本文選題：MP + 白介素-18��； 參考：《蚌埠醫(yī)學院》2012年碩士論文

【摘要】：研究目的 通過研究不同濃度的葡萄糖(glucose,GLU)和糖波動環(huán)境下，小鼠腹腔巨噬細胞(mouseperitonealmacrophages,MPM)白介素-18(interleukin-18,IL-18)mRNA表達及分泌情況、不同培養(yǎng)時間對高濃度GLU(highglucose,HG)環(huán)境下MPM的IL-18mRNA表達及IL-18分泌量變化的影響、不同濃度的JNK通路抑制劑對HG狀態(tài)下MPM的IL-18mRNA表達及IL-18分泌量影響，以探討DM時MPM參與DM大血管病變的機制。 研究方法 1分離純化的MPM隨機分為6組：1組、2組、3組、4組、5組（GLU濃度分別為4.0mmol/L、8.0mmol/L、16.0mmol/L、24.0mmol/L和32.0mmol/L）和GLU濃度波動組（GLU濃度8.0mmol/L1.5小時-24.0mmol/L1.5小時-16.0mmol/L1.5小時-32.0mmol/L1.5小時）。利用半定量逆轉錄聚合酶鏈反應技術(reverse-transcription-polymerchainreaction,RT-PCR）和酶聯(lián)免疫吸附法(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)技術分別檢測各組MPM的IL-18mRNA的表達情況和IL-18的分泌量。 2把分離純化的MPM隨機分為4組在32.0mmol/LGLU濃度下培養(yǎng)，在3h、6h、12h和18h時間點下。使用半定量RT-PCR方法和ELISA法分別檢測各組MPM的IL-18mRNA的表達及IL-18的分泌量。 3分離純化MPM，根據(jù)c-Jun氨基末端蛋白激酶(c-JunN-terminalkinase,JNK)通路抑制劑SP600125的濃度隨機分為4組:陰性對照組，5μmol/L組，10μmol/L組，15μmol/L組。在32.0mmol/LGLU濃度下，使用半定量RT-PCR方法和ELISA法分別檢測各組MPM的IL-18mRNA的表達和IL-18的分泌量。 研究結果 1HG促進MPM的IL-18表達。MPM的在GLU含量為4mmol/L的RPMI1640培養(yǎng)基中表達很少，IL-18/-actin的比值為0.13±0.04；在8mmol/LGLU組，16mmol/LGLU組、24mmol/LGLU組和32mmol/LGLU組IL-18表達逐漸升高，各組IL-18分泌具有統(tǒng)計學差異(P0.05)。在含32mmol/LGLU的1640培養(yǎng)液中孵育6小時，其IL-18/-actin的比值達1.04±0.03，可見HG促進MPM的IL-18的表達；在GLU波動組，IL-18/-actin的比值為0.78±0.05，較32mmol/LGLU組低，差異有統(tǒng)計學意義（（P0.001)，較≤24mmol/L各GLU濃度組高，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.05)。各組IL-18分泌量變化的趨勢與各組IL-18mRNA表達的變化趨勢一致，組間比較均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 2HG培養(yǎng)下的MPM的IL-18表達變化與培養(yǎng)時間的關系。3h組、6h組和12h組相對灰度值IL-18/β-actin分別為0.78±0.07、1.04±0.02和1.22±0.05，各組差異有統(tǒng)計學意義（P0.01)。在培養(yǎng)18h時，相對灰度值IL-18/β-actin為0.59±0.07，差異有統(tǒng)計學意義（P0.001)。各組IL-18分泌量變化的趨勢與各組IL-18mRNA表達的變化趨勢一致，組間比較均有統(tǒng)計學意義(P0.01)。 3SP600125對HG培養(yǎng)的MPM的IL-18mRNA基因表達及分泌量的影響。在0μmol/L組，5μmol/L組，10μmol/L組，15μmol/L組相對灰度值IL-18/β-actin分別為1.22±0.03、1.03±0.05、0.74±0.07和0.57±0.08。組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P0.01)。各組IL-18分泌量變化的趨勢與各組IL-18mRNA表達的變化趨勢一致，組間比較均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 研究結論 1HG促進MPM的IL-18表達和分泌。波動的GLU濃度對IL-18表達和分泌有重要影響。 2在12h內，，隨時間延長，HG環(huán)境下MPM的IL-18的表達和分泌增加，在12小時后隨時間下降。 3JNK通路可能是HG培養(yǎng)的MPM的IL-18表達和分泌的機制環(huán)節(jié)之一。
[Abstract]:Purpose of study

The expression of interleukin - 18 ( IL - 18 ) mRNA and secretion of interleukin - 18 ( IL - 18 ) in peritoneal macrophages of mice were studied by studying the expression of interleukin - 18 ( IL - 18 ) mRNA and secretion of interleukin - 18 ( IL - 18 ) in mice with different concentrations of glucose ( GLU ) and sugar . The effects of different culture time on the expression of IL - 18 mRNA and IL - 18 secretion in high concentration GLU ( highglucose , HG ) were studied .

Research Methods

The levels of IL - 18 mRNA and the secretion of IL - 18 were measured by reverse transcription polymerase chain reaction ( RT - PCR ) and enzyme linked immunosorbent assay ( ELISA ) .

The expression of IL - 18 mRNA and the secretion of IL - 18 were measured by semi - quantitative RT - PCR and ELISA .

The expression of IL - 18 mRNA and the secretion of IL - 18 were determined by semi - quantitative RT - PCR and ELISA respectively at the concentration of 32.0mmol / L GLU .

Results of the study

The expression of IL - 18 was promoted by 1HG . The expression of IL - 18 / - actin was 0.13 鹵 0.04 in RPMI1640 medium with GLU content of 4mmol / L .
The expression of IL - 18 / - actin was 1.04 鹵 0.03 in 16mmol / L GLU group , 16 mmol / L GLU group , 24 mmol / L GLU group and 32 mmol / L GLU group , and the IL - 18 / - actin ratio of IL - 18 / - actin was 1.04 鹵 0.03 , and the expression of IL - 18 was promoted by HG .
In the GLU wave group , the ratio of IL - 18 / - actin was 0.78 鹵 0.05 , lower than that of 32mmol / L GLU group ( P < 0.01 ) .

The levels of IL - 18 / 尾 - actin were 0.78 鹵 0.07 , 1.04 鹵 0.02 and 1.22 鹵 0.05 respectively in the 3h , 6h and 12h groups .

The levels of IL - 18 / 尾 - actin were 1.22 鹵 0.03 , 1.03 鹵 0.05 , 0.74 鹵 0.07 and 0.57 鹵 0.08 respectively in the 0 渭mol / L group , 5 渭mol / L group , 10 渭mol / L group , 15 渭mol / L group , and 0 . 74 鹵 0.07 and 0.57 鹵 0.08 , respectively .

Conclusions of the study

The expression of IL - 18 and secretion of IL - 18 were promoted by 1HG , and the concentration of GLU was significantly affected by the expression and secretion of IL - 18 .

2 In 12 hours , the expression and secretion of IL - 18 increased with time , and decreased with time after 12 hours .

The 3PK pathway may be one of the mechanisms involved in the expression and secretion of IL - 18 in HG - cultured MPGs .
【學位授予單位】：蚌埠醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R363

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本文編號：1986959