本文選題：巨細(xì)胞病毒 + 動物模型　； 參考：《華中科技大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：目的 建立小鼠巨細(xì)胞病毒(MCMV)先天感染模型,并觀察其腦組織的病理變化及感染狀況。 方法 1)MCMV毒株制備及感染性滴度的測定:剖宮取出孕中晚期BALB/c胎鼠,制備鼠胚成纖維細(xì)胞(MEF);擴(kuò)增MCMV RM461病毒株,用蝕斑法測定病毒滴度;稀釋至造模所需濃度(1×103 PFU/μL)備用; 2)MCMV先天感染模型的構(gòu)建:取孕11～13.5d(E11～13.5d)的BALB/c鼠,麻醉后逐個(gè)孕囊行羊膜腔內(nèi)病毒接種(RM461病毒懸液1μL,病毒量1×103PFU),小心復(fù)位后關(guān)腹;對照組羊膜腔內(nèi)注射DMEM培養(yǎng)液1μL。單獨(dú)飼養(yǎng)5d后處死孕鼠,剖宮取出胎鼠,麻醉處死,取胎鼠腦組織制作冰凍切片; 3)胎腦組織病理改變及病毒抗原檢測:腦組織切片常規(guī)HE染色,光鏡下觀察病理學(xué)變化;采用免疫酶組化及免疫熒光法檢測腦組織中的MCMV早期抗原。 結(jié)果 1)成功擴(kuò)增MCMV RM461毒株,測得感染性病毒滴度為3.27×107PFU/mL; 2)成功構(gòu)建MCMV先天感染模型。感染組和對照組的胎鼠存活率分別為71.9%和76.7%。與對照組相比,羊膜腔內(nèi)接種MCMV病毒對胎鼠存活率、吸收胎率、死胎率及胎鼠頭部重量無明顯影響,但可致胎鼠體重降低; 3)腦組織病理學(xué)變化:對照組腦組織未見有結(jié)構(gòu)異常;感染組出現(xiàn)腦室、腦溝回發(fā)育不良,神經(jīng)細(xì)胞水腫,腦室區(qū)、腦室下區(qū)和大腦皮質(zhì)區(qū)主要有淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞等炎癥細(xì)胞浸潤; 4)病毒抗原檢測:在宮內(nèi)感染組,免疫酶學(xué)組化法發(fā)現(xiàn)腦室區(qū)、腦室管膜下區(qū)、大腦皮質(zhì)和海馬區(qū)可見病毒感染細(xì)胞;免疫熒光觀察到的主要感染部位與免疫酶組化一致。 結(jié)論 通過羊膜腔內(nèi)注射MCMV RM461病毒懸液成功建立MCMV先天感染模型,為研究MCMV先天感染致腦發(fā)育異常機(jī)制提供合適的整體研究模型。
[Abstract]:Purpose The congenital infection model of mouse cytomegalovirus (MCMV) was established and the pathological changes and infection status of its brain tissue were observed. Method The preparation of 1)MCMV virus strain and the determination of infective titer: take out the fetal mouse of BALB/c in the middle and late pregnancy, prepare the mouse embryo fibroblast, amplify the MCMV RM461 virus strain, determine the virus titer by plaque method, dilute to 1 脳 10 ~ 3 PFU/ 渭 L to make the model. Construction of 2)MCMV congenital infection model: pregnant BALB/c mice with 1113.5 d (E1113.5 d) were given intraamniotic virus inoculation with RM461 virus suspension 1 渭 L, virus volume 1 脳 103 PFUU, careful reduction and abdominal closure, and control group was injected with DMEM culture fluid 1 渭 L. After feeding alone for 5 days, the pregnant rats were killed, the fetal mice were removed from the uterus, and the fetal brain tissue was taken out to make frozen sections. 3) pathological changes of fetal brain tissue and detection of virus antigen: routine HE staining and light microscopy were used to observe the pathological changes in brain tissue, and MCMV early antigen in brain tissue was detected by immunohistochemistry and immunofluorescence method. Result 1) the MCMV RM461 strain was successfully amplified, and the titer of infectious virus was 3.27 脳 10 ~ (7) PFU / mL; 2) successful construction of MCMV congenital infection model. The survival rates of infected group and control group were 71.9% and 76.7%, respectively. Compared with the control group, intraamniotic inoculation with MCMV virus had no significant effect on fetal survival rate, fetal absorption rate, fetal death rate and fetal head weight, but could result in fetal mice weight loss. 3) histopathological changes of brain: there were no structural abnormalities in brain tissue in control group, and there were mainly lymphocytes in cerebral ventricle, hypoplasia of sulcus gyrus, neuronal edema, ventricular area, subventricular area and cerebral cortex in infected group. Infiltration of inflammatory cells such as monocytes; 4) virus antigen detection: in the intrauterine infection group, the virus infected cells were found in the ventricular area, the subependymal area, the cerebral cortex and the hippocampal area, and the main sites of infection observed by immunofluorescence were the same as those observed by immunohistochemistry. Conclusion The model of congenital MCMV infection was successfully established by intraamniotic injection of MCMV RM461 virus suspension, which provided a suitable overall model for studying the mechanism of cerebral dysplasia caused by MCMV congenital infection.
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R-332

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本文編號：1941658