本文選題：溶藻弧菌 + 霍亂弧菌�。� 參考：《華東理工大學(xué)》2011年博士論文

【摘要】：在海洋環(huán)境中,大多數(shù)的弧菌是最常見(jiàn)的細(xì)菌類群,它們維持著正常的海洋生態(tài)環(huán)境,但是某些弧菌卻對(duì)人類和海水動(dòng)物有害。本課題分別對(duì)海水養(yǎng)殖魚(yú)類的致病細(xì)菌溶藻弧菌進(jìn)行了群體感應(yīng)系統(tǒng)以及調(diào)控的致病因子研究,在新生幼兔模型上對(duì)人源性病原菌霍亂弧菌進(jìn)行了減毒活疫苗副作用機(jī)制的研究以及在新生幼兔模型上對(duì)重要食源性致病菌副溶血弧菌進(jìn)行了致病機(jī)理研究。 溶藻弧菌是我國(guó)南方海水養(yǎng)殖中重要的病原菌,但是其主要的致病因子和致病機(jī)理仍然未知。本課題發(fā)現(xiàn)了溶藻弧菌具有與哈維氏弧菌相似的群體感應(yīng)系統(tǒng),并對(duì)其中樞調(diào)控因子LuxRval進(jìn)行了功能研究。luxRval基因的表達(dá)呈細(xì)胞密度依賴型,在低密度時(shí)luxRval基因的表達(dá)量很低,在高密度時(shí)luxRval基因大量表達(dá)。溶藻弧菌LuxRval蛋白調(diào)控多種生理功能,對(duì)胞外多糖和胞外蛋白酶的合成具有正調(diào)控作用,對(duì)運(yùn)動(dòng)性則具有負(fù)調(diào)控作用。我們發(fā)現(xiàn)LuxRval蛋白對(duì)溶藻弧菌分泌的堿性絲氨酸蛋白酶Asp具有調(diào)控作用。堿性絲氨酸蛋白酶Asp在生長(zhǎng)對(duì)數(shù)末期(細(xì)菌高密度)表達(dá),luxRval基因的缺失會(huì)導(dǎo)致Asp的表達(dá)量大大降低。通過(guò)對(duì)堿性絲氨酸蛋白酶Asp的基因功能研究,證明Asp是溶藻弧菌分泌的最主要胞外蛋白酶,是溶藻弧菌感染斑馬魚(yú)的一個(gè)重要毒力因子。asp基因缺失導(dǎo)致溶藻弧菌感染斑馬魚(yú)的半致死劑量提高15倍,并且對(duì)鯉魚(yú)上皮瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用減弱。 霍亂是由霍亂弧菌引起的一種古老的傳染病,疫苗是防治霍亂的一種有效的方式。霍亂減毒活疫苗具有較好的免疫效果,但是通常也伴隨有比較大的副作用。本課題應(yīng)用新生幼兔動(dòng)物模型對(duì)霍亂減毒活疫苗副作用機(jī)制進(jìn)行研究。我們發(fā)現(xiàn),霍亂毒素缺失菌株P(guān)eru-NT能夠感染幼兔,并在小腸內(nèi)克隆繁殖,幼兔通常會(huì)有輕度至中度的腹瀉現(xiàn)象。霍亂弧菌鞭毛是造成疫苗副作用最主要的原因,因?yàn)橛淄迷谑芑魜y弧菌鞭毛蛋白缺失株ΔflaABCDE感染后,90%的幼兔不再出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象。我們證明了霍亂弧菌鞭毛蛋白是疫苗副作用的產(chǎn)生原因,而非游動(dòng)性和鞭毛結(jié)構(gòu)�；魜y弧菌的所有5個(gè)鞭毛蛋白FlaA、FlaB、FlaC、FlaD和FlaE都對(duì)疫苗副作用具有貢獻(xiàn),在敲除其中一個(gè)或者幾個(gè)鞭毛蛋白后,仍能導(dǎo)致幼兔產(chǎn)生腹瀉。幼兔腹瀉現(xiàn)象與野生型和鞭毛突變株在腸道內(nèi)的克隆繁殖和定位差異無(wú)關(guān)。與野生型相比,幼兔在受鞭毛蛋白缺失株ΔflaABCDE感染后,先天免疫反應(yīng)降低,許多促炎癥細(xì)胞因子的mRNA表達(dá)量降低。因此,我們認(rèn)為鞭毛蛋白導(dǎo)致腹瀉現(xiàn)象主要與其介導(dǎo)的先天免疫反應(yīng)相關(guān),過(guò)強(qiáng)或者異常的腸道免疫反應(yīng),可能導(dǎo)致宿主出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象。這些試驗(yàn)結(jié)果為霍亂減毒活疫苗的開(kāi)發(fā)提供了新的策略。 副溶血弧菌是一種重要的食源性致病菌。目前對(duì)副溶血弧菌致病機(jī)理不清楚,主要原因是沒(méi)有合適的動(dòng)物模型可以用來(lái)研究其致病機(jī)理。我們開(kāi)發(fā)了動(dòng)物模型(新生幼兔)來(lái)研究副溶血弧菌致病機(jī)理。