本文選題：結(jié)核分枝桿菌 + CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞��； 參考：《汕頭大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：背景和目的:結(jié)核病是我國重大傳染病之一,是嚴(yán)重危害我國人群健康的呼吸道傳染病。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),耐藥性空洞型肺結(jié)核病人經(jīng)有效手術(shù)治療后,CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)細(xì)胞水平明顯下降。CD4+CD25+Treg細(xì)胞水平上調(diào)與結(jié)核分枝桿菌感染存在高度相關(guān)性,但其產(chǎn)生機(jī)制并不清楚。因此我們選取結(jié)核菌分泌蛋白ESAT-6和Ag85B對人外周血進(jìn)行刺激,運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血中CD4+CD25+Treg細(xì)胞(%PBMC),證明經(jīng)蛋白刺激后CD4+CD25+Treg細(xì)胞明顯升高。由于CD25在活化的T細(xì)胞(包括CD4+ CD25-T細(xì)胞)中表達(dá),而叉頭樣轉(zhuǎn)錄因子FoxP3在激活的CD4+CD25-T細(xì)胞上并不表達(dá),是CD4+CD25+Treg細(xì)胞的特異性生物標(biāo)志,其表達(dá)水平與CD4+CD25+Treg細(xì)胞數(shù)量成正相關(guān)。因CD25作為明確的Treg的生物標(biāo)志受限,為了更精確的檢測Treg水平,應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測FoxP3mRNA表達(dá)水平。本論文主要通過檢測FoxP3 mRNA表達(dá)水平,從基因水平上觀察經(jīng)ESAT-6和Ag85B刺激后的外周血CD4+CD25+FoxP3+Treg細(xì)胞改變,為研究結(jié)核分枝桿菌誘導(dǎo)CD4+CD25+ FoxP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞上調(diào)產(chǎn)生免疫逃逸機(jī)制提供新的依據(jù)。 材料和方法: 1.對汕頭市第三人民院進(jìn)行結(jié)核病流行病學(xué)調(diào)查,獲取痰培養(yǎng)和藥敏試驗及病人的一般信息,描述當(dāng)?shù)亟Y(jié)核病分布情況。 2.從健康人群、潛伏期感染者、耐藥性結(jié)核病病人中隨機(jī)選取志愿者,對其空腹靜脈取血。 3.采用不同濃度(0μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml)的ESAT-6、Ag85B、ESAT-6+Ag85B、BCG處理血液,培養(yǎng)24h、48h、72h后,實時熒光定量PCR檢測FoxP3 mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果: 1.結(jié)核病流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn),痰培養(yǎng)陽性者中男性多于女性,且男性年齡高于女性。而藥敏試驗中耐藥性結(jié)核病所占比例偏高。 2.不同濃度ESAT-6,Ag85B刺激外周血24h、48h、72h后發(fā)現(xiàn)隨濃度的增加,FoxP3mRNA有升高趨勢,培養(yǎng)24小時FoxP3mRNA表達(dá)水平最高,后隨時間延長有下降趨勢,但均無統(tǒng)計學(xué)意義。 3.在未經(jīng)分泌蛋白刺激前,三組(健康對照組、潛伏期感染組、病例組)中FoxP3 mRNA表達(dá)水平比較,病例組與潛伏期感染組高于對照組,但病例組和潛伏期感染組間比較差別無統(tǒng)計學(xué)意義。 4.分泌蛋白處理前后比較,經(jīng)ESAT-6、Ag85B、ESAT-6+Ag85B處理后FoxP3mRNA水平高于處理前水平(P0.05),但BCG處理后FoxP3mRNA略有升高,但差別無統(tǒng)計學(xué)意義。 5.不同蛋白處理后三組間比較發(fā)現(xiàn),潛伏期感染組經(jīng)抗原刺激后,FoxP3mRNA水平高于病例組和健康對照組。病例組低于對照組,但無統(tǒng)計意義。 結(jié)論:目前耐藥性結(jié)核病流行,迫切需要了解結(jié)核菌的免疫逃逸機(jī)制以尋找治療辦法。經(jīng)體外抗原刺激外周血培養(yǎng)實驗發(fā)現(xiàn),外周血FoxP3 mRNA表達(dá)水平與ESAT-6,Ag85B存在劑量-反應(yīng)關(guān)系。ESAT-6、Ag85B作為結(jié)核菌的主要分泌蛋白,意味著菌量負(fù)荷增加后可誘導(dǎo)FoxP3 mRNA表達(dá)水平上調(diào)。CD4+CD25+ FoxP3+Treg細(xì)胞是結(jié)核分枝桿菌逃避機(jī)體免疫清除過程中不可或缺的因素,故認(rèn)為ESAT-6、Ag85B兩種抗原可能與結(jié)核菌的免疫逃逸有關(guān)。
[Abstract]:Background and objective: tuberculosis is one of the major infectious diseases in China and is a respiratory infectious disease which seriously endangers the healthy population of our country. In our previous study, we found that after effective surgical treatment, the level of CD4+CD25+ regulatory T cell (Treg) cells decreased significantly and the level of.CD4+CD25+Treg cells was up to the tuberculosis score. There is a high correlation between Mycobacterium infection, but the mechanism of its production is not clear. Therefore, we select ESAT-6 and Ag85B to stimulate human peripheral blood, and use flow cytometry to detect CD4+CD25+Treg cells (%PBMC) in peripheral blood. It is proved that CD4+ CD25+Treg cells are significantly increased after the protein stimulation. Because CD25 is activated T The cell (including CD4+ CD25-T cells) is expressed, and the cross head like transcription factor FoxP3 is not expressed on activated CD4+CD25-T cells. It is a specific biomarker of CD4+CD25+Treg cells, and its expression level is positively related to the number of CD4+CD25+Treg cells. The biological