本文選題：ZNF基因 + 巨核細(xì)胞分化��； 參考：《中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志》2017年05期

【摘要】：目的:研究ZNF300對(duì)巨核細(xì)胞分化和增殖的影響。方法:通過公共數(shù)據(jù)分析及定量RT-PCR方法檢測(cè)ZNF300表達(dá)水平以研究ZNF300與白血病及巨核細(xì)胞分化的相關(guān)性;使用慢病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒感染介導(dǎo)過表達(dá)ZNF300,使用流式細(xì)胞術(shù)、MTT比色法、集落形成試驗(yàn)分析K562細(xì)胞和原代小鼠骨髓細(xì)胞向巨核細(xì)胞分化、增殖的情況;應(yīng)用細(xì)胞漿和細(xì)胞質(zhì)蛋白分離結(jié)合蛋白印跡實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)ZNF300亞細(xì)胞定位;并應(yīng)用雙熒光素酶試驗(yàn)和用ChIP-qPCR技術(shù)探討ZNF300調(diào)控的靶基因。結(jié)果:ZNF300表達(dá)水平伴隨巨核細(xì)胞的分化而升高;TPA誘導(dǎo)后巨核細(xì)胞分化的表面標(biāo)記CD41、CD61在過表達(dá)ZNF300的K562細(xì)胞明顯比對(duì)照細(xì)胞增多。同時(shí),ZNF300顯著降低K562細(xì)胞增殖率、阻滯G1ME細(xì)胞周期并降低小鼠骨髓細(xì)胞集落形成單位。ZNF300蛋白主要位于細(xì)胞核內(nèi),能夠結(jié)合在C-MYC基因的啟動(dòng)子區(qū)并增強(qiáng)啟動(dòng)子活性。結(jié)論:過表達(dá)ZNF300可促進(jìn)巨核細(xì)胞分化。
[Abstract]:Objective: to study the effect of ZNF300 on the differentiation and proliferation of megakaryocytes. Methods: the expression of ZNF300 was detected by public data analysis and quantitative RT-PCR in order to study the relationship between ZNF300 and leukemia and megakaryocyte differentiation, the overexpression of ZNF300 was mediated by lentivirus and retrovirus infection, and flow cytometry was used to detect the expression of ZNF300. Colony formation assay was used to analyze the differentiation and proliferation of K562 cells and primary mouse bone marrow cells into megakaryocytes, and the localization of ZNF300 subcells was detected by cytoplasmic and cytoplasmic protein separation and Western blotting assay. Double luciferase assay and ChIP-qPCR were used to study the target genes regulated by ZNF300. Results with the differentiation of megakaryocytes, the expression level of TPA-induced megakaryocyte CD41 + CD61 was significantly increased in K562 cells with overexpression of ZNF300. At the same time, ZNF300 significantly reduced the proliferation rate of K562 cells, blocked the cell cycle of G1ME cells and reduced the colony forming unit of mouse bone marrow cells. ZNF300 protein was mainly located in the nucleus, which could bind to the promoter region of C-MYC gene and enhance the promoter activity. Conclusion: overexpression of ZNF300 can promote megakaryocyte differentiation.
【作者單位】： 武漢大學(xué)中南醫(yī)院兒科;武漢大學(xué)生命科學(xué)院;
【分類號(hào)】：R329.2

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本文編號(hào)：2080287