本文選題：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 + 堿性成纖維細(xì)胞生長因子��； 參考：《廣西醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：目的：觀察體外培養(yǎng)的兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)生長特性及其分化潛能,研究不同濃度的堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)對兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化效果的影響。 方法：采用全血貼壁法分離純化及體外培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,倒置相差顯微鏡下每天觀察BMSCs的形態(tài)及生長狀況。第二代BMSCs通過流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面抗原檢測并誘導(dǎo)其向軟骨細(xì)胞分化,行HE染色和阿爾新藍(lán)染色鑒定,誘導(dǎo)BMSCs向成骨細(xì)胞分化,行茜素紅染色和堿性磷酸酶染色鑒定。取第2代BMSCs細(xì)胞進行成骨誘導(dǎo),于成骨誘導(dǎo)液中加入不同濃度的bFGF,根據(jù)加入的bFGF終濃度不同分為5個實驗組(組1：bFGF濃度1ng/mL,組2：bFGF濃度5ng/mL,組3：bFGF濃度10ng/mL,組4：bFGF濃度50ng/mL1,組5：bFGF濃度100ng/mL)和空白對照組(bFGF濃度0ng/mL)。連續(xù)14天倒置顯微鏡下觀察BMSCs的形態(tài)及生長狀況,行堿性磷酸酶(ALP)活性定量檢測及骨鈣素(0C)定量檢測觀察不同組間骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化效能的差異。 結(jié)果：體外全血貼壁法分離純化培養(yǎng)的第三代兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞儀鑒定高表達細(xì)胞表面抗原CD29(92.23%)及CD44(80.01%),低表達CD45(1.91%),純度較高且生物特征基本一致,并能在特定的誘導(dǎo)下分化成為軟骨細(xì)胞,HE染色下胞質(zhì)有黑色顆粒,阿爾新藍(lán)染色可見藍(lán)色的酸性粘多糖存在；誘導(dǎo)BMSCs分化為成骨細(xì)胞后,經(jīng)茜素紅染色可見礦化結(jié)節(jié),堿性磷酸酶染色為陽性。誘導(dǎo)成骨過程中bFGF能有效促進BMSCs向成骨細(xì)胞分化(P0.01),實驗組的堿性磷酸酶及骨鈣素定量檢測表達水平均較空白組明顯增高,其中濃度為50ng/mL的bFGF促進BMSCs向成骨細(xì)胞分化效果最明顯(P0.01)。 結(jié)論：全血貼壁分離法能有效在體外分離純化出BMSCs,而bFGF則能在體外有效的促進BMSCs向成骨細(xì)胞分化,并且效果與濃度相關(guān)。
[Abstract]:Objective: to observe the growth characteristics and differentiation potential of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) cultured in vitro. To study the effects of basic fibroblast growth factor-bFGFs at different concentrations on the differentiation of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) into osteoblasts. Methods: rabbit bone marrow mesenchymal stem cells were isolated and cultured by whole blood adherent method. The morphology and growth of BMSCs were observed under inverted phase contrast microscope. The second generation of BMSCs was detected by flow cytometry and induced to differentiate into chondrocytes. He staining and Albumin blue staining were used to identify the differentiation of BMSCs into osteoblasts. Alizarin red staining and alkaline phosphatase staining were used to identify the differentiation of BMSCs into osteoblasts. The second passage of BMSCs cells were used to induce osteogenesis. Different concentrations of bFGF were added to osteoblast inducer. According to the final concentration of bFGF added, five experimental groups were divided into five groups (1:bFGF concentration of 1 ng / mL, 2:bFGF concentration of 5 ng / mL, 3:bFGF concentration of 10 ng / mL, 4:bFGF concentration of 50 ng / mL, 5:bFGF concentration of 100 ng / mL) and control group. The morphology and growth of BMSCs were observed under inverted microscope for 14 days. The activity of alkaline phosphatase (ALP) and osteocalcin (Osteocalcin) were measured quantitatively. The differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into osteoblasts was observed in different groups. Results: the third generation of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells isolated and purified by whole blood adherent method in vitro were identified by flow cytometry. After inducing BMSCs to differentiate into osteoblasts, the mineralized nodules could be observed by alizarin red staining, while black granules could be found in the cytoplasm of chondrocytes under HE staining, and blue acid mucopolysaccharide could be found in Alxin blue staining. Alkaline phosphatase staining was positive. During osteogenesis, bFGF could effectively promote the differentiation of BMSCs into osteoblasts. The expression levels of alkaline phosphatase and osteocalcin in the experimental group were significantly higher than those in the blank group. The effect of bFGF with the concentration of 50ng/mL on the differentiation of BMSCs into osteoblast was the most obvious. Conclusion: the whole blood adherent separation method can effectively purify BMSCs in vitro, while bFGF can effectively promote the differentiation of BMSCs into osteoblasts in vitro, and the effect is related to the concentration of BMSCs.
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R329

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本文編號：1976922