【摘要】：目的原核表達(dá)及純化梅毒螺旋體(Treponema palludim,Tp)熱休克蛋白10(Heat shock protein 10,Hsp10)。方法利用Clustal Omega軟件對Tp與其他物種的Hsp10蛋白進(jìn)行多序列比對并運(yùn)用生物信息學(xué)方法分析Hsp10蛋白親水性和結(jié)構(gòu)。設(shè)計特異性引物,以Tp基因組為模板,PCR擴(kuò)增Hsp10基因。回收PCR產(chǎn)物并用EcoRI和HindIII雙酶切,酶切片段與同樣酶切的質(zhì)粒pET28a相連,構(gòu)建表達(dá)重組質(zhì)粒pET28a-Hsp10,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21(DE3),采用IPTG誘導(dǎo)重組Hsp10蛋白表達(dá),用鎳離子柱純化目的蛋白。結(jié)果 Tp Hsp10基因編碼蛋白是一個親水性蛋白,α-螺旋、無規(guī)卷曲和β片層分別占5.7%、47.7%和45.4%,三級結(jié)構(gòu)與結(jié)核分枝桿菌Hsp10(PDB:1p3h.1.C)類似,可由7個Hsp10組成一個圓形結(jié)構(gòu)。PCR擴(kuò)增獲得的Hsp10基因全長為267bp,連接到表達(dá)載體pET28a得到重組質(zhì)粒pET28a-Hsp10,編碼含His標(biāo)簽的重組Hsp10蛋白。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá)分子質(zhì)量單位為13.7ku的重組Tp Hsp10蛋白,與理論值相符。重組蛋白經(jīng)鎳離子柱層析純化,獲得單一條帶的Hsp10。結(jié)論成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pET28a-Hsp10并表達(dá)和純化獲得Hsp10蛋白,為研究其功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to express and purify heat shock protein 10 (Heat shock protein 10 Hsp10 from Treponema palludimica pallidum. Methods Clustal Omega software was used to analyze the hydrophilicity and structure of Hsp10 protein from TP and other species. Specific primers were designed to amplify Hsp10 gene using TP genome as template. The recombinant plasmid pET28a-Hsp10 was constructed. The recombinant plasmid pET28a-Hsp10 was transformed into Escherichia coli BL21 (DE3). IPTG was used to induce the expression of the recombinant Hsp10 protein, and the target protein was purified by nickel ion column. Results the protein encoded by TP Hsp10 gene was a hydrophilic protein, 偽 -helix, random coil and 尾 -lamella, accounting for 47.7% and 45.4%, respectively. The tertiary structure was similar to that of Mycobacterium tuberculosis Hsp10 (PDB:1p3h.1.C). The total length of Hsp10 gene was 267bp. it was ligated to the expression vector pET28a to obtain the recombinant plasmid pET28a-Hsp10, which encoded the recombinant Hsp10 protein containing His tag. The recombinant plasmid transformed into Escherichia coli BL21 (DE3) induced the expression of recombinant TP Hsp10 protein with the molecular weight unit of 13.7ku, which was consistent with the theoretical value. The recombinant protein was purified by nickel ion column chromatography and a single band Hsp10 was obtained. Conclusion the recombinant plasmid pET28a-Hsp10 was successfully constructed, the Hsp10 protein was expressed and purified, which laid a foundation for the study of its function.
【作者單位】： 中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院檢驗科;湖南中醫(yī)藥高等�？茖W(xué)校附屬第一醫(yī)院檢驗科(湖南省直中醫(yī)醫(yī)院);中南大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院寄生蟲學(xué)系;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項目(No.81371834) 湖南省科技廳項目(No.2014SK3068)
【分類號】：R377.1

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本文編號：2145644