本文選題：結(jié)核分枝桿菌 + AgA基因　； 參考：《中國免疫學(xué)雜志》2011年01期

【摘要】：目的:構(gòu)建編碼結(jié)核分枝桿菌Ag85A分泌蛋白重組真核表達(dá)質(zhì)粒,研究其與hIL-12聯(lián)合免疫小鼠后的細(xì)胞免疫應(yīng)答。方法:(1)構(gòu)建質(zhì)粒:采用PCR法從H37Rv菌株中擴(kuò)增Ag85A編碼基因,用限制性內(nèi)切酶消化后,插入克隆載體PMD20-T中,經(jīng)酶切鑒定與序列測定證實(shí)后,以亞克隆法構(gòu)建于真核表達(dá)載體PCDNA3.1的相應(yīng)酶切位點(diǎn)。(2)動(dòng)物實(shí)驗(yàn):50只C57BL/6N小鼠隨機(jī)分為:①Ag85A基因疫苗+hIL-12質(zhì)粒組(聯(lián)合免疫組);②重組Ag85A基因疫苗組;③卡介苗BCG組(陽性對照);④空載體組(陰性對照);⑤PBS組(空白對照)。基因疫苗、空載體和PBS經(jīng)肌內(nèi)注射法免疫各組小鼠,每隔3周免疫1次,共免疫3次,BCG組經(jīng)尾部皮下注射1×106CFU BCG免疫1次,約0.3 ml/只。第三次免疫小鼠后28天,處死各組小鼠,分離脾細(xì)胞,ELISA法檢測脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IFNγ-、IL-2、IL-4水平;乳酸脫氫酶釋放法檢測脾細(xì)胞殺傷活性;分離的脾細(xì)胞經(jīng)TB-PPD刺激后,XTT比色法檢測脾淋巴細(xì)胞增殖活性。結(jié)果:(1)成功構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌Ag85A基因DNA疫苗。(2)聯(lián)合免疫組能誘導(dǎo)較強(qiáng)烈的抗原特異性Th1型細(xì)胞免疫應(yīng)答,免疫小鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)上清液IFN-r和IL-2水平顯著高于Ag85A基因疫苗組,與BCG組相當(dāng),IL-4分泌減少;特異性CTL殺傷活性明顯增強(qiáng);淋巴細(xì)胞增殖活性也明顯高于其他組別。結(jié)論:hlL-12表達(dá)質(zhì)粒能夠增強(qiáng)結(jié)核分枝桿菌Ag85A基因DNA疫苗所誘導(dǎo)的小鼠免疫應(yīng)答。
[Abstract]:Aim: to construct a recombinant eukaryotic expression plasmid encoding mycobacterium tuberculosis Ag85A secretory protein and study the cellular immune response of mice immunized with hIL-12. Methods: the plasmid was constructed: the Ag85A coding gene was amplified by PCR from H37Rv strain, digested with restriction endonuclease, inserted into clone vector PMD20-T, and confirmed by restriction endonuclease digestion and sequencing. In animal experiment: 50 C57BL/6N mice were randomly divided into 1 Ag85A gene vaccine hIL-12 plasmid group (combined immunized group) and recombinant Ag85A gene vaccine group. 3 BCG BCG group. The mice in each group were immunized with gene vaccine, empty vector and PBS intramuscularly once every 3 weeks. The mice in the control group were immunized with 1 脳 106CFU BCG subcutaneously once every 3 weeks, about 0.3 ml/. On the 28th day after the third immunization, the mice in each group were killed, the spleen cells were isolated and the levels of IL-4 in the supernatant of spleen cell culture were detected by Elisa, and the killing activity of splenocytes was detected by lactate dehydrogenase release method. The proliferative activity of splenic lymphocytes was detected by TB-PPD colorimetric assay. Results the Ag85A gene DNA vaccine of Mycobacterium tuberculosis was successfully constructed. The combined immunized group could induce a strong antigen-specific Th1 type cellular immune response. The levels of IFN-r and IL-2 in the supernatant of spleen cell culture of immunized mice were significantly higher than those in the Ag85A gene vaccine group. Compared with BCG group, IL-4 secretion was decreased, specific CTL cytotoxicity was increased, and lymphocyte proliferation activity was significantly higher than that in other groups. Conclusion the expression plasmid of 1: hlL-12 can enhance the immune response of mice induced by Ag85A gene DNA vaccine of Mycobacterium tuberculosis.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.30872261)
【分類號】：R392.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 郝牧;鮑朗;高蕾;;人IL-12與結(jié)核分枝桿菌抗原ESAT-6聯(lián)合基因疫苗的免疫效果觀察[J];微生物學(xué)報(bào);2007年03期

