本文選題：日本血吸蟲 + 尼克酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶��； 參考：《南昌大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：血吸蟲病是一種嚴(yán)重危害人體健康和阻礙社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的人畜共患寄生蟲病�？刂迫毡狙x病流行仍然是我國(guó)亟待解決的公共衛(wèi)生問題之一。由于采用反復(fù)大規(guī)模吡喹酮化療并不能阻止血吸蟲重復(fù)感染,且有可能產(chǎn)生抗藥性等問題,因而,疫苗作為長(zhǎng)期有效的血吸蟲病防治可能措施而倍受關(guān)注,有關(guān)的研制努力近年十分活躍。隨著日本血吸蟲基因組草圖的完成,血吸蟲疫苗研究進(jìn)入了后基因組時(shí)代,已獲得了蟲體不同發(fā)育階段及性別相關(guān)的基因表達(dá)和蛋白表達(dá)譜的大量數(shù)據(jù)。這些數(shù)據(jù)有助于全面認(rèn)識(shí)和理解血吸蟲的生長(zhǎng)發(fā)育、宿主與血吸蟲的相互作用、免疫逃避以及潛在疫苗候選抗原。迄今,一些有希望的日本血吸蟲疫苗候選抗原已經(jīng)獲得了克隆和表達(dá)。但動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,這些候選抗原的保護(hù)效果并不理想,減蟲率一般在20%-40%,減卵率在30%-70%,保護(hù)率較低,尚不能滿足血吸蟲病實(shí)際防治的需要。因此有必要進(jìn)一步發(fā)掘新的疫苗候選抗原分子。 尼克酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(NAMPT),又稱為前B細(xì)胞增強(qiáng)因子(PBEF),是尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)補(bǔ)救合成途徑的限速酶,催化底物尼克酰胺轉(zhuǎn)變?yōu)橹虚g產(chǎn)物尼克酰胺腺嘌呤單核苷酸(NMN),后者在尼克酰胺腺嘌呤單核苷酸腺苷酰基轉(zhuǎn)移酶的作用下生成終產(chǎn)物NAD。NAD是細(xì)胞氧化還原反應(yīng)經(jīng)典輔酶,具有廣泛的生物學(xué)功能。另外,NAMPT(?)能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、增值和分化,促進(jìn)細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取,具有類胰島素功能。白介素16(IL-16)因可以誘導(dǎo)人和大鼠CD4+T細(xì)胞游走應(yīng)答,又稱為淋巴細(xì)胞趨化因子(lymphocyte chemoattractant factor, LCF),IL-16前體無(wú)生物學(xué)活性,在胞漿中由Caspase酶加工為分泌性的IL-16單體,并以非共價(jià)方式結(jié)合為四聚體結(jié)構(gòu),從而具有了刺激細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)、分化以及抑制HIV復(fù)制的生物學(xué)活性。日本血吸蟲尼克酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(SjNAMPT)基因和白介素16(SjIL-16)基因是日本血吸蟲基因組研究中發(fā)現(xiàn)的2種新基因。迄今為止,國(guó)內(nèi)外對(duì)SjNAMPT及SjIL-16的相關(guān)研究未見報(bào)道。 本研究以尋找新的疫苗候選抗原為目的,根據(jù)SjNAMPT基因和SjIL-16基因序列,采用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)其編碼蛋白的基本結(jié)構(gòu)和功能,并設(shè)計(jì)引物,以日本血吸蟲成蟲cDNA為模板,PCR擴(kuò)增目的基因,將其克隆到原核表達(dá)載體pET8a中,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,IPTG誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物通過(guò)鎳柱親和層析純化,通過(guò)免疫印跡技術(shù)檢測(cè)純化蛋白的免疫原性,初步分析了SjNAMPT基因和SjIL-16基因在日本血吸蟲不同發(fā)育階段的轉(zhuǎn)錄水平,并通過(guò)ELISA和免疫保護(hù)性實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)SjNAMPT和SjIL-16蛋白的診斷效能和免疫保護(hù)效果。 本研究在原核表達(dá)系統(tǒng)中成功克隆表達(dá)了SjNAMPT和SjIL-16基因,獲得了以不可溶包涵體形式表達(dá)的純化蛋白。 轉(zhuǎn)錄特異性研究表明：SjNAMPT基因和SjIL-16基因都是蟲期特異性表達(dá)基因。SjNAMPT基因在蟲卵和雌蟲中不轉(zhuǎn)錄,在毛蚴、胞蚴、尾蚴、童蟲、合抱成蟲,雄蟲中轉(zhuǎn)錄水平較高,其在雌蟲,雄蟲階段轉(zhuǎn)錄差異表明該基因可能是性別差異基因。SjIL-16基因在血吸蟲發(fā)育初期階段不轉(zhuǎn)錄或低轉(zhuǎn)錄,而在進(jìn)入終宿主后的童蟲,雄蟲和合抱成蟲階段中高水平轉(zhuǎn)錄,表明該基因的轉(zhuǎn)錄可能受到日本血吸蟲發(fā)育機(jī)制的調(diào)節(jié),并有可能與終宿主體內(nèi)日本血吸蟲的發(fā)育、分化或宿主依賴性有關(guān)。此外,SjIL-16在雌蟲個(gè)體和雄蟲個(gè)體的轉(zhuǎn)錄差異說(shuō)明該基因也可能是性別差異基因。 免疫原性分析顯示：SjNAMPT(?)(?)SjIL-16蛋白都具有一定的免疫原性,可作為疫苗的候選抗原。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(ELISA)檢測(cè)血吸蟲病人血清中的抗體,SjNAMPT(?)(?)SjIL-16蛋白的敏感性分別為56.0%和60.0%,特異性分別為94.4%和95.4%。 SjNAMPT和SjIL-16蛋白免疫C57/BL6雌性小鼠,減蟲率分別為19.5%和20.7%,糞減卵率分別為24.0%和18.5%,與佐劑組相比,差異具有顯著性,說(shuō)明SjNAMPT和SjIL-16蛋白作為候選疫苗分子可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生部分保護(hù)效果。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1923178