本文選題：內(nèi)皮祖細(xì)胞 + 大自噬　； 參考：《蘇州大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的：分別應(yīng)用SB203580（吡啶異咪噠唑化合物）和6-AN（6-aminonicotinamide）作用于內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelial progenitor cells EPCs）,觀察大自噬標(biāo)記物L(fēng)C3-Ⅱ和分子伴侶介導(dǎo)自噬（CMA）的標(biāo)記物L(fēng)AMP-2A的變化情況，探討CMA與大自噬的關(guān)系。 方法：1.密度梯度離心法分離SD大鼠的骨髓單個(gè)核細(xì)胞（bone marrow-derivedmononuclear cells, BMMNCs），EGM-2MV培養(yǎng)基誘導(dǎo)、培養(yǎng)、擴(kuò)增骨髓源性EPCs并鑒定。倒置顯微鏡觀察、MTT法檢測(cè)EPCs增殖情況。2.在EPCs中加入不同濃度的SB203580（2.5uM、5.0uM、10uM、20uM、40uM）和6-AN（2.5mM、5.0mM、10mM、20mM、40mM），分別作用24小時(shí)。以MTT法觀察藥物對(duì)EPCs增殖的影響；FCM檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況；Western blot檢測(cè)LC3-Ⅱ和LAMP-2A蛋白的表達(dá)情況；激光共聚焦觀察細(xì)胞內(nèi)LAMP-2A的變化。均數(shù)以（x±s）表示，采用單因素方差分析各組均數(shù)，（P＜0.05）有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（P＞0.05）無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：1.Ficoll法分離的大鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞，經(jīng)EGM-2MV培養(yǎng)基培養(yǎng)可在體外誘導(dǎo)分化為EPCs。2.SB203580在濃度為2.5uM時(shí)對(duì)EPCs增殖抑制作用不明顯，5.0uM及以上時(shí)抑制作用較顯著（P＜0.05）；6-AN濃度在2.5mM時(shí)對(duì)EPCs增殖促進(jìn)作用不明顯，5.0mM及以上濃度時(shí)有明顯促進(jìn)作用（P＜0.05）。3.SB203580在2.5uM時(shí)，細(xì)胞凋亡較少，5.0uM及以上時(shí)凋亡逐漸增多；6-AN各濃度組凋亡逐漸降低，，在40mM時(shí)凋亡增高。4. SB203580各濃度組LC3-II蛋白呈逐漸增高趨勢(shì)，Lamp-2a呈逐漸降低趨勢(shì)。6-AN各濃度組LC3-II表達(dá)逐漸降低，Lamp-2a表達(dá)逐漸升高，但在40mM時(shí)兩者表達(dá)均下調(diào)。5.激光共聚焦觀察細(xì)胞內(nèi)Lamp-2a的變化情況，6-AN組較SB203580組表現(xiàn)出胞漿內(nèi)熒光明顯的增強(qiáng)。 結(jié)論：SB203580抑制EPCs的CMA后，大自噬增強(qiáng)，一定程度上抑制細(xì)胞增殖，促進(jìn)其凋亡；6-AN激活CMA，大自噬表現(xiàn)一定程度的下調(diào)，細(xì)胞凋亡減少。CMA和大自噬之間表現(xiàn)出功能互補(bǔ)的現(xiàn)象，共同維持細(xì)胞功能的穩(wěn)定。
[Abstract]:Aim: to observe the effects of SB203580 (pyridine isomidazole compound) and 6-ANP 6-aminotinamide on endothelial progenitor cells EPCsN in endothelial progenitor cells (EPCs), and to investigate the relationship between CMA and autophagy by observing the changes of LC3- 鈪

本文編號(hào)：1928446