【共引文獻(xiàn)】

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1 高蕾;鮑朗;郝牧;章樂;秦紫芳;;IL-12聯(lián)合結(jié)核桿菌DNA疫苗初免-BCG加強(qiáng)免疫的免疫效果觀察[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年04期

2 陶波山;;結(jié)核分枝桿菌早期分泌抗原靶6的研究進(jìn)展及應(yīng)用[J];中國防癆雜志;2011年12期

3 唐雙陽;李樂;余敏君;粟盛梅;蔡恒玲;周良;萬艷平;;HPV16 E2與IL-12聯(lián)合基因疫苗的免疫效果初步研究[J];中國病原生物學(xué)雜志;2012年10期

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2 丁珍珍;結(jié)核分枝桿菌Ag85A基因DNA疫苗的構(gòu)建及其聯(lián)合人IL-12表達(dá)質(zhì)粒誘導(dǎo)的小鼠細(xì)胞免疫應(yīng)答觀察[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

3 謝婷;結(jié)核分枝桿菌重組Bb-ESAT-6-MPT64疫苗保護(hù)力及其免疫機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2008年

4 王新華;雞IL-18的原核表達(dá)蛋白及真核表達(dá)質(zhì)粒對IBD疫苗的免疫增強(qiáng)作用研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

5 周良;HPV16 E2與IL-12聯(lián)合基因疫苗的免疫效果初步研究[D];南華大學(xué);2011年

【二級參考文獻(xiàn)】

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2 龍洋,鮑朗,吳悅涵,趙明才,曾獻(xiàn)武,張會(huì)東,朱慶平;結(jié)核分枝桿菌免疫優(yōu)勢抗原ESAT-6真核表達(dá)載體的構(gòu)建及蛋白表達(dá)的鑒定[J];中國呼吸與危重監(jiān)護(hù)雜志;2004年03期

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2 吳為群,張扣興,嚴(yán)英碩,謝燦茂,容中生;結(jié)核分枝桿菌異煙肼耐藥基因katG點(diǎn)突變的快速檢測(英文)[J];中國抗生素雜志;2003年03期

3 葉松,王曉秋,許禮發(fā);煤工塵肺結(jié)核合并肺癌結(jié)核分枝桿菌L型感染1例報(bào)告[J];中國工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志;2004年06期

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5 包佳玲,樂軍,田野蘋,楊燕萍,王洪海,劉麗蓉,閔彥;結(jié)核分枝桿菌感染人源樹突狀細(xì)胞的蛋白質(zhì)表達(dá)譜[J];微生物學(xué)報(bào);2005年03期

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9 孔杰;陳森州;王險(xiǎn)峰;陳建宏;梁爽;;從講授結(jié)核分枝桿菌內(nèi)容探討醫(yī)學(xué)微生物學(xué)的教學(xué)改革[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2008年S1期

10 柳正衛(wèi);何海波;;應(yīng)用噬菌體法檢測結(jié)核分枝桿菌藥敏的效果評價(jià)[J];浙江預(yù)防醫(yī)學(xué);2009年01期

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2 許優(yōu);孫惠平;張?jiān)鲑t;劉莉娜;;關(guān)于結(jié)核分枝桿菌定量方法的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

3 劉毅;李衛(wèi)民;田苗;孫照剛;李傳友;周輝;張治國;高鐵杰;高峰;;快速篩選定義北京基因型結(jié)核分枝桿菌的新方法[A];2007年中國防癆協(xié)會(huì)全國學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

4 張?jiān)滦?辛毅;馬郁芳;;結(jié)核分枝桿菌RmlB的表達(dá)、純化及酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究[A];2008年全國糖生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2008年

5 劉焰;劉勝武;談蓉;馬立新;劉君炎;;結(jié)核分枝桿菌Ag85B與ESAT-6雙順反子重組腺表達(dá)載體的構(gòu)建[A];第六屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

6 吳園;鐘敏;王易偉;鐘靜;胡頻頻;毛旭虎;;Rv0341用于診斷依賴?yán)Ｆ浇Y(jié)核分枝桿菌結(jié)核病的研究概況[A];中國防癆協(xié)會(huì)臨床委員會(huì)、中國防癆協(xié)會(huì)基礎(chǔ)委員會(huì)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

7 張旭霞;張海青;李傳友;田苗;趙冰;李衛(wèi)民;張健源;印云青;焦揚(yáng);端木宏謹(jǐn);;結(jié)核分枝桿菌黏附素HBHA防治結(jié)核病的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究[A];2005年中國防癆協(xié)會(huì)全國學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2005年

