本文選題：Erbin + Her2��； 參考：《河南大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：研究背景：β腎上腺素能受體（β-AR）是G蛋白偶聯(lián)受體（GPCR）家族的重要成員。表達(dá)于心臟組織的β腎上腺素能受體可接受兒茶酚胺的刺激，從而將來自交感神經(jīng)系統(tǒng)的信息轉(zhuǎn)換為體內(nèi)生理學(xué)功能刺激信號(hào)，從而調(diào)控心肌細(xì)胞的生物學(xué)功能，但其具體調(diào)控的機(jī)制尚未完全闡明。 Her2，原癌基因人類表皮生長因子受體2(human epidermalgrowth factor receptor-2，HER2)基因，人類表皮生長因子受體家族成員之一。近年來，通過對(duì)Her2的基因敲除小鼠的研究，Her2在心肌細(xì)胞中的功能，特別是其在心肌細(xì)胞保護(hù)方面的作用逐漸被人們所認(rèn)識(shí)。而且臨床上使用靶向Her2的治療性抗體赫賽�。℉erceptin）的應(yīng)用可在某些患者中引起明顯的心臟毒性，亦表明Her2在心肌細(xì)胞內(nèi)的作用至關(guān)重要，但是其機(jī)理尚不明確。 隨即，2006年， Alejandra Negro等研究發(fā)現(xiàn)在心肌細(xì)胞內(nèi)Her2與β2-AR存在相互作用，而且他們之間的這種相互作用對(duì)于兒茶酚胺誘導(dǎo)的MAPK信號(hào)通路的活化及心肌細(xì)胞收縮功能的調(diào)控至關(guān)重要。研究者在文中明確指出Her2與β2-AR存的相互作用并非直接相互作用，而是可能通過某個(gè)支架分子介導(dǎo)的間接相互作用，具體機(jī)制不清楚。然而，2000年Borg等以HER2胞內(nèi)域殘基為釣餌，通過酵母雙雜交的方法從cDNA文庫中篩選到一種新的含有PDZ結(jié)構(gòu)域的蛋白，將其命名為ErbB2相互作用蛋白（ErbB2interacting protein），簡寫為Erbin。Erbin的序列分析表明，，Erbin可能具有支架分子的功能，最近的相關(guān)研究也證明Erbin可作為支架蛋白介導(dǎo)Her2與其它受體分子發(fā)生相互作用。 我們的前期研究結(jié)果提示，在心肌細(xì)胞內(nèi)Erbin可能作為支架蛋白介導(dǎo)Her2與β2-AR之間的相互作用。隨后通過一系列的研究，我們發(fā)現(xiàn)Erbin的PDZ結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)Her2與β2-AR之間的相互作用，并在β2-AR介導(dǎo)的MAPK信號(hào)通路活化中起到正向調(diào)控作用，本研究還首次報(bào)道了Erbin在心肌細(xì)胞中的新功能。 目的：研究在細(xì)胞內(nèi)，Erbin是否是作為支架蛋白介導(dǎo)Her2與β2-AR復(fù)合物形成的必要分子，及其揭示Erbin在心肌細(xì)胞中對(duì)β2-AR激動(dòng)劑誘導(dǎo)的MAPK信號(hào)通路活化的調(diào)控作用，初步探索Erbin對(duì)心肌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。 方法：利用免疫共沉淀的方法，在心肌及腦組織初步驗(yàn)證Erbin、β2-AR及Her2三者存在相互作用；進(jìn)一步利用免疫共沉淀的方法，進(jìn)行內(nèi)源性，外源性檢測Erbin、β2-AR及Her2三者存在相互作用；我們進(jìn)行內(nèi)源性敲低Erbin的表達(dá)，利用免疫共沉淀證明Erbin是介導(dǎo)β2-AR與Her2復(fù)合物形成的必要分子，同時(shí)通過膜，漿分離實(shí)驗(yàn)來證明Erbin在兒茶酚胺激素下被招募到細(xì)胞膜上，是其發(fā)揮作用的前提。利用分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建Erbin及其突變體，通過免疫共沉淀及免疫熒光的方法，確定Erbin介導(dǎo)β2-AR與Her2相互作用的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域。通過SDS-PAGE和Western blot方法檢測Erbin在ISO刺激β2-AR介導(dǎo)的MAPK信號(hào)通路中調(diào)控作用。進(jìn)一步通過TUNEL染色法檢測Erbin在心肌細(xì)胞內(nèi)抗調(diào)亡作用，利用胰酶消化法分離與培養(yǎng)大鼠原代心肌細(xì)胞，通過慢病毒轉(zhuǎn)染高效敲低Erbin，熒光顯微鏡下觀察，記錄心肌細(xì)胞心率的變化，初步探索Erbin在心肌細(xì)胞內(nèi)潛在的生物學(xué)功能。 結(jié)果：首先，我們?cè)诖笫蟮男募〗M織及腦組織，初步驗(yàn)證了Erbin，β2-AR，Her2三者之間存在相互作用；接下來我們?cè)?93T（組成性表達(dá)Erbin）細(xì)胞內(nèi)，通過外源性過表達(dá)pcDNA3.0-β2-AR、pcDNA3.0-Her2兩種質(zhì)粒，證實(shí)Erbin、β2-AR及Her2三者之間存在相互作用；那么在心肌細(xì)胞是否也存在呢?我們研究證明在大鼠心肌細(xì)胞H9c2內(nèi)源性檢測結(jié)果，Erbin、β2-AR及Her2三者之間也存在相互作用。相反，如果敲低大鼠心肌細(xì)胞H9c2內(nèi)Erbin的表達(dá)，是否會(huì)影響這種作用呢?我們的結(jié)果發(fā)現(xiàn)在大鼠心肌細(xì)胞H9c2內(nèi)敲低Erbin的表達(dá)，Erbin、β2-AR及Her2三者之間相互作用被破壞�？梢姡珽rbin是介導(dǎo)β2-AR與Her2兩者之間相互作用的必要分子。那么，Erbin是通過什么樣的機(jī)制介導(dǎo)了膜上蛋白分子之間的作用呢？我們的膜，漿分離實(shí)驗(yàn)證明Erbin在兒茶酚胺激素下被招募到細(xì)胞膜上，發(fā)揮其支架蛋白的作用。免疫共沉淀及免疫熒光的結(jié)果都證實(shí)Erbin的PDZ結(jié)構(gòu)域是介導(dǎo)β2-AR與Her2兩者之間相互作用的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域。在隨后的實(shí)驗(yàn)中，我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)Erbin在β2-AR介導(dǎo)的MAPK信號(hào)通路中正調(diào)控作用。此外，在我們的研究中，我們同時(shí)還發(fā)現(xiàn)Erbin可保護(hù)心肌細(xì)胞免受兒茶酚胺慢性刺激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡及Erbin可能在調(diào)控心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率中發(fā)揮重要作用。 結(jié)論：本研究證明Erbin PDZ結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)Her2與β2-AR之間的相互作用以及Erbin在β2-AR介導(dǎo)MAPK信號(hào)通路中起著正向調(diào)控作用；同時(shí)Erbin可保護(hù)心肌細(xì)胞免受兒茶酚胺慢性刺激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，并初步揭示了Erbin可能在調(diào)控心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率中發(fā)揮重要作用。
