本文選題：氨基端前B型鈉尿肽 + 單克隆抗體��； 參考：《中國老年學(xué)雜志》2017年03期

【摘要】：目的通過經(jīng)典單克隆抗體制備技術(shù)制備氨基端前B型鈉尿肽(NT-pro BNP)單克隆抗體,將單克隆抗體進(jìn)行特異性和親和力鑒定,并用于免疫學(xué)檢測試劑盒的開發(fā)。方法用帶His-Trx-標(biāo)簽蛋白的NT-pro BNP免疫Balb/C小鼠制備單克隆抗體。使用PEG1500化學(xué)融合法將小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0進(jìn)行融合。用不帶標(biāo)簽的NT-pro BNP對獲取的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行反復(fù)多次克隆篩選,將穩(wěn)定分泌抗體的雜交瘤細(xì)胞株經(jīng)腹腔注射Balb/C小鼠誘導(dǎo)產(chǎn)生腹水,經(jīng)蛋白G親和純化后獲得NT-pro BNP單克隆抗體并對其進(jìn)行親和力和特異性進(jìn)行鑒定。結(jié)果成功進(jìn)行細(xì)胞融合并獲得4株穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,抗體分泌亞型為Ig G1,可特異性識別NT-pro BNP。經(jīng)腹腔體內(nèi)誘生法和蛋白G親和純化,獲得高質(zhì)量NT-pro BNP單克隆抗體,經(jīng)ELISA檢測抗體效價在1∶10~5以上。結(jié)論通過傳統(tǒng)經(jīng)典單克隆抗體制備技術(shù)成功制備NT-pro BNP單克隆抗體,為NT-pro BNP檢測試劑盒的研發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to prepare the NT-pro BNPs monoclonal antibody with amino terminal B type natriuretic peptide by classical monoclonal antibody preparation technique, and to identify the specificity and affinity of the monoclonal antibody, and to develop a kit for immunological detection. Methods NT-pro BNP with His-Trx- tag protein was used to immunize Balb/C mice to prepare monoclonal antibody. Mouse spleen cells and myeloma cells (SP2/0) were fused by PEG1500 chemical fusion method. Unlabeled NT-pro BNP was used to clone and screen the hybridoma cells repeatedly and repeatedly. The hybridoma cell lines secreting stable antibodies were induced to produce ascites by intraperitoneal injection of Balb/C mice. Monoclonal antibody (McAb) of NT-pro BNP was obtained by affinity purification of protein G, and its affinity and specificity were identified. Results four hybridoma cell lines secreting monoclonal antibody stably were successfully fused. The secretory subtype of antibody was Ig G1, which could specifically recognize NT-pro BNPs. High quality monoclonal antibody of NT-pro BNP was obtained by induction and affinity purification of protein G in abdominal cavity. The titer of antibody detected by ELISA was more than 1: 10 ~ (5). Conclusion NT-pro BNP monoclonal antibody was successfully prepared by classical monoclonal antibody preparation technique, which laid a foundation for the development of NT-pro BNP detection kit.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(31270984)
【分類號】：R392-33

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本文編號：1910819