本文選題：線粒體途徑 + β細胞��； 參考：《華中科技大學》2012年碩士論文

【摘要】：目的：觀察不同濃度棕櫚酸(palmiticacid,PA)對大鼠胰島INS-1細胞的脂毒性作用，探討線粒體途徑是否介導PA誘導的胰島β細胞INS-1凋亡及其可能機制。 方法：以大鼠INS-1胰島β細胞株為實驗對象，在含或不含PA(0.25-1.0mmol／l)的RPMI1640無血清培養(yǎng)基體外培養(yǎng)24h，構建游離脂肪酸PA誘導β細胞INS-1脂性凋亡模型；MTT法測定線粒體琥珀酸脫氫酶活力，反映細胞線粒體功能改變；Hoechst33342/PI活細胞熒光染色法觀察INS-1細胞核形態(tài)改變，測定細胞凋亡率；RT-PCR法檢測0.5mM棕櫚酸干預下細胞caspase-3、caspase-9、Bcl-2、AIFmRNA的表達。 結果：在無血清條件下，棕櫚酸干預24h能顯著誘導INS-1細胞凋亡。不同濃度PA處理INS-1細胞，鏡下可觀察到細胞呈濃度依賴的毒性改變。與正常細胞相比，PA組細胞隨PA濃度增加形態(tài)逐漸消失，多數(shù)細胞收縮甚至呈圓形。MTT法測定線粒體琥珀酸脫氫酶活力，不同濃度棕櫚酸干預下，OD值降低顯著(p0.05)；Hoechst33342染色在熒光顯微鏡下觀察細胞的凋亡細胞核呈致密濃染或呈碎塊狀致密濃染，可見明顯核碎裂。0.5mmol/LPA組細胞的凋亡率可達到56.6%，與同濃度對照BSA組相比有顯著差異(p0.01，n=8)；RT-PCR顯示促凋亡因子caspase-3、caspase-9、AIF表達較BSA組上調(diào)，而抗凋亡因子Bcl-2表達下調(diào)，，提示內(nèi)源性即線粒體凋亡途徑參與PA脂毒性效應。 結論：PA對INS-1細胞具有明顯脂毒性作用，且細胞損傷與凋亡有關，尤其是可能通過線粒體凋亡途徑介導胰島β細胞凋亡。
[Abstract]:Aim: to observe the lipotoxicity of palmitic acididate (PAA) at different concentrations on rat islet INS-1 cells, and to investigate whether the mitochondrial pathway mediates PA-induced apoptosis of islet 尾 -cells and its possible mechanism. Methods: rat INS-1 islet 尾 cell lines were cultured in serum-free medium (RPMI1640) containing or without PAA 0.25-1.0 mmol / L for 24 h in vitro. Free fatty acid PA induced lipid apoptosis of INS-1 尾 cells was established. MTT assay was used to determine the activity of mitochondrial succinate dehydrogenase. The morphological changes of INS-1 cells were observed by Hoechst33342 / Pi fluorescence staining and the expression of caspase-3, caspase-9Bcl-2, AIFmRNA was detected by RT-PCR. Results: the apoptosis of INS-1 cells was induced by palmitic acid for 24 hours without serum. The cytotoxicity of INS-1 cells treated with different concentrations of PA was observed in a concentration-dependent manner. Compared with the normal cells, the morphology of the cells in PA group gradually disappeared with the increase of PA concentration, and most cells contracted or even showed circular .MTT method to measure the activity of succinate dehydrogenase in mitochondria, and the OD value decreased significantly under different concentrations of palmitic acid. Hoechst33342 staining showed that the apoptotic nuclei of BSA cells were densified with dense staining or fragmented dense staining under fluorescence microscope. The apoptotic rate of the cells in the group of nucleus fragmentation. 0.5 mmol / L PA could reach 56.6%, which was significantly different from that of the BSA group at the same concentration. RT-PCR showed that the expression of apoptosis-promoting factor caspase-3, caspase-9 and AIF was up-regulated than that of BSA group, while the expression of anti-apoptotic factor Bcl-2 was down-regulated, suggesting that endogenous mitochondrial apoptotic pathway was involved in PA lipid toxicity. Conclusion it is suggested that the apoptosis of islet 尾 cells may be mediated by the apoptosis of islet 尾 cells mediated by the apoptosis of the islet 尾 cells induced by the apoptosis of the islet 尾 -cells.
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R725.8

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本文編號：2030916