[Abstract]:Background: beta adrenergic receptor (beta -AR) is an important member of the G protein coupled receptor (GPCR) family. The beta adrenergic receptor expressed in the cardiac tissue can be stimulated by catecholamine and converts the information from the sympathetic nervous system into the physiological function stimulation signal in the body, thus regulating the biological work of the cardiac myocytes. Yes, but the mechanism of its specific regulation has not been fully elucidated.
Her2, a proto oncogene, human epidermal growth factor receptor 2 (human epidermalgrowth factor receptor-2, HER2) gene, one of the members of the human epidermal growth factor receptor family. In recent years, the function of Her2 in cardiac myocytes has been gradually developed by the study of gene knockout mice in Her2, especially in the protection of cardiac myocytes. The application of the therapeutic antibody Hessaitin (Herceptin), which is clinically targeted to Her2, can cause significant cardiac toxicity in some patients and indicates that the role of Her2 in cardiac myocytes is crucial, but the mechanism is not clear.
Then, in 2006, Alejandra Negro and other studies found that there was a interaction between Her2 and beta 2-AR in cardiac myocytes, and the interaction between them was crucial to the activation of the catecholamine induced MAPK signaling pathway and the regulation of cardiac contractile function. The researchers clearly pointed out the interaction between Her2 and the existence of beta 2-AR. Not direct interaction, but a possible indirect interaction mediated by a scaffold molecule, the specific mechanism is not clear. However, in 2000, Borg and other HER2 intracellular residues were used as bait, and a new protein containing PDZ domains was screened from the cDNA library by yeast two hybrid method and named as ErbB2 interaction protein (E). RbB2interacting protein), the sequence analysis of Erbin.Erbin shows that Erbin may have the function of scaffold molecules. Recent related studies have also shown that Erbin can mediate the interaction between Her2 and other receptor molecules as a scaffold protein.
Our previous results suggest that Erbin may act as a scaffold protein to mediate the interaction between Her2 and beta 2-AR in cardiac myocytes. Then, through a series of studies, we found that the PDZ domain of Erbin mediates the interaction between Her2 and beta 2-AR and plays a positive role in the activation of the MAPK signaling pathway mediated by beta 2-AR. This study also reported for the first time the new functions of Erbin in cardiac myocytes.
Objective: To investigate whether Erbin is a necessary molecule to mediate the formation of Her2 and beta 2-AR complex as a scaffold protein, and to reveal the regulatory effect of Erbin on the activation of MAPK signaling pathway induced by beta 2-AR agonist in cardiac myocytes, and to explore the effect of Erbin on the biological function of cardiac myocytes.
