本文選題：蛋白酶體抑制 + 糖原合酶激酶-3　； 參考：《廣州醫(yī)學院》2011年碩士論文

【摘要】：背景 泛素-蛋白酶體系統(tǒng)是真核細胞最主要的胞內(nèi)蛋白降解途徑。泛素-蛋白酶體系統(tǒng)(ubiquitin proteasome system, UPS)參與許多細胞進程,包括細胞周期、細胞增殖、氧化應(yīng)激等。UPS主要通過三種蛋白水解作用(糜蛋白酶樣作用、胰蛋白酶樣作用和半胱天冬酶樣作用)來降解靶蛋白。肽醛(例如:MG132)和硼酸肽可以可逆地抑制蛋白降解作用,而β-內(nèi)酯衍生物(例如:lactacystin)和環(huán)氧酮(例如:環(huán)氧酶素)可以不可逆地抑制蛋白降解。近年發(fā)現(xiàn),UPS在各種心血管疾病的發(fā)生發(fā)展中也發(fā)揮重要作用。有研究證明,蛋白酶體抑制可以通過降低NF-κB的活性而減輕壓力負荷導(dǎo)致的心肌重構(gòu),從一定程度上逆轉(zhuǎn)心肌肥大。另外在原代新生大鼠心肌細胞也發(fā)現(xiàn),部分抑制蛋白酶體活性可抑制心肌肥大。 GSK-3作為一種絲/蘇氨酸蛋白激酶,參與調(diào)節(jié)許多細胞功能如代謝、轉(zhuǎn)錄、翻譯、細胞生長和凋亡。以往研究證實,GSK-3β是一種內(nèi)源性心肌肥大負調(diào)控因子。GSK-3β激活可磷酸化一些促心肌肥大因子如真核翻譯起始因子(eIF) 2Bε,活性T細胞核因子(NFAT) , GATA4和myocardin而使它們失去活性,進而抑制心肌肥大。而本項目組曾在培養(yǎng)的人胚腎細胞(HEK293)發(fā)現(xiàn),蛋白酶體抑制可以明顯提高GSK-3β的活性。本文用原代培養(yǎng)的新生大鼠心肌細胞進行實驗,第一部分主要探討蛋白酶體抑制對心肌肥大的作用以及對GSK-3β活性的影響;第二部分研究蛋白酶體抑制改善心肌肥大的機制,從而為心肌肥大的機制研究提供新的思路。 第一部分蛋白酶體抑制對心肌細胞肥大的改善作用及對GSK-3活性的影響 目的 1.蛋白酶體抑制劑對心肌肥大的作用 2.蛋白酶體抑制劑對心肌細胞GSK-3β活性的影響 方法 選用原代培養(yǎng)的新生SD大鼠心肌細胞進行實驗。用AngⅡ(100nM)誘導(dǎo)心肌肥大模型,同時給予蛋白酶體抑制劑lactacystin(1μM)共同孵育細胞24小時。用熒光底物法檢測蛋白酶體糜樣蛋白酶活性。檢測胚胎型基因ANF mRNA表達、蛋白合成速率和心肌表面積等心肌肥大指標。用Western-blot法檢測各分組心肌細胞p-GSK-3β表達的變化。 結(jié)果 1.給予蛋白酶體抑制劑lactacystin(1μM)處理細胞24小時后,蛋白酶體糜樣蛋白酶活性顯著降低(P0.05) 2.用蛋白酶體抑制劑lactacystin (1μM)處理Ang-Ⅱ(100 nM)誘導(dǎo)的心肌細胞24小時后, lactacystin抑制AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細胞胚胎型基因ANF mRNA表達增多,蛋白合成速率、心肌細胞表面積增加(P0.05)。 3.用蛋白酶體抑制劑lactacystin (1μM)處理Ang-Ⅱ(100nM)誘導(dǎo)的心肌細胞24小時后,用Western blot法檢測GSK-3β活性的改變情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在24小時,與心肌肥大組相比,lactacystin明顯降低Ang-Ⅱ誘導(dǎo)的p-GSK3β(ser9)表達,即GSK-3β活性升高,表明lactacystin可引起肥大心肌細胞的GSK-3β活性升高。 小結(jié) 蛋白酶體抑制劑可以改善Ang-Ⅱ誘導(dǎo)的心肌細胞肥大,同時可以使肥大心肌細胞GSK-3β活性升高。 第二部分蛋白酶體抑制通過GSK-3β改善心肌細胞肥大 目的 蛋白酶體抑制是否通過GSK-3β途徑改善心肌肥大。 方法 在第一部分的研究基礎(chǔ)上,給予GSK-3的抑制劑LiCl (10μM),Ang-Ⅱ(100nM), lactacystin (1μM)共孵育心肌細胞24小時,以下調(diào)GSK-3的活性。用熒光底物法檢測蛋白酶體糜樣蛋白酶活性。檢測胚胎型基因ANF mRNA表達、蛋白合成速率和心肌表面積等心肌肥大指標。用Western-blot法檢測各分組心肌細胞p-GSK3β(ser9)蛋白表達的變化。 結(jié)果 1.給予蛋白酶體抑制劑lactacystin處理細胞24小時后,蛋白酶體糜樣蛋白酶活性顯著降低(P0.05),給予LiCl的lactacystin處理組中,蛋白酶體糜樣蛋白酶活性也明顯降低(P0.05)。 2.給予GSK-3抑制劑LiCl后,lactacystin抑制的肥大心肌心肌細胞中胚胎型基因ANF mRNA表達增多,蛋白合成速率、心肌細胞表面積增加的作用被逆轉(zhuǎn)。 3.給予GSK-3抑制劑LiCl后,lactacystin降低Ang-Ⅱ誘導(dǎo)的p-GSK-3β(ser9)蛋白表達的作用也被逆轉(zhuǎn)。 小結(jié) 蛋白酶體抑制通過GSK-3β改善心肌肥大。 全文結(jié)論 1.蛋白酶體抑制可以改善Ang-Ⅱ誘導(dǎo)的心肌肥大。 2.蛋白酶體抑制可能通過GSK-3β抑制Ang-Ⅱ誘導(dǎo)的心肌細胞肥大。
[Abstract]:Background

The ubiquitin - proteasome system is the most important pathway of intracellular protein degradation in eukaryotic cells . The ubiquitin - proteasome system ( UPS ) is involved in many cellular processes , including cell cycle , cell proliferation , oxidative stress , etc . The UPS plays an important role in the development of various cardiovascular diseases .

As a kind of silk / threonine protein kinase , gsk - 3 is involved in regulating many cell functions such as metabolism , transcription , translation , cell growth and apoptosis .

The effect of first part proteasome inhibition on myocardial hypertrophy and its effect on activity of gsk - 3

Purpose

1 . Effect of proteasome inhibitor on cardiac hypertrophy

2 . Effect of proteasome inhibitor on activity of myocardial cell line - 3 beta

method

Cultured neonatal SD rat cardiomyocytes were cultured in primary culture . The myocardial hypertrophy model was induced by Ang 鈪，

本文編號：1888963