本文選題：幽門螺桿菌 + 表位疫苗　； 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2011年博士論文

【摘要】：幽門螺桿菌(H.pylori)是一種定植于人胃和十二指腸粘膜的螺旋形革蘭陰性菌,主要導(dǎo)致慢性胃炎、消化性潰瘍和胃癌。目前臨床治療H.pylori感染的方案,多采用包括兩種抗生素和一種質(zhì)子泵抑制劑的“三聯(lián)療法”,在一定程度上能清除H.pylori感染并治愈潰瘍。雖然抗生素在短期內(nèi)具有較好的根除療效,但抗生素的濫用已導(dǎo)致H.pylori耐藥率逐年上升。H.pylori高耐藥性是導(dǎo)致根除治療失敗的最主要原因,長(zhǎng)此以往,可能出現(xiàn)H.pylori感染無藥可治的嚴(yán)重后果。此外,抗生素療法還存在治療后易復(fù)發(fā)、可再感染和腸道菌群微生態(tài)失衡等不足,大大限制了其使用。在臨床上H.pylori高耐藥性的條件下,新抗生素因其研發(fā)周期長(zhǎng)難以滿足臨床用藥需求,因此,尋求非抗生素的替代療法已迫在眉睫。 目前,國(guó)際上針對(duì)H.pylori感染已廣泛開展免疫治療研究,動(dòng)物和人體試驗(yàn)結(jié)果表明,免疫治療具有清除H.pylori的效果,提示治療性疫苗有希望成為治療或輔助抗生素治療H.pylori感染的方法。H.pylori全菌疫苗(包括滅活全菌和全菌裂解物為抗原的疫苗)非常有效。然而,這種以全菌組分作為抗原的疫苗方式有著嚴(yán)重的局限性,比如菌體中LPS和Lewis抗原可能導(dǎo)致內(nèi)毒素血癥、炎癥反應(yīng)和自身免疫性疾病等嚴(yán)重后果。以重組亞單位為抗原的疫苗和表位疫苗都表現(xiàn)出較好的抗H.pylori作用。目前已經(jīng)確定了一些H.pylori保護(hù)性抗原(如UreB、CagA和VacA等),已作為候選抗原用于開發(fā)H.pylori疫苗。 自然感染H.pylor后,引起Th1細(xì)胞活化,導(dǎo)致胃粘膜發(fā)生炎癥損傷甚至潰瘍。機(jī)體通過Treg細(xì)胞抑制胃粘膜過強(qiáng)的免疫應(yīng)答,這有利于胃粘膜炎癥損傷的修復(fù),但同時(shí)使免疫系統(tǒng)對(duì)H.pylor處于免疫耐受狀態(tài)。CD4+T細(xì)胞在抗H.pylori保護(hù)性免疫中發(fā)揮重要作用的觀點(diǎn)已被廣泛接受,大多數(shù)研究表明:高水平Th1偏向應(yīng)答是保護(hù)性免疫和清除H.pylori感染必需的。治療性疫苗要立足于打破機(jī)體對(duì)H.pylor的免疫耐受,誘導(dǎo)以Th1為主的CD4細(xì)胞免疫應(yīng)答,產(chǎn)生高水平IFN-γ等細(xì)胞因子,進(jìn)一步激活巨噬細(xì)胞等天然免疫,同時(shí)誘導(dǎo)粘膜sIgA應(yīng)答,發(fā)揮清除H.pylori感染和預(yù)防再感染的作用。口服沙門菌載體疫苗可以誘導(dǎo)典型的Th1型應(yīng)答,同時(shí)還能誘導(dǎo)顯著的粘膜sIgA產(chǎn)生。此外,沙門菌還可以通過微皺細(xì)胞(microfold cell,M細(xì)胞)的轉(zhuǎn)胞吞作用或通過樹突狀細(xì)胞(dendritic cell,DC)直接提呈抗原誘導(dǎo)粘膜免疫應(yīng)答。已有大量文獻(xiàn)報(bào)道,表達(dá)外源蛋白抗原的減毒沙門菌活載體疫苗用于抗不同的病原體(包括病毒、細(xì)菌和寄生蟲)感染,在動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)中均取得了良好的效果。 相關(guān)的研究表明,口服免疫重組沙門菌疫苗具有安全性好,免疫原性良好的特點(diǎn)。全長(zhǎng)的H.pylori蛋白分子作為疫苗抗原含有非必要的抗原表位,而且分子量較大,難以表達(dá)和純化。而融合表位抗原易于表達(dá)和純化,融合蛋白疫苗是一種新的疫苗策略,可用于增強(qiáng)對(duì)多抗原組分的優(yōu)勢(shì)抗原表位的特異性免疫應(yīng)答。 【研究目的】 1.本研究擬在H.pylori感染的小鼠模型體內(nèi)評(píng)價(jià)表達(dá)不同抗原表位融合蛋白的減毒沙門菌載體疫苗的治療效果。 2.初步明確Th1和Th2細(xì)胞應(yīng)答在疫苗免疫清除H.pylori感染中的作用。 【研究方法】 1.構(gòu)建表達(dá)H.pylori按不同順序排列的CagA、VacA和UreB抗原表位融合蛋白的減毒沙門菌載體疫苗,在H.pylori感染的小鼠模型體內(nèi)評(píng)價(jià)其療效。 2.Real-time PCR檢測(cè)免疫治療后小鼠胃內(nèi)H.pylori定植量改變,ELISA檢測(cè)血清、胃和小腸樣本中的特異性抗體水平變化,ELISA檢測(cè)小鼠脾淋巴細(xì)胞IL-4和IFN-γ表達(dá)量的差異。 【研究結(jié)果】 1.口服表達(dá)抗原表位融合蛋白CagA160-VacA62-UreB138 (CVU)的減毒沙門菌免疫治療效果最好,清除率達(dá)62.5%,未清除小鼠胃內(nèi)H.pylori定植量與空質(zhì)粒菌組相比較顯著降低。2.疫苗免疫后Th1應(yīng)答與未免疫組相比較顯著增強(qiáng);疫苗免疫后H.pylori特異性抗體應(yīng)答與未免疫組相比較顯著增強(qiáng)�！窘Y(jié)論】本研究結(jié)果表明:減毒沙門菌載體疫苗對(duì)H.pylori感染具有顯著的免疫清除作用,免疫保護(hù)效果與特異性CD4 + T細(xì)胞Th1型應(yīng)答、血清IgG和粘膜sIgA抗體的應(yīng)答相關(guān),且其療效與融合表位蛋白的排列順序有關(guān)。表達(dá)的抗原表位融合蛋白CVU的減毒沙門菌載體疫苗,療效優(yōu)于其他排列方式,可能成為抗H.pylori的候選疫苗。
[Abstract]:Helicobacter pylori ( H . pylori ) is a kind of spiral gram - negative bacteria implanted in human gastric and duodenal mucosa , which mainly causes chronic gastritis , peptic ulcer and gastric cancer .

