本文選題：重組BCG + 細胞粘附��； 參考：《第四軍醫(yī)大學》2011年碩士論文

【摘要】：背景 疫苗在預(yù)防和治療人類多種疫癥的過程中發(fā)揮了不可磨滅的作用。其中,基因工程重組活載體疫苗因其能夠誘導產(chǎn)生體液、細胞甚至黏膜免疫而受到廣大研究者的關(guān)注�；蛑亟M卡介苗(Gene recombinant Bacillus Calmette-Guerin vaccine,rBCG)就是一種單次接種即可持續(xù)誘導機體對靶抗原的免疫應(yīng)答的基因工程疫苗。它的構(gòu)建是利用基因工程學技術(shù)對BCG基因進行改造使其提高免疫原性,誘導產(chǎn)生對一種或多種疾病的持久防御,以預(yù)防和治療疾病。迄今為止,研究者們已成功制備了多種攜帶不同抗原的rBCG,并將其用于結(jié)核[1]、腫瘤[2]和寄生蟲感染[3]等多種疾病的防治。本研究小組前期已成功構(gòu)建胞壁型Der p2-rBCG和胞壁型PEB1-Der p2-rBCG的基因重組疫苗。在此研究的基礎(chǔ)上,我們采用體外細胞培養(yǎng)的方法,評價疫苗PEB1-Der p2-rBCG與上皮細胞的結(jié)合能力。 目的 評價PEB1介導的屋塵螨抗原(Der p2)重組BCG疫苗(PEB1-Derp2-rBCG)與人上皮細胞的結(jié)合能力。 實驗方法和結(jié)果 1.胞壁型PEB1-Der p2-rBCG與上皮細胞的粘附實驗 采用體外細胞培養(yǎng)的方法,分別將普通BCG、胞壁型Der p2-rBCG和胞壁型融合蛋白PEB1-Der p2-rBCG與HeLa細胞及人類腸黏膜上皮細胞(HIEC)進行共孵育,利用HE和抗酸染色法對各組細胞與疫苗的粘附結(jié)果進行染色,光學顯微鏡下計數(shù)各組的粘附率,并進行比較。孵育24小時后,無論HeLa細胞還是HIEC,PEB1-Der p2-rBCG組較普通BCG組和Der p2-rBCG組的粘附率明顯提高,差異有顯著性(P0.05),但是,Der p2-rBCG組與普通BCG組比較沒有明顯差異(P0.05)。 2.胞壁型PEB1-Der p2-rBCG與上皮細胞的抑制和阻斷實驗 采用相同的方法將各組疫苗與細胞進行共孵育,并對各組分別加入PEB1蛋白或抗PEB1多克隆抗體進行粘附抑制和阻斷,于相同的時間點終止孵育染色后觀察其對結(jié)合能力的影響。結(jié)果顯示PEB1蛋白或抗PEB1多克隆抗體的加入對PEB1-Der p2-rBCG組的粘附功能有明顯抑制作用(兩組都P0.05);但是,對普通BCG組和Der p2-rBCG組的粘附無影響(各組間P0.05)。 結(jié)論 空腸彎曲菌外膜蛋白PEB1具有介導增強PEB1-Der p2-rBCG與上皮細胞粘附的能力。
[Abstract]:Background Vaccines play an indelible role in the prevention and treatment of human diseases. Among them, recombinant vector vaccine has attracted much attention because of its ability to induce humoral, cellular and even mucosal immunity. Recombinant Bacillus Calmette Calmette Guerin (BCG) Gene recombinant Bacillus Calmette-Guerin Vaccine (rBCG) is a kind of genetically engineered vaccine which can continuously induce immune response to target antigen by single inoculation. Its construction is to improve the immunogenicity of BCG gene by genetic engineering technology, and to induce a lasting defense against one or more diseases in order to prevent and treat the disease. So far, researchers have successfully prepared a variety of rBCGs carrying different antigens and used them in the prevention and treatment of tuberculosis [1], tumor [2] and parasitic infection [3]. In the early stage of this study, we have successfully constructed the recombinant vaccine of cell wall type Der p2-rBCG and cell wall type PEB1-Der p2-rBCG. On the basis of this study, we used the method of cell culture in vitro to evaluate the binding ability of vaccine PEB1-Der p2-rBCG to epithelial cells. Purpose To evaluate the binding ability of PEB1 mediated Der p2) recombinant BCG vaccine PEB1-Derp2-rBCGwith human epithelial cells. Experimental methods and results 1. Adhesion of cell wall type PEB1-Der p2-rBCG to epithelial cells Common BCG, cell wall type Der p2-rBCG and cell wall type fusion protein PEB1-Der p2-rBCG were incubated with HeLa cells and human intestinal epithelial cells by cell culture in vitro. HE and acid fast staining were used to stain the adhesion of cells to the vaccine. The adhesion rates of each group were counted under optical microscope and compared. After incubation for 24 hours, the adhesion rate of HeLa cells and HIEC-PEB1-Der p2-rBCG group was significantly higher than that of normal BCG group and Der p2-rBCG group, and the difference was significant (P 0.05), but there was no significant difference between Der p2-rBCG group and BCG group. 2. Inhibition and blocking of cell wall type PEB1-Der p2-rBCG and epithelial cells The same method was used to incubate each vaccine with the cells, and the adhesion inhibition and blocking of each group with PEB1 protein or anti PEB1 polyclonal antibody were carried out, and the effect on binding ability was observed after the incubation staining was terminated at the same time point. The results showed that the addition of PEB1 protein or anti PEB1 polyclonal antibody could significantly inhibit the adhesion function of PEB1-Der p2-rBCG group (P0.05 in both groups, but had no effect on the adhesion between normal BCG group and Der p2-rBCG group (P0.05). Conclusion Campylobacter jejuni outer membrane protein PEB1 can mediate the enhancement of PEB1-Der p2-rBCG adhesion to epithelial cells.
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R392

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