本文選題：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 + 細(xì)胞培養(yǎng)�。� 參考：《基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)》2017年01期

【摘要】：探討建立兔骨髓間質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)的體外分離純化、擴(kuò)增和鑒定的方法,為BMSCs的進(jìn)一步誘導(dǎo)分化和應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。首先抽取兔髂骨骨髓,采用Percoll密度梯度離心法得到骨髓單個(gè)核細(xì)胞,接種后形成單層貼壁細(xì)胞,經(jīng)胰蛋白酶消化后傳代培養(yǎng)擴(kuò)增,倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),細(xì)胞免疫組化檢測(cè)CD73、CD34。結(jié)果表明,成功建立了兔BMSCs體外分離及培養(yǎng)擴(kuò)增的方法,發(fā)現(xiàn)BMSCs表現(xiàn)貼壁生長(zhǎng),P0代時(shí)呈集落生長(zhǎng),細(xì)胞呈梭形,傳代后細(xì)胞增殖速度加快,形態(tài)開(kāi)始多樣化;細(xì)胞免疫組化顯示BMSCs表達(dá)CD73,未表達(dá)CD34,反復(fù)傳代后CD73表達(dá)效率增高。上述研究表明,Percoll密度梯度離心聯(lián)合骨髓貼壁法,能有效分離、純化和擴(kuò)增BMSCs,提取的細(xì)胞具有BMSCs的生長(zhǎng)特性和抗原表型,其中P3~P6代細(xì)胞增殖能力強(qiáng),可用于進(jìn)一步的研究工作。
[Abstract]:To establish the method of isolation, purification, amplification and identification of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) in vitro, and to lay a foundation for further induction, differentiation and application of BMSCs. Bone marrow mononuclear cells were obtained from rabbit iliac bone marrow by Percoll density gradient centrifugation. Monolayer adherent cells were formed after inoculation. The monolayer adherent cells were cultured and amplified by trypsin digestion. The growth state of the cells was observed by inverted phase contrast microscope. CD73 and CD34 were detected by immunohistochemistry. The results showed that the method of isolation and culture of rabbit BMSCs in vitro was successfully established. It was found that BMSCs showed colony growth at P0 generation and fusiform cells. After passage, the proliferation rate of rabbit BMSCs increased and the morphology began to diversify. Immunohistochemistry showed that BMSCs expressed CD73, but not CD34. After repeated passage, the efficiency of CD73 expression was increased. These results showed that Percoll density gradient centrifugation combined with bone marrow adherent method could effectively isolate, purify and amplify BMSCs. The extracted cells had the growth characteristics and antigenic phenotypes of BMSCs, and the P3~P6 generation cells had strong proliferative ability, which could be used for further research.
【作者單位】： 廣州中醫(yī)藥大學(xué)深圳臨床醫(yī)學(xué)院;深圳北京大學(xué)香港科技大學(xué)醫(yī)學(xué)中心生物醫(yī)學(xué)研究所;廣州中醫(yī)藥大學(xué)深圳醫(yī)院;
【基金】：深圳市科技計(jì)劃(衛(wèi)生系統(tǒng))科研項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào):201302124) 深圳市福田區(qū)衛(wèi)生公益性科研項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)FTWS201318)共同資助
【分類號(hào)】：R329.2

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