Immunotherapy has been widely used internationally for H . pylori infection . The results of animal and human trials have shown that immunotherapy has the effect of removing H . pylori . It is suggested that the therapeutic vaccine has serious consequences for the treatment of H . pylori infection .

Conclusion : High levels of Th1 - biased response is necessary to protect against H . pylori infection and to induce mucosal immune response . Most studies have shown that high level Th1 - biased response is necessary to protect against H . pylori infection .

The related study shows that the oral immunization recombinant Salmonella vaccine has the characteristics of good safety and good immunogenicity . The full - length H . pylori protein molecule can be used as vaccine antigen to contain non - essential antigenic epitopes , and has a large molecular weight , is difficult to express and purify , and the fusion epitope antigen is easy to express and purify .

Purpose of research

1 . To evaluate the therapeutic effect of attenuated Salmonella carrier vaccine expressing different epitope fusion proteins in H . pylori infected mouse model .

2 . The role of Th1 and Th2 cell responses in the immune clearance of H . pylori infection was preliminarily defined .

Methodology of research

1 . Construction of the attenuated Salmonella carrier vaccine expressing H . pylori in different sequence of the epitope - fusion protein of A , VacA and UreB antigen , and evaluated its efficacy in mice model with H . pylori infection .

2 . Real - time PCR was used to detect the change of H . pylori colonization in the stomach of mice . ELISA was used to detect the level of specific antibody in serum , gastric and small intestine samples , and ELISA was used to detect the difference of IL - 4 and IFN - 緯 expression in spleen lymphocytes of mice .

Outcome of the study

1 . The results showed that attenuated Salmonella typhimurium vector vaccine had a significant effect on H . pylori infection . The results showed that attenuated Salmonella carrier vaccine had a significant effect on H . pylori infection . The results showed that attenuated Salmonella carrier vaccine had a significant effect on H . pylori infection , and its efficacy was related to the sequence of specific CD4 + T cell Th1 type response , serum IgG and sIgA antibody .
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2104884