本文選題：溶藻弧菌 + 霍亂弧菌��； 參考：《華東理工大學》2011年博士論文

【摘要】：在海洋環(huán)境中,大多數(shù)的弧菌是最常見的細菌類群,它們維持著正常的海洋生態(tài)環(huán)境,但是某些弧菌卻對人類和海水動物有害。本課題分別對海水養(yǎng)殖魚類的致病細菌溶藻弧菌進行了群體感應系統(tǒng)以及調(diào)控的致病因子研究,在新生幼兔模型上對人源性病原菌霍亂弧菌進行了減毒活疫苗副作用機制的研究以及在新生幼兔模型上對重要食源性致病菌副溶血弧菌進行了致病機理研究。 溶藻弧菌是我國南方海水養(yǎng)殖中重要的病原菌,但是其主要的致病因子和致病機理仍然未知。本課題發(fā)現(xiàn)了溶藻弧菌具有與哈維氏弧菌相似的群體感應系統(tǒng),并對其中樞調(diào)控因子LuxRval進行了功能研究。luxRval基因的表達呈細胞密度依賴型,在低密度時luxRval基因的表達量很低,在高密度時luxRval基因大量表達。溶藻弧菌LuxRval蛋白調(diào)控多種生理功能,對胞外多糖和胞外蛋白酶的合成具有正調(diào)控作用,對運動性則具有負調(diào)控作用。我們發(fā)現(xiàn)LuxRval蛋白對溶藻弧菌分泌的堿性絲氨酸蛋白酶Asp具有調(diào)控作用。堿性絲氨酸蛋白酶Asp在生長對數(shù)末期(細菌高密度)表達,luxRval基因的缺失會導致Asp的表達量大大降低。通過對堿性絲氨酸蛋白酶Asp的基因功能研究,證明Asp是溶藻弧菌分泌的最主要胞外蛋白酶,是溶藻弧菌感染斑馬魚的一個重要毒力因子。asp基因缺失導致溶藻弧菌感染斑馬魚的半致死劑量提高15倍,并且對鯉魚上皮瘤細胞的細胞毒性作用減弱。 霍亂是由霍亂弧菌引起的一種古老的傳染病,疫苗是防治霍亂的一種有效的方式。霍亂減毒活疫苗具有較好的免疫效果,但是通常也伴隨有比較大的副作用。本課題應用新生幼兔動物模型對霍亂減毒活疫苗副作用機制進行研究。我們發(fā)現(xiàn),霍亂毒素缺失菌株Peru-NT能夠感染幼兔,并在小腸內(nèi)克隆繁殖,幼兔通常會有輕度至中度的腹瀉現(xiàn)象。霍亂弧菌鞭毛是造成疫苗副作用最主要的原因,因為幼兔在受霍亂弧菌鞭毛蛋白缺失株ΔflaABCDE感染后,90%的幼兔不再出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象。我們證明了霍亂弧菌鞭毛蛋白是疫苗副作用的產(chǎn)生原因,而非游動性和鞭毛結(jié)構(gòu)。霍亂弧菌的所有5個鞭毛蛋白FlaA、FlaB、FlaC、FlaD和FlaE都對疫苗副作用具有貢獻,在敲除其中一個或者幾個鞭毛蛋白后,仍能導致幼兔產(chǎn)生腹瀉。幼兔腹瀉現(xiàn)象與野生型和鞭毛突變株在腸道內(nèi)的克隆繁殖和定位差異無關。與野生型相比,幼兔在受鞭毛蛋白缺失株ΔflaABCDE感染后,先天免疫反應降低,許多促炎癥細胞因子的mRNA表達量降低。因此,我們認為鞭毛蛋白導致腹瀉現(xiàn)象主要與其介導的先天免疫反應相關,過強或者異常的腸道免疫反應,可能導致宿主出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象。這些試驗結(jié)果為霍亂減毒活疫苗的開發(fā)提供了新的策略。 副溶血弧菌是一種重要的食源性致病菌。目前對副溶血弧菌致病機理不清楚,主要原因是沒有合適的動物模型可以用來研究其致病機理。我們開發(fā)了動物模型(新生幼兔)來研究副溶血弧菌致病機理。口服含有副溶血弧菌的溶液后,87%的新生幼兔受感染,出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象。一般來說,幼兔在被感染30 h左右出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象,但是,不同幼兔出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象的時間會有差異。在解剖新生幼兔時也發(fā)現(xiàn)其腸道內(nèi)有很多液體積累。我們發(fā)現(xiàn),位于小染色體上的第二套三型分泌系統(tǒng)(T3SS2)是副溶血弧菌的主要致病因子,缺失T3SS2后的副溶血弧菌基本喪失了在幼兔腸道內(nèi)的克隆繁殖能力,幼兔不會出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象,腸道內(nèi)也沒有液體的積累。而溶血素TDH和大染色體上的第一套三型分泌系統(tǒng)(T3SS1)與副溶血弧菌對幼兔的致病無關。用熒光定量PCR檢測幼兔腸道內(nèi)不同促炎癥細胞因子(IL-6,IL-8,TNF-α,IL-1β)的表達水平時,發(fā)現(xiàn)野生型、T3SS1和tdh突變株感染的幼兔體內(nèi)的促炎癥細胞因子的表達水平比被T3SS2突變株感染時高很多倍。組織病理學研究表明,野生型、tdh和T3SS1突變株的感染導致幼兔小腸中端至末端出現(xiàn)細胞增殖、細胞脫落、組織充血、中性粒細胞聚集、水腫、腸道絨毛縮短等嚴重病理現(xiàn)象,而T3SS2突變株不會對幼兔小腸造成明顯的病理現(xiàn)象,基本與緩沖液處理的幼兔一樣。最后,熒光共聚焦顯微鏡實驗觀察到副溶血弧菌會在腸道形成微菌落,通常零散地分布于腸道絨毛壁和腸道空腔。
[Abstract]:In the marine environment , most of the arc bacteria are the most common types of bacteria , they maintain normal marine ecological environment , but some of them are harmful to human and marine animals .


In this study , we find that LuxRval protein has a positive control effect on the secretion of extracellular polysaccharide and extracellular protease . It is found that LuxRval protein is the most important extracellular protease secreted by Vibrio mimicus .


cholera is an ancient infectious disease caused by cholera , and the vaccine is an effective way to prevent and cure cholera .


In this paper , we have developed animal models ( neonatal rabbits ) to study the pathogenic mechanism of Vibrio parahemolyticus .
【學位授予單位】：華東理工大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R378;S941

【參考文獻】

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1 金珊,蔡完其,於宏,趙青松,鄭天倫;大黃魚溶藻弧菌病細胞病理變化的初步研究[J];海洋科學;2003年02期

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本文編號：2104817