本文選題：rhIL-3 + 復(fù)性��； 參考：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2012年碩士論文

【摘要】：目的：大規(guī)模表達(dá)復(fù)性并純化臍帶血干細(xì)胞(CBSC)曾殖因子人重組白介素3(rhIL-3),制備其單克隆抗體,研究蛋白及其抗體在干細(xì)胞增殖中的作用。 方法：構(gòu)建rhIL-3表達(dá)菌株,中試規(guī)模表達(dá)該蛋白并提取其包涵體,透析法復(fù)性蛋白,以離子交換柱層析結(jié)合分子篩獲得電泳純的rhIL-3。以純化的蛋白免疫小鼠,制備雜交瘤,ELISA篩選單克隆抗體分泌株,并以western-blot鑒定抗體特異性。在CBSC增殖實(shí)驗(yàn)中,rhIL-3與干細(xì)胞因子(SCF,200ng/mL)、fms樣酪氨酸激酶受體-3配體(FL,200ng/mL)口促血小板生成素(TPO,50ng/mL)共同作用于CBSC,通過培養(yǎng)后細(xì)胞總數(shù)和CD34+細(xì)胞數(shù)變化來檢測(cè)其對(duì)干祖細(xì)胞增殖的影響,進(jìn)一步將rhIL-3與其抗體共同孵育后進(jìn)行共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),檢測(cè)其拮抗效果。 成果：獲取了電泳純r(jià)hIL-3蛋白；制備得到鼠抗rhIL-3單克隆抗體IgG1兩株和IgG2b一株；摸索到rhIL-3作用于臍血干祖細(xì)胞的最佳增殖條件為15-20ng/mL(無TPO)和50ng/mL(：有TPO)；篩選得到了特異性抑帶(?)rhIL-3干祖細(xì)胞增殖活性的單克隆抗體兩株。 結(jié)論：研究表明表達(dá)純化的rhIL-3具有良好的促臍帶血干祖細(xì)胞增殖活性。該rhIL-3及其新獲取的單克隆抗體對(duì)進(jìn)一步研究臍帶血干細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)室和臨床研究有著極為重要的意義。
[Abstract]:Aim: to renaturation and purify recombinant human interleukin 3 rhIL 3 (rhIL 3) from cord blood stem cell (CBSCC), and to prepare its monoclonal antibody to study the role of protein and its antibody in stem cell proliferation. Methods: rhIL-3 expression strain was constructed. The protein was expressed in a pilot scale and its inclusion bodies were extracted. The purified rhIL-3 was obtained by ion exchange column chromatography combined with molecular sieve. Immunized mice with purified protein, hybridoma Elisa was prepared to screen monoclonal antibody secreting strain, and western-blot was used to identify the specificity of antibody. In CBSC proliferation test, rhIL-3 and stem cell factor SCF- (200ng / mL) tyrosine kinase receptor-3 ligand FL200ng / mL) acted on CBSCs. The effects of rhIL-3 on the proliferation of stem progenitor cells were determined by the changes of total cell count and CD34 cell number after culture. Furthermore, rhIL-3 was co-cultured with its antibody to detect its antagonistic effect. Results: electrophoretic pure rhIL-3 protein was obtained, mouse anti-rhIL-3 monoclonal antibody IgG1 strain and IgG2b strain were prepared, and the optimal conditions for rhIL-3 proliferation on umbilical cord blood stem progenitor cells were found to be 15-20 ng / mL (without TPOO) and 50ngmLL / L with TPOO. Two monoclonal antibodies to the proliferation activity of rhIL-3 stem progenitor cells were obtained. Conclusion: the expression and purification of rhIL-3 has a good proliferative activity in cord blood stem progenitor cells. The rhIL-3 and its newly obtained monoclonal antibodies are of great significance to further study the proliferation of umbilical cord blood stem cells in laboratory and clinic.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R329.2

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本文編號(hào)：2024711