【摘要】：【目的】研究siRNA(small interfering RNA)對(duì)細(xì)胞紅蛋白(Cytoglobin,CYGB)基因表達(dá)的抑制作用�！痉椒ā咳⌒律笫蠛ｑR做神經(jīng)元原代培養(yǎng),NeuN免疫熒光抗體鑒定神經(jīng)元純度后,通過陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑將體外化學(xué)合成的針對(duì)CYGB基因的siRNA轉(zhuǎn)入細(xì)胞中,以未轉(zhuǎn)入siRNA細(xì)胞及轉(zhuǎn)入陰性siRNA細(xì)胞為對(duì)照,通過轉(zhuǎn)染熒光對(duì)照siRNA檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,用RT-PCR方法檢測(cè)siRNA對(duì)CYGB表達(dá)的抑制作用�！窘Y(jié)果】成功體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元,轉(zhuǎn)染熒光對(duì)照siRNA結(jié)果示轉(zhuǎn)染效率在70%左右,RT-PCR結(jié)果提示與陰性對(duì)照及空白對(duì)照相比,轉(zhuǎn)染siRNA-78后24 h(P0.01),48 h(P0.001)及60 h(P0.001)CYGB mRNA的表達(dá)明顯減弱,72 h后表達(dá)無明顯減少。而轉(zhuǎn)染siR-NA-79,siRNA-80在各時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照相比沒有明顯差別(P0.05)�！窘Y(jié)論】特異性針對(duì)CYGB的siRNA-78轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)元24~60 h能顯著下調(diào)CYGB基因的表達(dá)。
[Abstract]:[objective] to study the inhibitory effect of siRNA (small interfering RNA) on the expression of Cyb gene. [methods] Neun immunofluorescence antibody was used to identify the purity of the neurons from hippocampal neurons of newborn rats. The chemically synthesized siRNA targeting CYGB gene was transferred into the cells by cationic liposome transfection reagents. The transfection efficiency was detected by transfection of siRNA, which was not transfected into siRNA cells and negative siRNA cells. RT-PCR method was used to detect the inhibitory effect of siRNA on the expression of CYGB. [results] Hippocampal neurons were successfully cultured in vitro. The transfection efficiency of fluorescent control siRNA was about 70%. The results of RT-PCR showed that compared with negative control and blank control, the transfection efficiency was about 70%. 24 h (P0.01) 48 h (P0. 001) and 60 h (P0. 001) after siRNA-78 transfection, the expression of P0. 001) CYGB mRNA decreased significantly, and the expression of P0. 001) CYGB mRNA did not decrease after 72 h. However, there was no significant difference between siR-NA-79 siRNA-80 and control at each time point (P0.05). [conclusion] the expression of CYGB gene was significantly down-regulated in rat hippocampal neurons transfected with CYGB specific siRNA-78 for 2460 h.
【作者單位】： 汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院兒科;
【基金】：廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2008B080701036) 廣東省醫(yī)學(xué)科研基金立項(xiàng)(B2009180)
【分類號(hào)】：Q343

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2163619