【摘要】：mTORC2隸屬于PTEN/PI3K/AKT/mTOR信號通路,尤其是mTOR信號通路的過度活化與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),是腫瘤治療的一個(gè)重要靶點(diǎn)。近年來隨著臨床上這類小分子抑制劑的出現(xiàn),使得人們對它的興趣越來越大,對Rictor和mTORC2相關(guān)的報(bào)道越來越多。Rictor是作為mTORC2腳手架的一個(gè)蛋白出現(xiàn),共同和其他的五個(gè)蛋白維持著mTORC2的穩(wěn)定。mTORC2在許多重要的生理學(xué)過程中扮演重要角色,包括：細(xì)胞生存、代謝、增殖、細(xì)胞骨架的合成等,但是相對于mTORC1來說,mTORC2有更多未知的部分需要我們?nèi)ヌ剿?比如說mTORC2的上游信號通路有哪些,它們是如何激活mTORC2的,Rictor是否維持mTORC2的穩(wěn)定?在mTORC2中扮演什么角色?目前這一部分尚屬空白,查閱相關(guān)文獻(xiàn)沒有確鑿證據(jù),這些都是很有趣的話題。 運(yùn)用斑馬魚模式生物研究Rictor的基因功能,首先我們應(yīng)用生物信息學(xué)的方法,證明斑馬魚Rictor基因在進(jìn)化上高度保守,為脊椎動(dòng)物保守基因,為其后續(xù)在造血系統(tǒng)和造血微環(huán)境方面的研究提供了理論支持和鋪墊。整胚胎原位雜交技術(shù)廣泛運(yùn)用于基因表達(dá)譜,是研究斑馬魚發(fā)育,探索相關(guān)基因的功能的重要手段。本研究根據(jù)斑馬魚rictor mRNA設(shè)計(jì)構(gòu)建合成反義RNA探針,整胚胎原位雜交技術(shù)分析了rictor在斑馬魚早期發(fā)育過程中(時(shí)間和空間上)的表達(dá)情況,Zrictor在胚胎的單胞期就開始表達(dá),24小時(shí)特異性的表達(dá)于脊索,48到72小時(shí)特異性的表達(dá)與神經(jīng)管和肌節(jié)。通過反義嗎啉代寡核苷酸MO(低表達(dá))抑制Zrictor后,結(jié)果發(fā)現(xiàn)mo注射組斑馬魚胚胎出現(xiàn)很少量的心包積液和身體彎曲(主要在尾部),并且在發(fā)育早期呈現(xiàn)一定的發(fā)育滯后。顯微注射前后斑馬魚時(shí)空表達(dá)的差異,在血液系統(tǒng)的marker和心臟marker里面沒有出現(xiàn)明顯的變化,但是Fli-1在節(jié)間血管有輕微變化,肌肉的表達(dá)(myod)有所減少；有心包積液的斑馬魚胚胎用o-staining檢測循環(huán)形成后斑馬魚的血紅蛋白的分布表達(dá)變化,顯示血紅蛋白的沉積減少。 在提倡小分子抑制劑只對腫瘤起效,而不影響正常組織功能的情況下,Rictor是否是合適的打靶對象?我們在體內(nèi)驗(yàn)證了rictor被MO抑制后對正常組織和造血系統(tǒng)的影響,可能為臨床血液病和腫瘤治療的新靶點(diǎn)。
[Abstract]:MTORC2 belongs to the PTEN / PI3K / AKT / mTOR signaling pathway, especially the overexpression of mTOR signaling pathway is closely related to the occurrence and development of tumor, and is an important target of tumor therapy. In recent years, with the emergence of such small molecular inhibitors in clinic, people are more and more interested in it. More and more reports about Rictor and mTORC2. Rictor is a protein of mTORC2 scaffold. The common and other five proteins maintain the stability of mTORC2. MTORC2 plays an important role in many important physiological processes, including cell survival, metabolism, proliferation, cytoskeleton synthesis, etc. But there are more unknown parts of mTORC2 than mTORC1. For example, what are the upstream signaling pathways of mTORC2, and how do they activate the Rictor of mTORC2 to maintain the stability of mTORC2? What role do you play in mTORC2? At present, this part is still blank, there is no conclusive evidence to consult the relevant literature, these are very interesting topics. Using zebrafish model organisms to study the gene function of Rictor, we first use bioinformatics method to prove that the zebrafish Rictor gene is highly conserved in evolution and belongs to vertebrate conservative gene. It provides theoretical support and foreshadowing for the further study of hematopoietic system and hematopoietic microenvironment. Whole embryo in situ hybridization is widely used in gene expression profiling, which is an important means to study the development of zebrafish and explore the function of related genes. In this study, antisense rictor probes were designed and synthesized from zebrafish. The expression of rictor during the early development of zebrafish (in time and space) was analyzed by in situ hybridization of whole embryo. The expression of nerve tube and muscle ganglion. After inhibition of Zrictor by antisense morpholine oligonucleotide (MO), it was found that a small amount of pericardial effusion and body curvature (mainly in the tail) appeared in the embryos of zebrafish in mo injection group, and showed a certain developmental retardation at the early stage of development. Before and after microinjection, there were no significant changes in marker and cardiac marker in the blood system, but there was a slight change of Fli-1 in internode vessels and a decrease in the expression of (myod) in muscle. The distribution and expression of hemoglobin in zebrafish embryos with pericardial effusion were detected by o-staining. Is Rictor an appropriate target when it is advocated that small molecular inhibitors work only on tumors without affecting normal tissue function? We have confirmed in vivo the effect of rictor suppression by MO on normal tissue and hematopoietic system, which may be a new target for clinical therapy of hematologic diseases and tumors.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R-331

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2118682