8 陳曦;張宗德;劉忠泉;賈紅彥;邢愛英;古書香;;結(jié)核分枝桿菌rv3873、rv3879c基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建和表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

9 周慶;方中飛;沈小英;宋冰;方孝美;;臨床分離結(jié)核分枝桿菌的耐藥性分析[A];2006年浙江省檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2006年

10 陳濤;周琳;周杰;江勇;周志剛;彭建明;文力;彭東東;何超文;鐘球;;環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法快速檢測結(jié)核分枝桿菌的方法建立與臨床應(yīng)用評估[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì)2011年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

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3 記者 陳青;讓結(jié)核菌三天內(nèi)原形畢露[N];文匯報(bào);2009年

4 錢忠軍;華中農(nóng)大發(fā)現(xiàn)新基因有望控制結(jié)核病[N];江蘇科技報(bào);2009年

5 駐鄂記者 錢忠軍　通訊員 金安江 范敬群;發(fā)現(xiàn)可能控制結(jié)核病的新基因[N];文匯報(bào);2009年

6 記者 黃每裕;珠海推出兩種檢測試劑新產(chǎn)品[N];中國醫(yī)藥報(bào);2009年

7 記者 項(xiàng)錚;團(tuán)山會(huì)議研討罕見病原體防治策略[N];科技日報(bào);2009年

8 莊愉;新型抗結(jié)核疫苗的開發(fā)研究[N];中國醫(yī)藥報(bào);2002年

9 ;整合力量 抗擊“瘟神”[N];中國醫(yī)藥報(bào);2003年

10 宋心德;ＩＤＳＡ２基因?qū)е陆Y(jié)核桿菌產(chǎn)生抗藥性[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

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1 董海燕;中國13省市結(jié)核分枝桿菌基因多態(tài)性分析[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2011年

2 陳嘉臻;結(jié)核分枝桿菌特異的RD2/RD11蛋白應(yīng)用于結(jié)核免疫診斷的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

3 王平;肺分枝桿菌感染臨床特征、耐藥模式、預(yù)后研究及肺組織結(jié)核分枝桿菌巢式PCR檢測[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

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5 陳軍;武漢地區(qū)結(jié)核分枝桿菌藥物敏感性及氟喹諾酮耐藥分子機(jī)制的研究[D];華中科技大學(xué);2011年

6 樂軍;耐藥結(jié)核分枝桿菌的多維分析[D];復(fù)旦大學(xué);2003年

7 孫勇;北京地區(qū)結(jié)核分枝桿菌耐藥分子特點(diǎn)及結(jié)核分枝桿菌耐喹諾酮類藥物泵機(jī)制的初步研究[D];北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所;2012年

8 劉凱;結(jié)核分枝桿菌潛伏感染者和初發(fā)結(jié)核病患者免疫分子標(biāo)識(shí)的篩選[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2010年

9 范雄林;結(jié)核分枝桿菌基因疫苗的構(gòu)建及其免疫學(xué)特性的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2001年

10 宋文剛;茜草素抗結(jié)核分枝桿菌作用機(jī)制的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];吉林大學(xué);2007年

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2 王霞芳;IFN-γ增強(qiáng)BALB/c小鼠對結(jié)核分枝桿菌感染的抵抗力[D];蘇州大學(xué);2002年

3 曹立雪;應(yīng)用膜芯片檢測結(jié)核分枝桿菌rpoB基因突變[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2003年

4 韓喜琴;噬菌體生物擴(kuò)增法檢測結(jié)核分枝桿菌藥物敏感性研究及評價(jià)[D];北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所;2004年

5 王琳;結(jié)核分枝桿菌ClpX和ClpP2蛋白酶的克隆表達(dá)及其性質(zhì)研究[D];西南大學(xué);2010年

6 丁衛(wèi)民;耐多藥肺結(jié)核與結(jié)核分枝桿菌L型感染的臨床研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2003年

7 吳玉敏;1.結(jié)核分枝桿菌去標(biāo)簽Mtb8.4-Hspx和Hspx-Mtb8.4基因克隆及表達(dá) 2.FTY720對腎移植受者治療的安全性和有效性系統(tǒng)評價(jià)[D];蘭州大學(xué);2010年

8 佘茜;結(jié)核分枝桿菌PPE68蛋白的表達(dá)及初步應(yīng)用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

9 申峻松;結(jié)核分枝桿菌lhp基因的原核表達(dá)及其產(chǎn)物的單克隆抗體研制[D];揚(yáng)州大學(xué);2008年

10 宋宇;結(jié)核分枝桿菌MurA的優(yōu)化表達(dá)及功能分析[D];大連醫(yī)科大學(xué);2010年

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本文編號：1948581