本文選題：水痘-帶狀皰疹病毒 + 糖蛋白N��； 參考：《病毒學(xué)報(bào)》2017年03期

【摘要】：水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)是水痘和帶狀皰疹的共同致病原,其糖蛋白N(gN)在子代病毒的組裝、成熟和出胞過(guò)程中發(fā)揮重要作用。但是目前關(guān)于VZV gN的研究還很少,其蛋白性質(zhì)和具體分子功能仍不清楚。本研究目的是制備抗VZV gN的單克隆抗體,對(duì)該蛋白在VZV感染細(xì)胞和人皮膚組織內(nèi)的表達(dá)和分布情況進(jìn)行初步探究。本研究選擇抗原性和親水性較強(qiáng)的gN區(qū)段基因,構(gòu)建rGST-gN融合蛋白的原核表達(dá)質(zhì)粒,將鑒定正確的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌后用IPTG誘導(dǎo)融合蛋白表達(dá),經(jīng)親和層析柱純化rGST-gN融合蛋白后使用PSP酶切除GST標(biāo)簽,將獲得的重組蛋白rgN免疫BALB/c小鼠,使用雜交瘤技術(shù)制備其單克隆抗體;共獲得24株穩(wěn)定分泌抗VZV gN單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,選取其中一株性能最優(yōu)的12E10進(jìn)行單克隆抗體生產(chǎn)純化和抗體鑒定;單克隆抗體12E10為IgG2a亞型,其ELISA效價(jià)達(dá)到1∶10 000;通過(guò)Western blot、免疫熒光及免疫組織化學(xué)染色方法鑒定,該抗體能夠特異性識(shí)別細(xì)胞和組織中表達(dá)的VZV gN;本研究應(yīng)用該抗體首次確定了gN在VZV感染細(xì)胞中的反式高爾基體定位,并且確定了gN在VZV感染人皮膚組織中的表達(dá)。以上工作為今后深入研究VZV gN功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Varicella zoster virus (VZV) is the common cause of varicella and herpes zoster, and its glycoprotein N (gN) plays an important role in the assembly, maturation and exocytosis of the progeny virus. But there are few studies on VZV gN, and its protein properties and specific molecular functions are still not clear. The purpose of this study is to prepare monoclonal anti VZV gN. In this study, the expression and distribution of the protein in the VZV infected cells and human skin tissues were preliminarily explored. This study selected the gN region genes with strong antigenicity and hydrophilicity, and constructed the prokaryotic expression plasmid of the rGST-gN fusion protein. The correct recombinant plasmid was identified and the fusion protein was induced by IPTG to induce the expression of the fusion protein after the transformation of the recombinant plasmid. After purifying rGST-gN fusion protein by chromatography column, the GST tag was excised by PSP enzyme, and the recombinant protein rgN was immunized with the BALB/c mouse, and the monoclonal antibody was prepared by hybridoma technology. 24 hybridoma cell lines that secreted the anti VZV gN monoclonal antibody were obtained, and one of the best 12E10 to produce the monoclonal antibody was produced and purified. The monoclonal antibody 12E10 was IgG2a subtype and its ELISA titer reached 1: 10000. The antibody was identified by Western blot, immunofluorescence and immunohistochemical staining. The antibody could identify the VZV gN expressed in cells and tissues. The anti body of gN in VZV infected cells was first identified in this study. Matrix localization and the expression of gN in VZV infected human skin tissues were determined. The above work laid the foundation for further study of VZV gN function in the future.
【作者單位】： 國(guó)家傳染病診斷試劑與疫苗工程技術(shù)研究中心廈門大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;分子疫苗學(xué)和分子診斷學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廈門大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院;微生物學(xué)與分子遺傳學(xué)系羅格斯大學(xué)新澤西醫(yī)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(項(xiàng)目號(hào):81601762),題目:人補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白CD59在水痘-帶狀皰疹病毒免疫逃逸中的作用研究
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2064486