本文選題：NDP52 + TRAF6　； 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：NF-κB是一類具有多向轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用的核蛋白因子,廣泛存在于多種組織細(xì)胞中,激活后的NF-κB信號途徑參與多種基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控,在免疫、炎癥、氧化應(yīng)激、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、腫瘤形成等生理病理過程中發(fā)揮作用,對于該通路的研究具有十分重要的生物學(xué)意義。TRAF6(tumor necrosis factor receptor associated factor 6)的活化是NF-κB激活信號通路中的關(guān)鍵步驟。為進(jìn)一步研究NF-κB信號通路的精確調(diào)控機(jī)制,我們以TRAF6為誘餌,用酵母雙雜交技術(shù)從胎肝文庫中分離了與TRAF6相互作用的蛋白質(zhì)NDP52(nuclear dot protein 52)。 NDP52(nuclear dot protein 52)是核點(diǎn)家族中的一員,定位于胞質(zhì)。NDP52在Hella細(xì)胞中高表達(dá)。目前對NDP52的報(bào)導(dǎo)主要集中在NDP52可以參與機(jī)體對沙門氏菌的自噬過程,現(xiàn)在認(rèn)為NDP52是可以直接參與自噬過程的蛋白。但目前對其作用機(jī)制了解甚少。本論文以NDP52的相互作用蛋白質(zhì)為切入點(diǎn),探討了NDP52可能的作用機(jī)制,著重研究了NDP52與TRAF6的相互作用及生物學(xué)意義。 本文以酵母雙雜交篩選成人肝臟cDNA文庫得到的未知相互作用對NDP52和TRAF6作為研究對象,通過一系列實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了二者的相互作用,并對其功能意義進(jìn)行了初步探索。 首先我們通過外源性的免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)確證了NDP52和TRAF6之間存在生理性相互作用,mating實(shí)驗(yàn)表明NDP52與TRAF3、TRAF4、TRAF6存在相互作用,而免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)表明NDP52與TRAF1、TRAF3、TRAF5、TRAF6存在相互作用,隨后我們通過轉(zhuǎn)錄活性實(shí)驗(yàn)表明,過表達(dá)NDP52可以負(fù)調(diào)控NF-κB信號通路,TNFα刺激后抑制作用更明顯,同時(shí)NDP52可以明顯負(fù)調(diào)控TRAF2、TRAF5、TRAF6介導(dǎo)的NF-κB信號通路;mating實(shí)驗(yàn)表明,TRAF6N3(1-350aa)與NDP52存在相互作用,免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)表明,NDP52C1(224-446aa)與TRAF6存在相互作用;最后我們研究了NDP52與TRAF6相互作用是如何負(fù)調(diào)控NF-κB信號通路的,通過體內(nèi)泛素化實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)多表達(dá)NDP52可以抑制TRAF6的泛素化, 總之,我們篩選到的NDP52和TRAF6相互作用能夠影響NF-κB信號通路,此研究結(jié)果將有助于拓展對NF-κB信號通路調(diào)節(jié)機(jī)制的認(rèn)識。
[Abstract]:NF- 魏 B is a kind of nuclear protein factor with multidirectional transcriptional regulation. The activated NF- 魏 B signaling pathway is involved in the transcriptional regulation of many genes, such as immunity, inflammation, oxidative stress, cell proliferation and apoptosis. Tumor formation and other physiological and pathological processes play an important role in the study of this pathway. The activation of TRAF6 (tumor necrosis factor receptor associated factor 6 is a key step in the activation of NF- 魏 B signaling pathway. In order to further study the precise regulation mechanism of NF- 魏 B signaling pathway, we isolated the protein NDP52 (nuclear dot protein 52 interacting with TRAF6 from fetal liver library by yeast two-hybrid technique using TRAF6 as bait. NDP52 (nuclear dot protein 52) is a member of nuclear point family. It was located in cytoplasm. NDP52 was highly expressed in Hella cells. At present, NDP52 is mainly reported to be involved in the autophagy process of Salmonella. NDP52 is considered to be a protein directly involved in autophagy. However, little is known about its mechanism at present. Based on the interaction protein of NDP52, the possible mechanism of NDP52 is discussed, and the interaction between NDP52 and TRAF6 and its biological significance are studied. In this paper, the unknown interaction between NDP52 and TRAF6 from adult liver cDNA library screened by yeast two-hybrid was studied. The interaction between NDP52 and TRAF6 was verified by a series of experiments, and its functional significance was preliminarily explored. First of all, we confirmed the physiological interaction between NDP52 and TRAF6 through exogenous immunoprecipitation experiments. The results showed that NDP52 interacted with TRAF3TRAF4TRAF6, while immunoprecipitation showed that NDP52 interacted with TRAF1TRAF3TRAF5TRAF6. Subsequently, our transcriptional activity experiment showed that overexpression of NDP52 could negatively regulate the inhibitory effect of TNF- 偽 on the NF- 魏 B signaling pathway, and NDP52 could significantly negatively regulate the NF- 魏 B signaling pathway mediated by TRAF2TRAF5TRAF6-mediated NF-kappa B signaling pathway. The results showed that there was interaction between TRAF6N3 (1-350aa) and NDP52. Immunoprecipitation assay showed that NDP52C1 (224-446aa) interacted with TRAF6. Finally, we studied how NDP52C1 (224-446aa) negatively regulated NF- 魏 B signaling pathway. In vivo, we found that overexpression of NDP52 can inhibit the ubiquification of TRAF6. In short, the interaction between NDP52 and TRAF6 we screened can affect the NF- 魏 B signaling pathway. This study will be helpful in understanding the regulation mechanism of NF- 魏 B signaling pathway.
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R363

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本文編號：2069861