【摘要】：目的原核表達(dá)及純化梅毒螺旋體(Treponema palludim,Tp)熱休克蛋白10(Heat shock protein 10,Hsp10)。方法利用Clustal Omega軟件對(duì)Tp與其他物種的Hsp10蛋白進(jìn)行多序列比對(duì)并運(yùn)用生物信息學(xué)方法分析Hsp10蛋白親水性和結(jié)構(gòu)。設(shè)計(jì)特異性引物,以Tp基因組為模板,PCR擴(kuò)增Hsp10基因�；厥誔CR產(chǎn)物并用EcoRI和HindIII雙酶切,酶切片段與同樣酶切的質(zhì)粒pET28a相連,構(gòu)建表達(dá)重組質(zhì)粒pET28a-Hsp10,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21(DE3),采用IPTG誘導(dǎo)重組Hsp10蛋白表達(dá),用鎳離子柱純化目的蛋白。結(jié)果 Tp Hsp10基因編碼蛋白是一個(gè)親水性蛋白,α-螺旋、無(wú)規(guī)卷曲和β片層分別占5.7%、47.7%和45.4%,三級(jí)結(jié)構(gòu)與結(jié)核分枝桿菌Hsp10(PDB:1p3h.1.C)類似,可由7個(gè)Hsp10組成一個(gè)圓形結(jié)構(gòu)。PCR擴(kuò)增獲得的Hsp10基因全長(zhǎng)為267bp,連接到表達(dá)載體pET28a得到重組質(zhì)粒pET28a-Hsp10,編碼含His標(biāo)簽的重組Hsp10蛋白。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá)分子質(zhì)量單位為13.7ku的重組Tp Hsp10蛋白,與理論值相符。重組蛋白經(jīng)鎳離子柱層析純化,獲得單一條帶的Hsp10。結(jié)論成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pET28a-Hsp10并表達(dá)和純化獲得Hsp10蛋白,為研究其功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to express and purify heat shock protein 10 (Heat shock protein 10 Hsp10 from Treponema palludimica pallidum. Methods Clustal Omega software was used to analyze the hydrophilicity and structure of Hsp10 protein from TP and other species. Specific primers were designed to amplify Hsp10 gene using TP genome as template. The recombinant plasmid pET28a-Hsp10 was constructed. The recombinant plasmid pET28a-Hsp10 was transformed into Escherichia coli BL21 (DE3). IPTG was used to induce the expression of the recombinant Hsp10 protein, and the target protein was purified by nickel ion column. Results the protein encoded by TP Hsp10 gene was a hydrophilic protein, 偽 -helix, random coil and 尾 -lamella, accounting for 47.7% and 45.4%, respectively. The tertiary structure was similar to that of Mycobacterium tuberculosis Hsp10 (PDB:1p3h.1.C). The total length of Hsp10 gene was 267bp. it was ligated to the expression vector pET28a to obtain the recombinant plasmid pET28a-Hsp10, which encoded the recombinant Hsp10 protein containing His tag. The recombinant plasmid transformed into Escherichia coli BL21 (DE3) induced the expression of recombinant TP Hsp10 protein with the molecular weight unit of 13.7ku, which was consistent with the theoretical value. The recombinant protein was purified by nickel ion column chromatography and a single band Hsp10 was obtained. Conclusion the recombinant plasmid pET28a-Hsp10 was successfully constructed, the Hsp10 protein was expressed and purified, which laid a foundation for the study of its function.
【作者單位】： 中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院檢驗(yàn)科;湖南中醫(yī)藥高等�？茖W(xué)校附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科(湖南省直中醫(yī)醫(yī)院);中南大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院寄生蟲學(xué)系;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(No.81371834) 湖南省科技廳項(xiàng)目(No.2014SK3068)
【分類號(hào)】：R377.1

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 馬強(qiáng);耿焱;黃茂梁;吳英松;李明;;梅毒螺旋體0751基因的克隆、表達(dá)及鑒定[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2011年06期

2 楊秋;揭開梅毒螺旋體的基因真相[J];國(guó)外科技動(dòng)態(tài);1999年05期

3 強(qiáng)軍,張會(huì)孝,張經(jīng)華;對(duì)一例涉外梅毒螺旋體感染者的處理[J];口岸衛(wèi)生控制;2000年02期

4 黃建香 ,余崇鎬 ,林偉珍;梅毒螺旋體的檢測(cè)結(jié)果分析[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2002年11期

5 周毅;老年梅毒螺旋體感染51例調(diào)查與分析[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)藥雜志;2004年05期

6 劉鵬,馮國(guó)基;梅毒螺旋體的檢測(cè)技術(shù)與應(yīng)用現(xiàn)狀[J];實(shí)用醫(yī)藥雜志;2005年10期

7 王華;雷麗明;李代渝;;梅毒螺旋體血清學(xué)檢測(cè)方法及應(yīng)用[J];實(shí)用診斷與治療雜志;2006年09期

8 孔秋虹;;不同檢測(cè)方法對(duì)梅毒螺旋體感染的評(píng)價(jià)[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2008年07期

