本文選題：旋毛蟲(chóng) + 排泄分泌物�。� 參考：《吉林大學(xué)》2011年博士論文

【摘要】：旋毛蟲(chóng)是一種寄生于宿主骨骼肌細(xì)胞內(nèi)的胞內(nèi)寄生線(xiàn)蟲(chóng),感染所有的哺乳動(dòng)物(包括人類(lèi))和一些食肉鳥(niǎo)類(lèi)。旋毛蟲(chóng)病是由旋毛蟲(chóng)(Trichinella)引起的一種呈全球性分布的食源性人獸共患寄生蟲(chóng)病。人類(lèi)旋毛蟲(chóng)病在許多國(guó)家爆發(fā),目前在世界范圍內(nèi)約有1100萬(wàn)人被感染,在我國(guó)該病仍有發(fā)生。旋毛蟲(chóng)感染不同于其他線(xiàn)蟲(chóng),他的生活史在單一宿主內(nèi)完成,分成三個(gè)主要階段:成蟲(chóng)、新生幼蟲(chóng)和肌幼蟲(chóng),其分別寄生于宿主腸上皮細(xì)胞和骨骼肌細(xì)胞。旋毛蟲(chóng)在感染不同時(shí)期,釋放許多生物活性物質(zhì)調(diào)節(jié)宿主免疫反應(yīng)并入侵宿主肌細(xì)胞為自己構(gòu)建了一個(gè)安全的家(包囊)來(lái)達(dá)到成功的寄生。 在宿主抵抗外來(lái)病原入侵的免疫應(yīng)答過(guò)程中,巨噬細(xì)胞在起始,調(diào)節(jié),終末效應(yīng)的各個(gè)環(huán)節(jié)起著重要的作用,因此他被認(rèn)為是參與機(jī)體免疫應(yīng)答的主要細(xì)胞。巨噬細(xì)胞在線(xiàn)蟲(chóng)感染中,已作為寄生蟲(chóng)調(diào)節(jié)宿主免疫反應(yīng)的靶細(xì)胞,對(duì)寄生蟲(chóng)生存具有重要意義。另外,巨噬細(xì)胞在肌肉損傷的修復(fù)過(guò)程中也扮演著重要的角色,他不僅可以吞噬凋亡壞死的細(xì)胞碎片,而且通過(guò)其釋放的活性因子調(diào)節(jié)衛(wèi)星細(xì)胞的激活與分化。目前關(guān)于旋毛蟲(chóng)排泄分泌物(即ES)對(duì)肌細(xì)胞及巨噬細(xì)胞功能影響的報(bào)道比較少,研究不同時(shí)期ES產(chǎn)物對(duì)這些細(xì)胞功能的影響將有利于我們進(jìn)一步的闡明旋毛蟲(chóng)免疫逃逸及包囊形成機(jī)制。 首先,本研究選擇了小鼠巨噬細(xì)胞系J774A.1做為細(xì)胞模型,調(diào)查了旋毛蟲(chóng)不同時(shí)期ES產(chǎn)物對(duì)巨噬細(xì)胞活性的影響。SYBR Green I實(shí)時(shí)熒光定量PCR和ELISA結(jié)果表明,不同時(shí)期ES產(chǎn)物降低了LPS刺激的巨噬細(xì)胞分泌促炎性細(xì)胞因子(IL-1β、IL-12、TNF-α和IL-6)的能力。然而只有旋毛蟲(chóng)3日齡成蟲(chóng)排泄分泌物(AD3 ES)和旋毛蟲(chóng)5日齡成蟲(chóng)(AD5)與新生幼蟲(chóng)(NBL)混合排泄分泌物(AD5-NBL ES)明顯抑制了LPS刺激的效應(yīng)分子iNOS的表達(dá)。我們發(fā)現(xiàn):在ES產(chǎn)物單獨(dú)作用組,旋毛蟲(chóng)不同時(shí)期ES產(chǎn)物上調(diào)了抗炎性細(xì)胞因子(IL-10和TGF-β)和替代性活化的巨噬細(xì)胞標(biāo)記物Arg1的表達(dá),相反抑制了iNOS的表達(dá),因此我們推測(cè)ES產(chǎn)物可能調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞向可替代激活表型轉(zhuǎn)化。另外我們通過(guò)細(xì)胞免疫熒光和Western blot技術(shù)分別檢測(cè)了NF-κB信號(hào)通路中NF-κB的核易位以及MAPKs信號(hào)通路的磷酸化情況。結(jié)果表明,旋毛蟲(chóng)不同時(shí)期ES產(chǎn)物至少部分依靠這兩條信號(hào)傳導(dǎo)通路來(lái)抑制促炎性細(xì)胞因子的表達(dá)。我們推測(cè)旋毛蟲(chóng)可以通過(guò)抑制促炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生和誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向可替代激活表型的轉(zhuǎn)換,在巨噬細(xì)胞水平調(diào)節(jié)宿主免疫反應(yīng),這將有利于旋毛蟲(chóng)的生存和宿主健康。 其次,本研究將肌幼蟲(chóng)期排泄分泌物(ML ES)體外作用于小鼠C2C12成肌細(xì)胞,采用CCK-8、SYBR Green I實(shí)時(shí)熒光定量PCR、細(xì)胞免疫熒光和Western blot檢測(cè)ML ES對(duì)成肌分化程序的影響。CCK-8分析表明,在低血清條件下,ML ES促進(jìn)成肌細(xì)胞的增殖,同時(shí)細(xì)胞免疫熒光和Western blot結(jié)果表明,在分化條件下,ML ES增強(qiáng)C2C12成肌細(xì)胞的細(xì)胞增殖核抗原(PCNA)和細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子cyclin D1的表達(dá)。另外我們檢測(cè)了肌細(xì)胞終末分化標(biāo)記物肌球蛋白重鏈(MHC)的表達(dá),結(jié)果顯示ML ES作用的成肌細(xì)胞MHC的轉(zhuǎn)錄及表達(dá)明顯下降,表明ML ES抑制了C2C12成肌細(xì)胞的分化,進(jìn)一步的細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)表明這一抑制效應(yīng)是可以逆轉(zhuǎn)的。同時(shí),我們調(diào)查了抑制機(jī)制,結(jié)果表明ML ES在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平抑制細(xì)胞分化相關(guān)因子(MyoD、Myogenin、p21)的表達(dá)和p38 MAPK的磷酸化水平。這些結(jié)果表明ML ES中存在重要的調(diào)節(jié)因子能夠促使成肌細(xì)胞的增殖但抑制它的分化。 最后我們利用共培養(yǎng)技術(shù),建立了巨噬細(xì)胞與成肌細(xì)胞共培養(yǎng)模型,在體外調(diào)查了與旋毛蟲(chóng)ML ES作用后的巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)對(duì)成肌細(xì)胞分化的影響。我們的結(jié)果表明成肌細(xì)胞與ML ES作用后的巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)上調(diào)了成肌細(xì)胞PCNA和cyclin D1的表達(dá),說(shuō)明ML ES作用后的巨噬細(xì)胞可以增強(qiáng)成肌細(xì)胞的增殖。另外細(xì)胞免疫熒光表明,與對(duì)照組比較,成肌細(xì)胞分化調(diào)節(jié)因子(MyoD、Myogenin、p21)陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量及終末分化標(biāo)記物MHC的表達(dá)明顯降低。我們進(jìn)一步用Western blot驗(yàn)證了這種抑制效果。本研究表明旋毛蟲(chóng)ML ES不僅可以直接調(diào)節(jié)成肌細(xì)胞的分化,而且可以通過(guò)調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞活性來(lái)影響成肌細(xì)胞的分化,這為研究旋毛蟲(chóng)與宿主細(xì)胞及旋毛蟲(chóng)感染后,宿主細(xì)胞間相互對(duì)話(huà)的復(fù)雜機(jī)制提供了新的思路。
[Abstract]:Trichinosis is a parasitic nematode that is parasitic in the host skeletal muscle cells , infected with all mammals ( including humans ) and some predatory birds . The trichinosis is a worldwide distribution of food - borne human beings with parasitic diseases .

