本文選題：內(nèi)脂素 + Ⅰ型膠原　； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的：本研究通過(guò)觀察不同時(shí)間高糖刺激對(duì)體外培養(yǎng)的新生大鼠心肌成纖維細(xì)胞內(nèi)脂素、Ⅰ型膠原表達(dá)的影響，進(jìn)而探討內(nèi)脂素和Ⅰ型膠原在心肌纖維化形成過(guò)程中的作用，為臨床糖尿病所致的心血管疾病的預(yù)防和診治提供新的思路。 方法：無(wú)菌試驗(yàn)條件下不分性別的提取新生2-3天的Sprague-Dawley(SD)大鼠心肌成纖維細(xì)胞。然后加入含10％胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)基，置于37℃、5％CO_2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3d，細(xì)胞生長(zhǎng)至融合狀態(tài)時(shí)，按1:2傳代，實(shí)驗(yàn)應(yīng)用2-3代細(xì)胞。經(jīng)48小時(shí)含血清培養(yǎng)，24小時(shí)無(wú)血清培養(yǎng)之后，選取生長(zhǎng)狀態(tài)好的細(xì)胞隨機(jī)分組。①低糖對(duì)照組（NG組，5.5mmol/L），不同時(shí)間高糖刺激組（HG組，30mmol/L）五組：②6h組、③12h組、④24h組、⑤48h組，⑥高滲對(duì)照組（OC組，含5.5mmol／L葡萄糖+24.5mmol／L甘露醇），每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。以相同濃度的高糖（30mmol/L）作用不同時(shí)間后，以GAPDH為內(nèi)對(duì)照，應(yīng)用real time-PCR技術(shù)檢測(cè)心肌成纖維細(xì)胞中內(nèi)脂素、Ⅰ型前膠原的mRNA含量，應(yīng)用ELISA技術(shù)檢測(cè)培養(yǎng)基中內(nèi)脂素、Ⅰ型膠原蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)果： 1不同時(shí)間的高糖（30mmol/L）作用對(duì)于心肌成纖維細(xì)胞中內(nèi)脂素的mRNA表達(dá)的影響：內(nèi)脂素mRNA表達(dá)水平在12h組、24h組和48h組較低糖對(duì)照組均明顯升高，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)，內(nèi)脂素mRNA表達(dá)水平于24h組達(dá)高峰；6h組、12h組、24h組內(nèi)脂素mRNA表達(dá)水平呈遞增趨勢(shì)，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；48h組內(nèi)脂素mRNA表達(dá)水平略低于24h組，但是沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；6h組和高滲組內(nèi)脂素mRNA表達(dá)水平略高于低糖對(duì)照組，但是沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 2不同時(shí)間高糖（30mmol/L）作用對(duì)于心肌成纖維細(xì)胞中Ⅰ型前膠原mRNA表達(dá)的影響：心肌成纖維細(xì)胞在高糖作用下Ⅰ型前膠原mRNA表達(dá)水平在12h組、24h組、48h組較低糖對(duì)照組均明顯升高，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)，Ⅰ型前膠原mRNA表達(dá)水平于24h組達(dá)高峰；6h組、12h組、24h組Ⅰ型前膠原mRNA表達(dá)水平呈遞增趨勢(shì)，，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；48h組Ⅰ型前膠原mRNA表達(dá)水平略低于24h組，但是沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；6h組和高滲組Ⅰ型前膠原mRNA表達(dá)水平略高于低糖對(duì)照組，但是沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 3不同時(shí)間的高糖（30mmol/L）作用對(duì)于培養(yǎng)基中內(nèi)脂素的蛋白表達(dá)的影響：高糖作用下培養(yǎng)基中內(nèi)脂素蛋白表達(dá)水平在12h組、24h組和48h組較低糖對(duì)照組均明顯升高，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)，且于24h組達(dá)高峰；6h組、12h組、24h組培養(yǎng)基中內(nèi)脂素蛋白表達(dá)水平呈遞增趨勢(shì)，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；48h組內(nèi)脂素蛋白表達(dá)水平略低于24h組，但是沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；6h組和高滲組內(nèi)脂素蛋白表達(dá)水平略高于低糖對(duì)照組，但是沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 4不同時(shí)間高糖（30mmol/L）作用對(duì)于培養(yǎng)基中Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)的影響：高糖作用下培養(yǎng)基中Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)水平在12h組、24h組、48h組較低糖對(duì)照組均明顯升高，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)，且于24h組達(dá)高峰；6h組、12h組、24h組培養(yǎng)基中Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)水平呈遞增趨勢(shì)，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；48h組培養(yǎng)基中Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)水平略低于24h組，但是沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；6h組和高滲組Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)水平略高于低糖對(duì)照組，但是沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論：心肌成纖維細(xì)胞可以表達(dá)內(nèi)脂素、Ⅰ型膠原。在高糖作用24h內(nèi)，高濃度的葡萄糖可促進(jìn)體外培養(yǎng)的心肌成纖維細(xì)胞內(nèi)脂素、Ⅰ型膠原的表達(dá)的增加，并呈時(shí)間依賴性。高糖對(duì)于心肌成纖維細(xì)胞內(nèi)脂素、Ⅰ型膠原表達(dá)的影響是由于葡萄糖濃度，而非滲透壓造成。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of high glucose stimulation on the expression of endothelin and type I collagen in cultured neonatal rat cardiac fibroblasts in vitro , and to explore the role of endothelins and type I collagen in the formation of myocardial fibrosis , and to provide a new idea for the prevention and treatment of cardiovascular diseases caused by diabetes .

Methods : The myocardial fibroblasts of Sprague - Dawley ( SD ) rats were cultured for 2 - 3 days under the condition of sterile test . The cells were cultured in DMEM medium containing 10 % fetal bovine serum for 2 - 3 days . The cells were cultured for 2 - 3 days at 37 鈩

本文編號(hào)：1917008