Methods: the interaction between Erbin, beta 2-AR and Her2 three was preliminarily verified by immunoprecipitation in the myocardium and brain tissue, and the endogenous and exogenous detection of Erbin, beta 2-AR and Her2 were carried out by immunoprecipitation method, and the expression of endogenous knockout Erbin and immunoprecipitation were carried out. It is proved that Erbin is a necessary molecule to mediate the formation of the complex of beta 2-AR and Her2. At the same time, it is proved that Erbin is recruited on the cell membrane under the catecholamine hormone by membrane and slurry separation experiment. It is the premise of its function. Using molecular biology technology, Erbin and its mutants are constructed, and Erbin is determined by the method of immunoprecipitation and immunofluorescence. The key domain of interaction between beta 2-AR and Her2 is mediated by SDS-PAGE and Western blot methods to detect the regulation of Erbin in ISO stimulated MAPK signaling pathway mediated by beta 2-AR. Further, TUNEL staining method is used to detect the anti regulating action of Erbin in cardiac myocytes, and trypsin digestion method is used to isolate and cultivate primary cardiomyocytes in rats. The virus transfected efficiently knocked down Erbin and observed the changes of heart rate under fluorescence microscope. The potential biological function of Erbin in cardiac myocytes was preliminarily explored.
Results: first, we preliminarily verified the interaction between Erbin, beta 2-AR, and Her2 three in the myocardium and brain tissue of rats; then we confirmed the interaction between Erbin, beta 2-AR and Her2 three in 293T (constituent expression Erbin) cells by overexpressing pcDNA3.0- beta 2-AR, pcDNA3.0-Her2 two plasmids. Is it possible to exist in cardiac myocytes? We have shown that there is also interaction between Erbin, beta 2-AR, and Her2 three in rat cardiac myocytes. On the contrary, if the expression of Erbin in H9c2 of rat cardiac myocytes in the low rat heart can affect this use, we found that H9c2 in rat cardiac myocytes is found to be H9c2 The interaction between Erbin, Erbin, beta 2-AR and Her2 three is destroyed. So, Erbin is a necessary molecule to mediate the interaction between beta 2-AR and Her2. Then, what mechanism does Erbin mediate the role of protein molecules on the membrane? Our membrane, pulp separation experiment shows that Erbin is under catecholamine. The results of immuno coprecipitation and immunofluorescence have confirmed that the PDZ domain of Erbin is a key domain that mediates the interaction between beta 2-AR and Her2. In the subsequent experiment, we further found that Erbin is positive in the MAPK signaling pathway mediated by beta 2-AR. In our study, we also found that Erbin protects cardiomyocytes from apoptosis induced by catecholamine induced chronic stimulation and that Erbin may play an important role in regulating the frequency of cardiac myocyte pulsation.
Conclusion: This study shows that the Erbin PDZ domain mediates the interaction between Her2 and beta 2-AR, and Erbin plays a positive role in the beta 2-AR mediated MAPK signaling pathway, and Erbin protects cardiomyocytes from the apoptosis induced by catecholamine induced chronic stimulation, and preliminarily reveals that Erbin may regulate the pulsation frequency of cardiac myocytes. The rate plays an important role.
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R363