9 凌聰;;三種梅毒螺旋體檢測(cè)方法的臨床評(píng)價(jià)[J];河北醫(yī)學(xué);2008年03期

10 韓潔;張海萍;朱威;連石;;梅毒螺旋體相關(guān)膜蛋白的研究進(jìn)展[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2010年10期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 張俊艷;劉全忠;;梅毒螺旋體的檢測(cè)方法及應(yīng)用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

2 李秀玉;王培昌;楊瓏;李文軍;;梅毒螺旋體檢測(cè)方法及應(yīng)用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)管理專業(yè)委員會(huì)第六屆全國(guó)臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

3 許友強(qiáng);李慧源;;梅毒螺旋體特異性IgG抗體親和力的測(cè)定及其臨床意義的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)成立30周年慶典大會(huì)資料匯編[C];2009年

4 莊亦暉;陳瑜;蔣燕群;;Determine Syphilis TP方法在梅毒螺旋體血清學(xué)診斷中的臨床評(píng)價(jià)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)成立30周年慶典大會(huì)資料匯編[C];2009年

5 唐書謙;葉慶佾;;剛果紅染色法檢查梅毒螺旋體[A];2003中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2003年

6 王林娜;鄭和義;;梅毒螺旋體基因檢測(cè)以及治療前后螺旋體DNA載量變化的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第14次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

7 劉雙全;趙飛駿;張秋桂;吳移謀;;梅毒螺旋體Tp0751黏附蛋白的表達(dá)、純化及免疫活性研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)成立30周年慶典大會(huì)資料匯編[C];2009年

8 梁平;湯伍輝;邵群;李慧英;李彬;魏建萍;;梅毒螺旋體IgM蛋白印跡試驗(yàn)診斷先天性梅毒評(píng)價(jià)[A];江西省第五次中西醫(yī)結(jié)合皮膚科學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2006年

9 莫穎;林晶;陳萬(wàn);梁云燕;劉曉芳;關(guān)善斌;梁綱;莫書榮;;吸毒者與HCV、HIV及梅毒螺旋體感染的相關(guān)研究[A];中南地區(qū)第六屆生理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2004年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 江西醫(yī)學(xué)院二附院 主任醫(yī)師 俞景明;梅毒螺旋體：我的自白[N];家庭醫(yī)生報(bào);2004年

2 湖南省性病控制中心 丁勝非;怎樣看梅毒化驗(yàn)單[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2000年

3 本報(bào)記者 李振輝 通訊員 劉東紅;哪些性病癥狀 會(huì)表現(xiàn)在眼部[N];廣東科技報(bào);2008年

4 由它;眼睛也會(huì)被性病毒傷害[N];保健時(shí)報(bào);2005年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 田洪青;山東地區(qū)梅毒螺旋體基因分型研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

2 蔣傳好;梅毒螺旋體鞭毛蛋白免疫活性分析及其誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶的分子機(jī)制[D];南華大學(xué);2016年

3 張良芬;編碼梅毒螺旋體47-、17-和15kD脂蛋白的基因克隆、表達(dá)及表達(dá)產(chǎn)物反應(yīng)原性的初步鑒定[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2001年

4 戴婷;上海地區(qū)梅毒患者梅毒螺旋體基因分型及與神經(jīng)梅毒相關(guān)性的初步研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

5 龍福泉;梅毒螺旋體膜蛋白的表達(dá)、純化及其免疫活性的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 薛愛鳳;萊城區(qū)育齡婦女孕前五種病原體感染狀況及相關(guān)因素分析[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2014年

2 甘霖;梅毒螺旋體膜蛋白Tp92致炎作用機(jī)制的初步研究[D];南華大學(xué);2015年

3 朱洪;梅毒螺旋體粘附素Tp0751重組菌影制備與免疫活性的初步研究[D];南華大學(xué);2015年

4 劉瓊;梅毒螺旋體金屬蛋白酶的表達(dá)及對(duì)纖維蛋白原水解活性研究[D];南華大學(xué);2015年

5 湯鎮(zhèn);重慶地區(qū)梅毒螺旋體基因分型及其臨床相關(guān)性研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

6 史金龍;新疆梅毒螺旋體大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥基因突變位點(diǎn)23SrRNA2058G檢測(cè)[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2016年

7 肖海璐;梅毒螺旋體耐四環(huán)素類抗生素耐藥基因突變位點(diǎn)檢測(cè)[D];濟(jì)南大學(xué);2016年

8 陳潔;梅毒螺旋體的免疫組化法檢測(cè)意義[D];浙江大學(xué);2012年

9 李珍;梅毒螺旋體大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥基因突變位點(diǎn)檢測(cè)[D];濟(jì)南大學(xué);2014年

10 肖潔;梅毒螺旋體特異診斷抗原的篩選、制備及臨床應(yīng)用初探[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

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本文編號(hào)：2145644