【摘要】：目的1.尋找出適用于研究細粒棘球蚴的蛋白組學實驗方法,獲得較為理想的細粒棘球絳蟲原頭蚴、囊壁組織的雙向電泳圖譜。2、運用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)獲取各蛋白點的肽指紋圖譜(PMF)。3、利用生物信息學技術對原頭蚴、囊壁的蛋白質(zhì)組分進行配比分析,了解細粒棘球蚴蛋白質(zhì)的構(gòu)成和種類,并將這些蛋白質(zhì)進行功能劃分。最終,為抗包蟲病疫苗研究、早期診斷方法的研究和包蟲病新型藥物作用靶蛋白的篩選提供研究資料。 方法采用研磨法處理各樣本組織,并用Bradford法對其進行蛋白定量。按照樣品中各蛋白質(zhì)等電點和分子量大小的不同,將蛋白樣品進行雙向電泳分離。然后利用凝膠成像掃描儀采集并保存雙向電泳圖像,并使用PDQuest軟件分析各蛋白點的相關數(shù)據(jù)。最后,將凝膠置于自動切膠儀中,通過軟件選取切割的目標蛋白,切膠儀將自動切取、收集膠粒。膠粒需經(jīng)胰蛋白酶酶解處理后,使得蛋白裂解為多個肽段。再通過MALDI-TOF的檢測,獲得各蛋白的肽指紋圖譜(PMF)數(shù)據(jù)。將該PMF數(shù)據(jù)與各數(shù)據(jù)庫中的蛋白數(shù)據(jù)相配比,并初步鑒定各蛋白組分的性質(zhì)。 結(jié)果1.在原頭蚴、囊壁組織的雙向電泳圖中,分別分離出233個和107個蛋白點。2.各蛋白點通過MALDI-TOF-MS檢測,原頭蚴和囊壁分別有106個蛋白點和42個蛋白點成功獲得肽指紋圖譜(PMF)。3.原頭蚴蛋白點中共有23個蛋白點得以初步鑒定,包括有:①細胞骨架蛋白:肌動蛋白、原肌球蛋白、肌球蛋白、副肌球蛋白、動力蛋白激活蛋白。②代謝相關酶類:過氧化物還原酶、轉(zhuǎn)酮醇酶、磷脂酶A2、糖原合成酶。③信號轉(zhuǎn)導蛋白:鈣結(jié)合蛋白、酪氨酸蛋白激酶、絲/蘇氨酸蛋白磷酸酶。④物質(zhì)轉(zhuǎn)運相關蛋白:細胞色素C、ADP/ATP運輸?shù)鞍�、脂肪酸結(jié)合蛋白;囊壁蛋白點中共有14個蛋白點得到初步鑒定,它們是:①信號轉(zhuǎn)導蛋白:鈣結(jié)合蛋白、酪氨酸蛋白激酶、絲/蘇氨酸蛋白磷酸酶。②代謝相關酶類:過氧化物還原酶、轉(zhuǎn)酮醇酶、磷脂酶A2。③物質(zhì)轉(zhuǎn)運相關蛋白:細胞色素P450、脂肪酸結(jié)合蛋白、載脂蛋白A-I以及白蛋白。 結(jié)論1.已總結(jié)出一套適用于研究細粒棘球蚴蛋白組學的實驗方案,獲得質(zhì)量較好的原頭蚴、囊壁的雙向電泳圖譜,分別分離到233個及107個蛋白點。2.獲取原頭蚴、囊壁共計106個和42個蛋白點的肽指紋圖譜以及相關數(shù)據(jù)。3.初步鑒定了細粒棘球蚴原頭蚴、囊壁組織中的部分蛋白點,其中,原頭蚴中共有23個蛋白點,囊壁中有14個蛋白點。這些蛋白可能與細粒棘球蚴運動、生長、發(fā)育、代謝調(diào)控等方面有關。
[Abstract]:Objective 1. To find out the method of proteomics experiment suitable for studying Echinococcus granulosus, and obtain the more ideal echinococci of Echinococcus granulosus (Echinococcus granulosus). Two-dimensional electrophoretic map of cystic wall tissue. (PMF). 3 peptide fingerprinting of each protein point was obtained by matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS). The protein components of protocercaria and cyst wall were analyzed by bioinformatics. To understand the composition and species of echinococcus granulosus proteins and to divide these proteins into functions. Finally, the research data are provided for the study of anti-hydatid vaccine, early diagnosis and screening of target proteins for new drug action of hydatid disease. Methods the samples were treated by grinding and the protein was quantified by Bradford. Protein samples were separated by two-dimensional electrophoresis according to their isoelectric point and molecular weight. Then the gel imaging scanner was used to collect and save the two-dimensional electrophoresis images, and the PDQuest software was used to analyze the relevant data of each protein point. Finally, the gel was placed in the automatic gel cutter, and the target protein was selected by software. After enzymatic hydrolysis of gelatin, the protein was split into multiple peptide segments. The peptide fingerprint (PMF) data of each protein were obtained by MALDI-TOF detection. The PMF data were matched with the protein data in each database, and the properties of each protein component were preliminarily identified. Result 1. 233 protein spots and 107 protein spots were isolated from the two dimensional electrophoretogram of the metacercariae and cystic wall tissues, respectively. The peptide fingerprinting (PMF). 3) was successfully obtained from 106 protein spots and 42 protein spots of procaria and cyst wall by MALDI-TOF-MS detection. A total of 23 protein spots were preliminarily identified, including 1: 1 cytoskeleton proteins: actin, promyosin, accessory myosin, Dynamic protein Activator protein 2 Metabolism related enzymes: peroxidase reductase, transketonase, phospholipase A2, glycogen synthase .3 signal transduction protein: calcium binding protein, tyrosine protein kinase, Silk / threonine protein phosphatase .4 substance transporter associated protein: cytochrome Con ADP / ATP transport protein, fatty acid binding protein; Cystoid protein site, 14 protein spots were preliminarily identified, they are the signal transduction protein of 1: calcium binding protein. Tyrosine protein kinase, silk / threonine protein phosphatase .2 metabolization-related enzymes: peroxidase, transketonase, phospholipase A2.3 substance transporter associated protein: cytochrome P450, fatty acid binding protein, Apolipoprotein A-I and albumin. Conclusion 1. A set of experimental schemes suitable for studying the proteomics of Echinococcus granulosus have been summarized, and a two-dimensional electrophoresis map of the hydatid and cyst wall has been obtained, and 233 and 107 protein spots, respectively, have been isolated. The peptide fingerprints of 106 and 42 protein spots were obtained and the related data. 3. 3. Some protein spots in the cyst wall of Echinococcus granulosus were preliminarily identified. Among them, there were 23 protein spots in the echinococcus and 14 protein spots in the wall of the cyst. These proteins may be related to the movement, growth, development and metabolic regulation of echinococcus granulosus.
【學位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R392

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