本文選題：銅綠假單胞菌 + PA-ⅠL蛋白��； 參考：《軍事醫(yī)學(xué)》2017年03期

【摘要】：目的構(gòu)建銅綠假單胞菌凝集素PA-ⅠL基因的重組表達(dá)質(zhì)粒,在大腸桿菌BL21(DE3)中高效表達(dá)并評價其生物學(xué)活性。方法以銅綠假單胞菌PAO1基因組為模板設(shè)計引物,構(gòu)建p ET-28a(+)-PA-ⅠL重組表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá),用Ni親和層析法對目的蛋白進(jìn)行純化。流式細(xì)胞術(shù)評價重組表達(dá)的PA-ⅠL蛋白對細(xì)胞表面Gb3/CD77的結(jié)合活性,菌落平板計數(shù)法評價重組蛋白在細(xì)菌黏附宿主細(xì)胞過程中的功能。結(jié)果與結(jié)論 SDS-PAGE電泳顯示,純化后的PA-ⅠL蛋白具有較高的純度,重組表達(dá)的PA-ⅠL蛋白能與細(xì)胞表面的糖鞘脂Gb3/CD77結(jié)合,且呈濃度依賴性抑制PA的PAO1對宿主細(xì)胞的黏附。
[Abstract]:Objective to construct the recombinant expression plasmid of Pseudomonas aeruginosa lectin PA- I L gene, and to express and evaluate its biological activity in Escherichia coli BL21 (DE3). Methods the primers were designed with PAO1 genome of Pseudomonas aeruginosa as a template, and P ET-28a (+) -PA- I L recombinant expression plasmid was constructed and transformed into Escherichia coli to induce expression, and Ni affinity layer was used. Purification of the target protein. Flow cytometry was used to evaluate the binding activity of the recombinant PA- I L protein on the cell surface Gb3/CD77. The function of the recombinant protein in the process of bacterial adhesion to the host cell was evaluated by the colony plate counting method. Results and conclusion SDS-PAGE electrophoresis showed that the purified PA- I L protein was highly purified and reorganized. The expression of PA- I L protein can bind to glycolipid Gb3/CD77 on the cell surface and inhibit the adhesion of PA PAO1 to host cells in a concentration dependent manner.
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所病原微生物生物安全國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中國科學(xué)院微生物研究所病原微生物與免疫學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【分類號】：R378.991

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本文編號：1947728