marker of CD25 as a clear Treg is limited, in order to detect the Treg level more accurately. In this paper, the expression level of FoxP3mRNA was detected by RT-PCR technique. By detecting the expression level of FoxP3 mRNA, this paper observed the changes in the peripheral blood CD4+CD25+FoxP3+Treg cells from the ESAT-6 and Ag85B stimuli at the gene level, providing a new method for the study of the immune escape mechanism induced by Mycobacterium tuberculosis induced FoxP3+ regulated T cells up regulation. Basis.
Materials and methods:
1. the epidemiological investigation of tuberculosis in the third people's Hospital of Shantou was carried out to obtain the phlegm culture and drug sensitivity test and the general information of the patients, and to describe the distribution of local tuberculosis.
2. randomly selected volunteers from healthy populations, latent infections and drug-resistant TB patients, took blood from fasting veins.
3. the blood was treated with ESAT-6, Ag85B, ESAT-6+Ag85B, BCG, ESAT-6, Ag85B, ESAT-6+Ag85B, and BCG, with different concentrations (0 g/ml, 1, g/ml, 2 g/ml, 4 g/ml).
Result:
1. the epidemiological survey of tuberculosis found that there were more males than women in sputum positive, and the male age was higher than that of women. The proportion of drug-resistant tuberculosis was higher in the drug sensitivity test.
2. different concentrations of ESAT-6 and Ag85B stimulated 24h, 48h, and 72h in peripheral blood. After 72h, it was found that FoxP3mRNA increased with the increase of concentration, and the expression level of FoxP3mRNA was highest at 24 hours, and then decreased with time, but no statistical significance was found.
3. before the stimulation of the secretory protein, the level of FoxP3 mRNA expression in the three groups (healthy control, latent infection group, case group) was compared, the case group and the latent period infection group were higher than the control group, but there was no statistical difference between the case group and the latent period infection group.
Before and after treatment of 4. secretory proteins, the level of FoxP3mRNA after treatment with ESAT-6, Ag85B and ESAT-6+Ag85B was higher than that before treatment (P0.05), but FoxP3mRNA increased slightly after BCG treatment, but the difference was not statistically significant.
5. after the three groups of protein treatment, it was found that the level of FoxP3mRNA was higher than that of the case group and the healthy control group after the antigen stimulation in the latent period infection group. The case group was lower than the control group, but no statistical significance was found.
Conclusion: at present, the epidemic of drug-resistant tuberculosis is an urgent need to understand the immune escape mechanism of Mycobacterium tuberculosis in order to find the treatment method. The expression level of FoxP3 mRNA in peripheral blood has a dose response relationship with ESAT-6, Ag85B,.ESAT-6, Ag85B as the main secretory protein of Mycobacterium tuberculosis. The increase of FoxP3 mRNA expression level after the increase of.CD4+CD25+ FoxP3+Treg cells is an indispensable factor in the immune clearance of Mycobacterium tuberculosis. Therefore, it is believed that the two antigens of ESAT-6 and Ag85B may be related to the immune escape of Mycobacterium tuberculosis.
【學(xué)位授予單位】：汕頭大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R392

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本文編號：2034842