本文選題：腸道病毒71型 + 病毒滴度　； 參考：《河南師范大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：手足口病是兒童流行疾病中比較常見的疾病之一,許多種腸道病毒都可以引起手足口病,近幾年來在我國以腸道病毒71型(EV71)為主要的病原體。自1997年以來,EV71病毒的流行在亞太地區(qū)呈現(xiàn)上升的趨勢,甚至引起了嚴(yán)重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的感染或死亡,引起了人們的密切關(guān)注。由于目前還沒有針對(duì)EV71病毒的特效藥和疫苗,因此,研發(fā)一種能有效控制EV71病毒流行的疫苗已經(jīng)勢在必行。本研究的目的是為建立純化EV71病毒工藝,為以后制備EV71病毒的疫苗提供可靠的研究數(shù)據(jù)。 本研究以EV71病毒粗提液做為研究的材料,建立了凝膠過濾層析和離子交換層析相結(jié)合的純化工藝,為EV71病毒純度的提高提供了最佳的層析參數(shù)。首先,對(duì)Sepharose 4 Fast Flow凝膠過濾層析參數(shù)的篩選,選用不同的洗脫流速、不同的樣品上樣量、不同緩沖溶液的pH值和不同鹽濃度對(duì)EV71病毒粗提液進(jìn)行連續(xù)洗脫。結(jié)果表明凝膠過濾層析的洗脫流速、樣品上樣量、緩沖溶液的pH值和鹽濃度對(duì)EV71病毒均能不同程度地影響EV71病毒的分粗提液的分離效果。在實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi),選擇洗脫流速為60cm/h、樣品的上樣量為5%CV、緩沖溶液的pH值為7.5和鹽濃度為0.1mol/L時(shí),對(duì)EV71病毒原液的分離效果比較理想。接著選用了Q Sepharose XL陰離子膠作為層析介質(zhì)來純化EV71病毒原液。影響離子交換層析的因素有離子強(qiáng)度、pH、溫度和流速等,本文主要探討了離子強(qiáng)度和pH對(duì)離子交換制備EV71病毒的影響。先采用線性梯度洗脫法,初步篩選制備EV71病毒平衡緩沖液含氯化鈉的濃度范圍和洗脫緩沖液中氯化鈉的濃度;然后在同一pH條件下,改變平衡緩沖液中氯化鈉的含量,計(jì)算在每種平衡緩沖液下EV71病毒的效價(jià)和滴度,選擇最佳的平衡緩沖液的氯化鈉的含量;再在同一離子強(qiáng)度條件下,改變pH值,通過計(jì)算EV71病毒的效價(jià)和滴度,選擇最佳pH值。最后通過正交法去驗(yàn)證了不同離子強(qiáng)度和pH值組合,從而篩選出了最佳層析參數(shù)。本實(shí)驗(yàn)可以看出離子強(qiáng)度和pH值均能不同程度地影響EV71病毒的制備。在實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi),平衡緩沖液中含200mmol/L氯化鈉和pH為7.5為最佳組合。最后采用先凝膠過濾層析后離子交換層析相結(jié)合的方法,運(yùn)用前面篩選的最佳層析參數(shù),進(jìn)行實(shí)驗(yàn),得到了制備高純度的EV71病毒的可行性,獲得了滿意的結(jié)果。該工藝簡單、成本低、效價(jià)和比活高。
[Abstract]:Hand, foot and mouth disease (HFMD) is one of the most common diseases in children. Many kinds of enterovirus can cause HFMD. In recent years, enterovirus 71 (EV71) is the main pathogen in China. Since 1997, the prevalence of EV71 virus has been on the rise in the Asia-Pacific region, causing serious infection or death of the central nervous system. Because there is no specific drug and vaccine against EV71 virus, it is imperative to develop a vaccine that can effectively control the epidemic of EV71 virus. The purpose of this study was to establish a purified EV71 virus technology and to provide reliable data for the preparation of EV71 virus vaccine. In this study, the crude extract of EV71 virus was used as the research material, and the purification process of gel filtration chromatography and ion exchange chromatography was established, which provided the best chromatographic parameters for improving the purity of EV71 virus. Firstly, the parameters of Sepharose 4 Fast Flow gel filtration chromatography were screened. Different elution flow rate, sample amount, pH value of different buffer solution and different salt concentration were used to elucidate the crude extract of EV71 virus. The results showed that the elution rate of gel filtration chromatography, sample volume, pH value of buffer solution and salt concentration could affect the isolation of EV71 virus in different degrees. In the experimental range, when the elution flow rate is 60 cm / h, the sample amount is 5 CVS, the pH of buffer solution is 7.5 and the salt concentration is 0.1mol/L, the isolation effect of EV71 virus original solution is better. Then the Q Sepharose XL anion gel was used as the chromatography medium to purify the EV71 virus. The factors affecting ion exchange chromatography include ionic strength pH, temperature and flow rate. The effects of ion strength and pH on the preparation of EV71 virus by ion exchange were studied in this paper. The concentration range of sodium chloride in equilibrium buffer of EV71 virus and the concentration of sodium chloride in elution buffer were preliminarily screened by linear gradient elution method, and then the content of sodium chloride in equilibrium buffer was changed at the same pH. The titer and titer of EV71 virus were calculated in each equilibrium buffer, and the optimum pH value was selected by selecting the best sodium chloride content in the equilibrium buffer solution, and then changing the pH value under the same ionic strength condition. By calculating the titer and titer of EV71 virus, the optimal pH value was selected. Finally, the orthogonal method was used to verify the combination of different ionic strength and pH value, and the optimum chromatographic parameters were screened out. It can be seen that both ionic strength and pH value can affect the preparation of EV71 virus to some extent. In the range of experiment, the best combination of 200mmol/L sodium chloride and pH 7.5 was equilibrium buffer solution. Finally, the method of combining gel filtration chromatography with ion exchange chromatography and the best chromatographic parameters were used to carry out experiments. The feasibility of preparing high purity EV71 virus was obtained, and satisfactory results were obtained. The process is simple, low cost, high titer and high specific activity.
【學(xué)位授予單位】：河南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R373

