滴度,以及初次免疫后42天小鼠脾臟單個(gè)核細(xì)胞體外經(jīng)抗原刺激后細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ的分泌水平。將BALB/c小鼠分為3組,分別用含不同DOTAP劑量(100、300、600μg/只)的DOTAP流感裂解疫苗于0、21天皮下免疫,檢測(cè)初次免疫后21、42天小鼠血清HI抗體滴度和IgG抗體滴度。結(jié)果 DOTAP流感裂解疫苗粒徑在300~400 nm,帶正電荷,包封率在50%以上;DOTAP流感裂解疫苗誘導(dǎo)的HI抗體水平和特異性IgG抗體水平均高于流感裂解疫苗,而與鋁佐劑和Cp G-ODN佐劑間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;DOTAP流感裂解疫苗產(chǎn)生的抗體仍以IgG1亞類(lèi)抗體為主,免疫后42天誘導(dǎo)的IgG2a亞類(lèi)抗體水平高于流感裂解疫苗和鋁佐劑,低于Cp G-ODN佐劑;DOTAP流感裂解疫苗免疫后既分泌高水平Th1型細(xì)胞因子IFN-γ,同時(shí)也分泌高水平Th2型細(xì)胞因子IL-4;不同DOTAP劑量的DOTAP流感裂解疫苗免疫后,其HI抗體滴度和IgG抗體滴度在低、中、高劑量組之間存在明顯的量效關(guān)系。結(jié)論 DOTAP作為H5N1型流感病毒裂解疫苗的佐劑可顯著提高流感裂解疫苗的免疫原性,其對(duì)體液免疫應(yīng)答的增強(qiáng)作用不低于鋁佐劑和Cp G-ODN佐劑,并具有誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答的能力。
[Abstract]:Objective to study the effect of cationic liposome DOTAP adjuvant on immune response of H5N1 influenza virus lytic vaccine. Methods DOTAP cationic liposome influenza virus lytic vaccine (DOTAP vaccine) was prepared and its entrapment efficiency was determined. BALB/c mice were divided into 13 groups. BALB/c mice were subcutaneously immunized with dotapride Al (OH) 3G ODN as adjuvant and influenza cleavage vaccine without adjuvant for 21 days. Hemagglutination inhibition test was used to detect HI antibody titer of serum 2142 days after primary immunization. ELISA was used to detect the titer of serum specific IgG antibody IgG2a on day 21 and 42 after primary immunization, as well as the level of cytokine IL-2mIL-4 and IFN- 緯 in splenic mononuclear cells (SMC) stimulated by antigen on day 42 after primary immunization. BALB/c mice were subcutaneously immunized with DOTAP vaccine containing different doses of DOTAP (100300600 渭 g / mouse) for 21 days. The serum HI antibody titer and IgG antibody titer were detected 21 ~ 42 days after the first immunization. Results the HI antibody level and specific IgG antibody level induced by DOTAP influenza lytic vaccine were higher than those of influenza lytic vaccine with positive charge and encapsulation efficiency of more than 50%. However, there was no significant difference between the vaccine and aluminum adjuvant and CP G-ODN adjuvant. The antibody produced by DOTAP influenza cleavage vaccine was still dominated by IgG1 subclass antibody. The level of IgG2a subclass antibody induced 42 days after immunization was higher than that of influenza cleavage vaccine and aluminum adjuvant. Lower than CP G-ODN adjuvant dotap influenza lytic vaccine not only secreted high level of Th1 cytokine IFN- 緯, but also secreted high level of Th2 cytokine IL-4.The HI antibody titer and IgG antibody titer of DOTAP influenza lytic vaccine with different DOTAP dosages were low. There was a significant dose-effect relationship between medium and high dose groups. Conclusion DOTAP, as an adjuvant of H5N1 influenza virus lytic vaccine, can significantly improve the immunogenicity of influenza lytic vaccine, and its effect on humoral immune response is no less than that of aluminum adjuvant and CP G-ODN adjuvant, and it has the ability to induce cellular immune response.
【作者單位】： 武漢生物制品研究所有限責(zé)任公司病毒性疫苗研究二室;
【基金】：國(guó)家重大新藥創(chuàng)制項(xiàng)目(2014ZX09102045-011)
【分類(lèi)號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2174879