口服含有副溶血弧菌的溶液后,87%的新生幼兔受感染,出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象。一般來(lái)說(shuō),幼兔在被感染30 h左右出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象,但是,不同幼兔出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象的時(shí)間會(huì)有差異。在解剖新生幼兔時(shí)也發(fā)現(xiàn)其腸道內(nèi)有很多液體積累。我們發(fā)現(xiàn),位于小染色體上的第二套三型分泌系統(tǒng)(T3SS2)是副溶血弧菌的主要致病因子,缺失T3SS2后的副溶血弧菌基本喪失了在幼兔腸道內(nèi)的克隆繁殖能力,幼兔不會(huì)出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象,腸道內(nèi)也沒(méi)有液體的積累。而溶血素TDH和大染色體上的第一套三型分泌系統(tǒng)(T3SS1)與副溶血弧菌對(duì)幼兔的致病無(wú)關(guān)。用熒光定量PCR檢測(cè)幼兔腸道內(nèi)不同促炎癥細(xì)胞因子(IL-6,IL-8,TNF-α,IL-1β)的表達(dá)水平時(shí),發(fā)現(xiàn)野生型、T3SS1和tdh突變株感染的幼兔體內(nèi)的促炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)水平比被T3SS2突變株感染時(shí)高很多倍。組織病理學(xué)研究表明,野生型、tdh和T3SS1突變株的感染導(dǎo)致幼兔小腸中端至末端出現(xiàn)細(xì)胞增殖、細(xì)胞脫落、組織充血、中性粒細(xì)胞聚集、水腫、腸道絨毛縮短等嚴(yán)重病理現(xiàn)象,而T3SS2突變株不會(huì)對(duì)幼兔小腸造成明顯的病理現(xiàn)象,基本與緩沖液處理的幼兔一樣。最后,熒光共聚焦顯微鏡實(shí)驗(yàn)觀察到副溶血弧菌會(huì)在腸道形成微菌落,通常零散地分布于腸道絨毛壁和腸道空腔。
[Abstract]:In the marine environment , most of the arc bacteria are the most common types of bacteria , they maintain normal marine ecological environment , but some of them are harmful to human and marine animals .


In this study , we find that LuxRval protein has a positive control effect on the secretion of extracellular polysaccharide and extracellular protease . It is found that LuxRval protein is the most important extracellular protease secreted by Vibrio mimicus .


cholera is an ancient infectious disease caused by cholera , and the vaccine is an effective way to prevent and cure cholera .


In this paper , we have developed animal models ( neonatal rabbits ) to study the pathogenic mechanism of Vibrio parahemolyticus .
【學(xué)位授予單位】：華東理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R378;S941

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 金珊,蔡完其,於宏,趙青松,鄭天倫;大黃魚(yú)溶藻弧菌病細(xì)胞病理變化的初步研究[J];海洋科學(xué);2003年02期

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本文編號(hào)：2104817