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 黃仲曦,姚開泰;用文獻(xiàn)輪廓挖掘鼻咽癌微陣列表達(dá)數(shù)據(jù)[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2004年07期

2 張滌華,李幼姬,王儉勤,梁柳琴,黃凌虹,周道遠(yuǎn),葉任高,余學(xué)清;MAPK~(ERK1/2)信號(hào)通路在狼瘡腎炎外周血單個(gè)核細(xì)胞表達(dá)白細(xì)胞介素-6mRNA中的作用[J];中華風(fēng)濕病學(xué)雜志;2005年06期

3 陳舞燕,賀林;精神分裂癥的分子遺傳學(xué)研究進(jìn)展[J];中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2005年03期

4 賀忠梅,劉慧榮;β腎上腺素能受體激動(dòng)劑與心肌細(xì)胞凋亡[J];心血管病學(xué)進(jìn)展;2005年S1期

5 蘇明;萬鈞;黃志強(qiáng);周寧新;吳德斌;范上達(dá);;肝星狀細(xì)胞的激活和Rho-ROCK信號(hào)通路在纖維化大鼠小肝移植中的作用[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2005年12期

6 潘智;張令強(qiáng);蔣繼志;賀福初;;mTOR的研究進(jìn)展[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;2006年03期

7 楊曉瑜;黃維義;魏宗德;;誘導(dǎo)HO-1基因表達(dá)的信號(hào)通路[J];國際病理科學(xué)與臨床雜志;2006年03期

8 潘勤;謝渭芬;張忠兵;張新;韓澤廣;;肝纖維化逆轉(zhuǎn)中MAPK/ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化及其特征[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2006年15期

9 董玲;孫劍勇;杜施霖;王吉耀;;基因芯片研究甘草酸對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞轉(zhuǎn)化生長因子-β信號(hào)通路的影響[J];中華消化雜志;2006年09期

10 金豐;;心肌營養(yǎng)素-1的心血管作用及其信號(hào)通路的研究進(jìn)展[J];中國藥業(yè);2006年17期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 林明群;張宗粱;;巨噬細(xì)胞免疫調(diào)變信號(hào)-PKA與PKC對(duì)MAPK信號(hào)通路的調(diào)節(jié)研究[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第七次會(huì)議論文摘要匯編[C];1999年

2 高方;張琪;鄭敏化;韓驊;;Notch信號(hào)通路對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化的調(diào)控作用[A];中國遺傳學(xué)會(huì)“發(fā)育、遺傳和疾病”研討會(huì)論文匯編集[C];2007年

3 韓家淮;;p38信號(hào)通路與炎癥反應(yīng)[A];第六屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

4 楊麗霞;郭瑞威;齊峰;苗貴華;王先梅;石燕昆;李明秋;;MIF/AP-1/MMP-9信號(hào)通路血漿表達(dá)水平與冠狀動(dòng)脈病變程度的相關(guān)性研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)第十次全國心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議匯編[C];2008年

5 胡勇;郭慶;曾凡欽;唐增奇;林燕輝;湯紅峰;;TGF-B信號(hào)通路關(guān)鍵因子LTBP-1和TGF-βRⅡ與尖銳濕疣發(fā)病的相關(guān)性研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第14次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

6 李菊香;丁浩;洪葵;萬磊;蘇海;吳延慶;吳清華;程曉曙;;ERK1/2信號(hào)通路介導(dǎo)心肌營養(yǎng)素-1對(duì)心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷的保護(hù)作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第11次心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2009年

7 張維溪;李昌崇;賀孝良;戴歡;方麗;趙瑞雪;;TGF-β 1/Smad信號(hào)通路在哮喘氣道重塑中的作用[A];第六屆江浙滬兒科學(xué)術(shù)會(huì)議暨兒科學(xué)基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展學(xué)術(shù)班論文匯編[C];2009年

8 李卓婭;;細(xì)胞骨架系統(tǒng)與細(xì)胞信號(hào)通路-Actin參與跨膜型TNF激活TNFR2凋亡信號(hào)通路[A];中國病理生理學(xué)會(huì)受體、腫瘤和免疫專業(yè)委員會(huì)聯(lián)合學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

9 楊藝敏;張穎;馮加純;;Notch信號(hào)通路對(duì)大鼠腦缺血后神經(jīng)再生調(diào)控作用的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

