本文選題：微球 + HPV16-E7蛋白　； 參考：《蘭州大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：目的用復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制備聚乳酸-聚羥基乙酸(PGLA)微球和以牛血清白蛋白(BSA)為模型蛋白,聚乳酸-聚羥基乙酸為包裹材料,制BAS-PLGA微球,探索微球的制備方法,微球的形態(tài)及包封率。最后以包封率高的方法制備人乳頭狀瘤病毒(HPV)16-E7蛋白(PGLA)微球,考察粒徑分布情況并通過(guò)皮下免疫途徑免疫C57BL/6小鼠做免疫學(xué)評(píng)價(jià)。 方法用復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制備兩種微球,用掃描電子顯微鏡觀察微球的大小形態(tài),用CBB法測(cè)量蛋白濃度,微球的體外釋放,然后用PLGA通過(guò)表面吸附人乳頭狀瘤病毒(HPV)16-E7蛋白制備成聚乳酸聚羥基乙酸(PGLA)微球,考察粒徑分布情況及體外釋放水平,通過(guò)吸附有相同抗原的HPV16-E7蛋白的佐劑包括E7-DDA組,E7-PLGA組,E7+AL(OH)2組皮下免疫注射途徑免疫C57BL/6小鼠,注射小鼠6周后(第2周加強(qiáng)免疫1次),用間接ELISA法檢測(cè)免疫鼠血清中的抗體水平,由此評(píng)價(jià)PLGA微球疫苗運(yùn)輸載體的佐劑效應(yīng) 結(jié)果(1)用復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制備的BSA-PLGA微球表面成球形顆粒,外觀圓整,表面光滑,直徑5-10umm。包封率用提取水解法測(cè)的是39.58%(2)制備的PLGA為微球表面成球形,大小均勻,直徑1-2um,PLGA納米粒吸附BSA蛋白蛋白測(cè)蛋白吸附率結(jié)合率56.3%(3) PLGA微球通過(guò)表面吸附人乳頭狀瘤病毒(HPV) E7蛋白制備成聚乳酸聚羥基乙酸(PGLA)微球,吸附E7蛋白時(shí),電子顯微鏡下可見形狀各異,有的黏附成團(tuán),或成條索狀,沒(méi)有吸附蛋白的仍成球形。微球的包封率均值(n=4)是21.4%,通過(guò)皮下免疫注射途徑免疫C57BL/6小鼠,免疫小鼠6周后(第2周加強(qiáng)免疫1次),可見不同的佐劑免疫C57BL/6小鼠后產(chǎn)生的特異性抗體不同,微球疫苗組誘導(dǎo)產(chǎn)生的IgG1抗體水平較同劑量的鋁佐劑組和溴化二甲基雙十八胺(DDA)組明顯升高,(平均滴度分別為3805、1270、2262)；微球疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生IgG2b的抗體水平明顯高于鋁佐劑組,略低于DDA組,(平均滴度分別為1131、475、2653)且微球組和DDA組跟對(duì)照組(E7蛋白)相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而誘導(dǎo)產(chǎn)生的IgG2c的抗體水平明顯高于鋁佐劑組和DDA組(平均滴度分別為150、36、106)。 結(jié)論(1)用復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制備的兩種微球表面光滑,成球形,且大小均勻,但是以微球吸附蛋白的吸附率較高,因?yàn)樵谖⑶虻闹苽渲?藥物的包封率是一個(gè)非常重要的參考因素。 (2)人乳頭狀瘤病毒E7蛋白聚乳酸羥基乙酸微球作為疫苗輸送體可以明顯的提高抗原的免疫原性,為治療性宮頸癌疫苗及宮頸癌術(shù)后聯(lián)合免疫治療提供理論依據(jù),開發(fā)更好的疫苗進(jìn)行探索。
[Abstract]:Objective to prepare PLGA microspheres using polylactic acid-poly-glycolate (PGLAA) microspheres and bovine serum albumin (BSA) as model proteins and polylactic acid-poly-glycolic acid (PAA) as encapsulating materials, and to explore the preparation method of microspheres. Morphology and encapsulation efficiency of microspheres. Human papillomavirus HPV-16-E7 protein PGLA-microspheres were prepared by the method of high encapsulation efficiency. The particle size distribution was investigated and immunological evaluation of C57BL / 6 mice was carried out by subcutaneous immunization. Methods two kinds of microspheres were prepared by double emulsion solvent volatilization method. The size and morphology of microspheres were observed by scanning electron microscope (SEM). The protein concentration was measured by CBB method and the microspheres were released in vitro. Then PLGA was used to prepare poly (lactic acid) polylactide polyglycolic acid (PGLA) microspheres by adsorbing human papillomavirus HPV16 E7 protein on the surface. The particle size distribution and release level in vitro were investigated. C57BL / 6 mice were immunized with the adjuvant of HPV16-E7 protein with the same antigen, including E7-DDA group, E7-PLGA group and E7-PLGA group. C57BL / 6 mice were immunized by subcutaneous injection route. After 6 weeks of injection (the second week, the mice were immunized once), the antibody level in the serum of immunized mice was detected by indirect Elisa. Therefore, the adjuvant effect of PLGA microsphere vaccine transport carrier was evaluated. 1) the BSA-PLGA microspheres prepared by solvent volatilization method were spherical in appearance, smooth in appearance and 5-10 umm in diameter. The encapsulation efficiency of PLGA prepared by the method of extraction and hydrolysis is 39.58 and 39.58. The PLGA is spherical on the surface of microspheres, and the size of PLGA is uniform. The binding rate of BSA protein adsorbed by PLGA nanoparticles was 56.3%. PLGA microspheres adsorbed human papillomavirus (HPVV) E7 protein onto the surface to prepare polylactic acid poly-glycolate (PGLA) microspheres, which adsorbed E7 protein. Under the electron microscope, various shapes can be seen, some of which are adherent or cord-like, and those without adsorbent proteins are still globular. The average entrapment efficiency of microspheres was 21.4. C57BL / 6 mice were immunized by subcutaneous immunization. After 6 weeks of immunization (the second week, the mice were immunized once), the specific antibodies produced by different adjuvants in C57BL / 6 mice were different. The level of IgG1 antibody induced by microsphere vaccine group was significantly higher than that of aluminum adjuvant group and DDAs group (mean titer was 3805 / 12702262C, respectively), and the level of IgG2b antibody induced by microsphere vaccine was significantly higher than that of aluminum adjuvant group. It was slightly lower than that of DDA group (average titer was 1131), and there was significant difference between the microspheres group and DDA group compared with the control group. The level of IgG2c antibody induced by DDA group was significantly higher than that of aluminum adjuvant group and DDA group (the average titer was 150 ~ 36106). Conclusion 1) the surface of the two kinds of microspheres prepared by solvent volatilization method is smooth, spherical and uniform in size, but the adsorption rate of protein adsorbed by microspheres is higher, because in the preparation of microspheres, Encapsulation efficiency of drugs is a very important reference factor. 2) Human papillomavirus E7 protein poly (lactic acid) acetic acid microspheres as vaccine carriers can significantly improve the immunogenicity of the antigen. To provide theoretical basis for the treatment of cervical cancer vaccine and postoperative combined immunotherapy of cervical cancer, and to develop better vaccine for exploration.
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2022725