In the course of immune response against foreign pathogen invasion , macrophages play an important role in the initiation , regulation and terminal effect .

The results showed that ES products could regulate the expression of IL - 1尾 , IL - 12 , TNF - 偽 and IL - 6 in macrophages in different periods . The results showed that the ES products could regulate the expression of inflammatory cytokines ( IL - 1尾 , IL - 12 , TNF - 偽 and IL - 6 ) .

The expression of myosin heavy chain ( PCNA ) and cell cycle regulatory factor cyclin D1 in C2C12 myoblasts were detected by means of CCK - 8 , SYBR Green I real - time fluorescence quantitative PCR , immunofluorescence and Western blot analysis .

In the end , we used the co - culture technique to establish the co - culture model of macrophages and myoblasts , and investigated the effect of co - culture of macrophages and macrophages on the differentiation of myoblasts after the action of ML ES . The results showed that the expression of PCNA and cyclin D1 in myoblasts was increased by the co - culture of myoblasts and ML ES .
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類(lèi)號(hào)】：R392

【引證文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 叢立新;李蕾;于錄;;金黃色葡萄球菌isdA基因?qū)λ拗魃掀ぜ?xì)胞免疫指標(biāo)的影響[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2014年04期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 李蕾;金黃色葡萄球菌isdA缺失株的構(gòu)建及其免疫活性的研究[D];吉林大學(xué);2012年

2 俞昭e，

本文編號(hào)：1968246