【摘要】：目的:分析Δ42PD1胞外區(qū)的免疫原性。方法:將Δ42PD1胞外區(qū)編碼基因分為6個片段,分別用PCR的方法進(jìn)行擴(kuò)增,并克隆至酵母表面展示質(zhì)粒p CTCON2。分別將重組酵母表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞,涂布SDCAA平板,挑取單細(xì)胞克隆于SGCAA培養(yǎng)基中誘導(dǎo)目的基因的表達(dá)。通過肌肉注射Δ42PD1真核表達(dá)質(zhì)粒加局部電穿孔的方法免疫BALB/c小鼠,制備鼠抗人Δ42PD1免疫血清。用流式細(xì)胞術(shù)的方法分析免疫血清與酵母表面展示的Δ42PD1多肽片段的結(jié)合。結(jié)果:PCR擴(kuò)增的Δ42PD1的6個片段的編碼序列全長均110 bp,核酸序列分析顯示克隆的目的基因與Gen Bank中已經(jīng)登記的PD1基因序列100%同源;流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果發(fā)現(xiàn)酵母表面展示的Δ42PD1的F3和F2片段可與Δ42PD1的免疫血清發(fā)生明顯結(jié)合。結(jié)論:Δ42PD1的F3和F2片段是該分子的免疫優(yōu)勢區(qū)域,為制備Δ42PD1的單克隆抗體及表位篩選奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective: to analyze the immunogenicity of 螖 42 PD1 extracellular domain. Methods: the encoding gene of 螖 42PD1 extracellular domain was divided into six fragments and amplified by PCR and cloned into yeast surface display plasmid pCTCON2. The recombinant yeast expression plasmids were transformed into yeast cells and coated with SDCAA plate. The single cells were selected and cloned into SGCAA medium to induce the expression of the target gene. BALB / c mice were immunized by intramuscular injection of 螖 42PD1 eukaryotic expression plasmid and local electroporation to prepare mouse anti-human 螖 42PD1 immune serum. The binding of immune serum to 螖 42PD1 polypeptide fragment displayed on yeast surface was analyzed by flow cytometry. Results the six fragments of 螖 42PD1 amplified by 10% PCR were all 110bp in length. The nucleic acid sequence analysis showed that the cloned target gene was 100% homologous to the PD1 gene previously registered in GenBank. The results of flow cytometry showed that the F3 and F2 fragments of 螖 42PD1 displayed on the surface of yeast could bind to the immune serum of 螖 42PD1. Conclusion: the F _ 3 and F _ 2 fragments of 螖 42PD1 are the dominant immunological regions of 螖 42PD1, which lays a foundation for the preparation of monoclonal antibodies against 螖 42PD1 and the screening of epitopes.
【作者單位】： 深圳市第三人民醫(yī)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31500750) 廣東省自然科學(xué)基金(2016A030313030) 深圳市科技創(chuàng)新基金(JCYJ20140411111718162,JCYJ20150402111430650)資助項目
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2138416