本文選題：人乳頭瘤病毒 + 表位��； 參考：《中國生物工程雜志》2017年03期

【摘要】：目的:構(gòu)建呈現(xiàn)HPV 16L1抗原表位的病毒樣顆粒(VLPs),為新型HPV疫苗及特異抗體制備提供新的思路。方法:將編碼HPV 16L1抗原表位QPLGVGISGHPLLNKLDDTE寡聚核苷酸片段克隆于HBc Ag基因編碼第78、79位氨基酸序列之間,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α。重組蛋白經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后以SDS-PAGE分析表達情況,并以Western blot鑒定重組蛋白中HPV 16L1表位的免疫反應(yīng)性。菌體超聲破碎后經(jīng)硫酸銨鹽析法和蔗糖密度梯度離心進行純化,并經(jīng)凝膠層析Sepharose G25脫鹽,最后以電子顯微鏡及高效液相(HPLC)凝膠過濾色譜鑒定VLPs的存在并分析純度。純化的病毒樣顆粒分別于0周、2周、4周經(jīng)皮下注射免疫BALB/c小鼠,以Western blot分析血清特異識別L1蛋白的能力。結(jié)果:HBc Ag/L1肽嵌合蛋白獲得成功表達,能夠被商業(yè)化L1抗體特異識別,經(jīng)密度梯度超速離心及HPLC分析顯示其與HBc Ag行為一致,電子顯微鏡觀察進一步確定其以HBc Ag病毒樣顆粒形式存在。VLPs免疫小鼠獲得的抗血清能夠特異識別酵母表達的重組L1蛋白。結(jié)論:HBc Ag VLPs成功呈現(xiàn)HPV16L1蛋白并有效激發(fā)特異抗體應(yīng)答。
[Abstract]:Aim: to construct the virion like particles of HPV16 L1 epitope and to provide a new idea for the preparation of new HPV vaccine and specific antibodies. Methods: the QPLGVISGHPLLNKLDDTE oligonucleotide fragment encoding HPV16L1 epitope was cloned into the amino acid sequence of HBC Ag gene and transformed into Escherichia coli DH5 偽. The expression of recombinant protein was analyzed by SDS-PAGE after induced by IPTG, and the immunoreactivity of HPV16 L1 epitope was identified by Western blot. The bacteria were purified by ammonium sulfate salting out method and sucrose density gradient centrifugation, and desalted by gel chromatography Sepharose G25. Finally, the existence and purity of VLPs were identified by electron microscope and high performance liquid chromatography (HPLC) gel filtration chromatography. The purified virus-like particles were injected subcutaneously into BALB / c mice at 0 week and 2 weeks and 4 weeks, respectively. The ability of serum specific recognition of L1 protein was analyzed by Western blot. Results the 1: HBc AgP / L1 peptide chimeric protein was successfully expressed and could be specifically recognized by commercial L1 antibody. The results of density gradient ultracentrifugation and HPLC analysis showed that the chimeric protein was consistent with the behavior of HBc Ag. It was further confirmed by electron microscopy that the antiserum obtained by immunizing mice with HBc-Ag virus-like particles could specifically recognize recombinant L1 protein expressed by yeast. Conclusion the HPV16 L1 protein was successfully present in the VLPs of 10% HBc Ag and the specific antibody response was effectively stimulated.
【作者單位】： 中國醫(yī)學科學院/北京協(xié)和醫(yī)學院醫(yī)學生物學研究所;
【基金】：云南省對外科技合作計劃項目(2013IA005) 云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計劃重點項目(2016FA049) 云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究面上項目(2013FZ137、2010ZC232)資助項目
【分類號】：R392

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本文編號：1963518