本文選題：CD + SIRPα��； 參考：《生物技術(shù)》2017年04期

【摘要】：[目的]研究旨在制備抗CD47小分子單鏈抗體,并分析其與抗原的結(jié)合能力和阻斷作用的活性。[方法]采用DNA合成方法,將抗CD47的單克隆抗體B6H12的重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL),通過(guò)短肽(Gly4Ser)3連接形成B6H12單鏈抗體(B6H12-scFv),在大腸桿菌中可溶性表達(dá)并純化B6H12-scFv。ELISA和Western Blot方法檢測(cè)與人重組CD47的結(jié)合。檢測(cè)EC9706和KYSE150兩種食管癌細(xì)胞表面CD47的表達(dá),細(xì)胞ELISA和流式細(xì)胞術(shù)分析B6H12-scFv與細(xì)胞表面CD47的結(jié)合。最后采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA分析B6H12-scFv對(duì)CD47與髓樣細(xì)胞表面的信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白α(SIRPα)結(jié)合的阻斷能力。[結(jié)果]成功獲得純度達(dá)到90%以上的可溶性單鏈抗體。EC9706和KYSE150細(xì)胞均高表達(dá)CD47。細(xì)胞ELISA和流式檢測(cè)B6H12-scFv濃度為50μg/m L可與EC9706表面CD47有較好結(jié)合。B6H12-scFv濃度為40μg/m L時(shí)也可以競(jìng)爭(zhēng)性阻斷CD47與SIRPα的結(jié)合。[結(jié)論]成功地構(gòu)建了抗CD47單鏈抗體,濃度在20μg/m L具有EC9706的結(jié)合活性,也具有阻斷作用。
[Abstract]:[aim] to prepare anti CD 47 small molecule scFv and to analyze its binding ability to antigen and its blocking activity. [methods] DNA synthesis, The heavy chain variable region (VH) and light chain variable region (VL) of monoclonal antibody B6H12 against CD47 were ligated to form B6H12 single chain antibody (B6H12-scFv) by means of short peptide (Gly4Ser) 3. B6H12-scFv.ELISA and Western Blot were used to detect the binding of B6H12-scFv.ELISA and Western Blot to human recombinant CD47. The expression of CD47 on EC9706 and KYSE150 esophageal carcinoma cells was detected. The binding of B6H12-scFv to CD47 was analyzed by cell Elisa and flow cytometry. Finally, the ability of B6H12-scFv to block the binding of CD47 to signal regulatory protein 偽 (SIRP 偽) on the surface of myeloid cells was analyzed by competitive Elisa. [results] soluble scFv. EC9706 and KYSE150 cells with purity of more than 90% were highly expressed CD47. When the concentration of B6H12-scFv was 50 渭 g / mL and the concentration of B6H12-scFv was 40 渭 g / mL, the binding of CD47 to SIRP 偽 could be blocked competitively. [conclusion] the anti-CD47 scFv was successfully constructed. The EC9706 binding activity and the blocking effect were observed at the concentration of 20 渭 g / mL.
【作者單位】： 新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院生物資源基因工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(“駱駝單域抗體框架區(qū)作為小分子抗體通用移植骨架的研究”,No.31370933;“基于高通量測(cè)序?qū)︸橊効贵w庫(kù)的多樣性分析和數(shù)據(jù)挖掘及新納米抗體的發(fā)現(xiàn)”,No.31570935)
【分類號(hào)】：R392

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