本文選題：結核分枝桿菌 + AgA基因�。� 參考：《中國免疫學雜志》2011年01期

【摘要】：目的:構建編碼結核分枝桿菌Ag85A分泌蛋白重組真核表達質粒,研究其與hIL-12聯合免疫小鼠后的細胞免疫應答。方法:(1)構建質粒:采用PCR法從H37Rv菌株中擴增Ag85A編碼基因,用限制性內切酶消化后,插入克隆載體PMD20-T中,經酶切鑒定與序列測定證實后,以亞克隆法構建于真核表達載體PCDNA3.1的相應酶切位點。(2)動物實驗:50只C57BL/6N小鼠隨機分為:①Ag85A基因疫苗+hIL-12質粒組(聯合免疫組);②重組Ag85A基因疫苗組;③卡介苗BCG組(陽性對照);④空載體組(陰性對照);⑤PBS組(空白對照)�；蛞呙纭⒖蛰d體和PBS經肌內注射法免疫各組小鼠,每隔3周免疫1次,共免疫3次,BCG組經尾部皮下注射1×106CFU BCG免疫1次,約0.3 ml/只。第三次免疫小鼠后28天,處死各組小鼠,分離脾細胞,ELISA法檢測脾細胞培養(yǎng)上清液中IFNγ-、IL-2、IL-4水平;乳酸脫氫酶釋放法檢測脾細胞殺傷活性;分離的脾細胞經TB-PPD刺激后,XTT比色法檢測脾淋巴細胞增殖活性。結果:(1)成功構建結核分枝桿菌Ag85A基因DNA疫苗。(2)聯合免疫組能誘導較強烈的抗原特異性Th1型細胞免疫應答,免疫小鼠脾細胞培養(yǎng)上清液IFN-r和IL-2水平顯著高于Ag85A基因疫苗組,與BCG組相當,IL-4分泌減少;特異性CTL殺傷活性明顯增強;淋巴細胞增殖活性也明顯高于其他組別。結論:hlL-12表達質粒能夠增強結核分枝桿菌Ag85A基因DNA疫苗所誘導的小鼠免疫應答。
[Abstract]:Aim: to construct a recombinant eukaryotic expression plasmid encoding mycobacterium tuberculosis Ag85A secretory protein and study the cellular immune response of mice immunized with hIL-12. Methods: the plasmid was constructed: the Ag85A coding gene was amplified by PCR from H37Rv strain, digested with restriction endonuclease, inserted into clone vector PMD20-T, and confirmed by restriction endonuclease digestion and sequencing. In animal experiment: 50 C57BL/6N mice were randomly divided into 1 Ag85A gene vaccine hIL-12 plasmid group (combined immunized group) and recombinant Ag85A gene vaccine group. 3 BCG BCG group. The mice in each group were immunized with gene vaccine, empty vector and PBS intramuscularly once every 3 weeks. The mice in the control group were immunized with 1 脳 106CFU BCG subcutaneously once every 3 weeks, about 0.3 ml/. On the 28th day after the third immunization, the mice in each group were killed, the spleen cells were isolated and the levels of IL-4 in the supernatant of spleen cell culture were detected by Elisa, and the killing activity of splenocytes was detected by lactate dehydrogenase release method. The proliferative activity of splenic lymphocytes was detected by TB-PPD colorimetric assay. Results the Ag85A gene DNA vaccine of Mycobacterium tuberculosis was successfully constructed. The combined immunized group could induce a strong antigen-specific Th1 type cellular immune response. The levels of IFN-r and IL-2 in the supernatant of spleen cell culture of immunized mice were significantly higher than those in the Ag85A gene vaccine group. Compared with BCG group, IL-4 secretion was decreased, specific CTL cytotoxicity was increased, and lymphocyte proliferation activity was significantly higher than that in other groups. Conclusion the expression plasmid of 1: hlL-12 can enhance the immune response of mice induced by Ag85A gene DNA vaccine of Mycobacterium tuberculosis.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院呼吸內科;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(No.30872261)
【分類號】：R392.1

【參考文獻】

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