10 倪鑫;唐曉露;侯月;;PKC信號(hào)通路通過cAMP反應(yīng)元件促進(jìn)胎盤CRH基因轉(zhuǎn)錄[A];中國生理學(xué)會(huì)第五屆全國心血管、呼吸和腎臟生理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2005年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 ;我發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路“對(duì)話”機(jī)制[N];上海科技報(bào);2004年

2 劉海英;美發(fā)現(xiàn)兩種細(xì)胞信號(hào)通路互動(dòng)機(jī)制[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

3 ;《細(xì)胞》發(fā)表裴鋼院士最新研究成果[N];上�？萍紙�(bào);2009年

4 ;“細(xì)胞信號(hào)傳遞”新發(fā)現(xiàn)[N];上�？萍紙�(bào);2007年

5 ;電針能激活老年癡呆大鼠海馬蛋白激酶信號(hào)通路[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2005年

6 記者 許琦敏;減肥信號(hào)受控于腦中“通訊員”[N];文匯報(bào);2008年

7 衣曉峰　陳英云 記者 李麗云;結(jié)腸癌發(fā)生中新的信號(hào)通路找到[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

8 衣曉峰;哈醫(yī)大發(fā)現(xiàn)結(jié)腸癌發(fā)生中新的信號(hào)通路[N];中國醫(yī)藥報(bào);2009年

9 記者　白毅;SAP-PIX通路調(diào)節(jié)T細(xì)胞活化[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

10 楊金志;我國科學(xué)家發(fā)現(xiàn)抑制敗血癥休克的新機(jī)制[N];大眾科技報(bào);2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李春艷;β-連環(huán)素/T細(xì)胞因子4信號(hào)通路在非小細(xì)胞肺癌的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2004年

2 黃淑紅;Sonic Hedgehog信號(hào)通路異常激活在肺癌、肝癌中作用的研究[D];山東大學(xué);2007年

3 王立榮;信號(hào)通路相關(guān)文獻(xiàn)挖掘與分析方法研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2007年

4 袁媛;K562細(xì)胞中Wnt5a介導(dǎo)不同受體途徑激活經(jīng)典或非經(jīng)典Wnt信號(hào)通路及其機(jī)制的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

5 姚佳維;PMID激活Nrf2/ARE信號(hào)通路的機(jī)制及其抗氧化作用研究[D];天津大學(xué);2012年

6 張繼帥;利用條件基因剔除技術(shù)研究Smad4基因在軟骨內(nèi)成骨過程中的功能[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年

7 朱金文;NF-κB炎癥信號(hào)通路靶向封閉防治急性創(chuàng)傷性肺損傷的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

8 劉瑞康;HIV-1 Vpr激活細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路分子機(jī)制的研究[D];南開大學(xué);2013年

9 滿江紅;Gankyrin通過PI3K信號(hào)通路調(diào)節(jié)Ras介導(dǎo)的腫瘤發(fā)生[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2008年

10 胡偉國;Sonic hedgehog信號(hào)通路在胰腺癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王文杰;Pygo2通過Wnt信號(hào)通路抑制脂肪分化的分子機(jī)制[D];廈門大學(xué);2014年

2 張興;α腎上腺素能受體激動(dòng)對(duì)TLR4信號(hào)通路影響的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2011年

3 宋玉仙;小分子化合物bis-N-norgliovictin調(diào)控TLR4信號(hào)通路的研究[D];南京大學(xué);2011年

4 施玨平;經(jīng)典WNT信號(hào)通路關(guān)鍵基因在人胎肺中的表達(dá)[D];福建師范大學(xué);2012年

5 劉佳;人乳腺上皮細(xì)胞中Kv1.5與Cav-1介導(dǎo)的MAPK信號(hào)通路的激活[D];遼寧師范大學(xué);2010年

6 周先;共軛亞油酸對(duì)TLR4信號(hào)通路相關(guān)基因表達(dá)的影響[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 王永梅;纖維蛋白原通過MyD88依賴性NF-κB信號(hào)途徑參與心肌肥大的發(fā)病機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2007年

8 環(huán)奕;WNT信號(hào)通路為靶點(diǎn)的高通量藥物篩選細(xì)胞模型的建立[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2006年

9 石松長;LY294002靶向抑制PI3K/Akt信號(hào)通路干預(yù)胃癌細(xì)胞生長的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2007年

10 陳明諒;Pin1分別與Axin和Daxx相互作用的研究[D];廈門大學(xué);2007年

本文編號(hào)：2016202