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 鮑勇,沐桂藩;用SP2/0細(xì)胞誘發(fā)制備抗腸道病毒70、71型小鼠免疫腹水[J];中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);1986年S1期

2 張麗娟;酶擴(kuò)增及核酸雜交對(duì)腸道病毒進(jìn)行分子水平檢測及鑒定[J];國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;1991年03期

3 趙雅男,姜慶五,姜仁杰,沈進(jìn)進(jìn),陳胤忠,汪華;蘇北地區(qū)2003年病毒性腦膜炎爆發(fā)病原分離株Echo30的序列分析[J];中華流行病學(xué)雜志;2005年04期

4 潘亮;;侵襲嬰幼兒的“EV71病毒”[J];科學(xué)與文化;2008年06期

5 編輯部;;似曾相識(shí)的腸道病毒[J];新知客;2008年06期

6 胡燕;侯俊;沈宏輝;白冰珂;王志杰;于曉方;貌盼勇;;1株新型腸道病毒的生物學(xué)特性鑒定[J];傳染病信息;2009年03期

7 秦賢;白莉;;醫(yī)院污水中脊髓灰質(zhì)炎等腸道病毒消長動(dòng)態(tài)的初步觀察[J];微生物學(xué)雜志;1983年Z1期

8 李質(zhì)懷;董女;李培雄;曾瓊英;粟惜蘭;鄺昆炎;黎愛蓮;劉素容;;一九八一年廣州市急性出血性結(jié)膜炎臨床分析及其病原研究 二、病毒分離與鑒定[J];眼科研究;1985年01期

9 張壽斌,廖華,黃呈輝,李婉華,譚慶瑜;深圳地區(qū)手足病腸道病毒5′端非編碼區(qū)部分基因克隆和序列分析[J];江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2002年01期

10 熊永芳;;更昔洛韋治療嬰幼兒手足口病臨床觀察[J];長江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版)醫(yī)學(xué)卷;2009年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 尤克友;李克誠;章國忠;金國信;鄭戈;夏菲;吳曉霞;胡安利;孫慶豐;;腸道病毒腦炎的季節(jié)分布及臨床特點(diǎn)[A];2011年浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)暨兒內(nèi)科疾病診治新進(jìn)展國家級(jí)學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2011年

2 汪洋杰;張玉敏;樊忠亮;李粉霞;郭月霞;白景月;靳世梟;;高脊髓灰質(zhì)炎疫苗接種率下的健康兒童腸道病毒變化研究[A];2003年內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)優(yōu)秀論文集[C];2003年

3 陳友鵬;梁旭競;;腸道病毒71型感染所致中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害及其免疫發(fā)病機(jī)制[A];第四屆中國醫(yī)師協(xié)會(huì)感染科醫(yī)師大會(huì)暨傳染病診治高峰論壇、浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)肝病、感染病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2011年

4 于湘暉;查曉;孔維;沈家驄;;HIV的超分子自組裝:Gag和Vif蛋白的結(jié)構(gòu)與功能[A];第六屆全國化學(xué)生物學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2009年

5 錢淵;;病毒感染性呼吸道疾病的病原診斷進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)管理專業(yè)委員會(huì)第六屆全國臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

6 曾津津;孫國強(qiáng);程華;彭蕓;段曉岷;;腸道病毒71型感染手足口病合并急性馳緩性麻痹的脊髓MRI特點(diǎn)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第16次全國放射學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2009年

7 黃玉華;;手足口病的護(hù)理[A];中華護(hù)理學(xué)會(huì)全國兒科護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2009年

8 何雅青;;深圳地區(qū)腸道病毒71型和柯薩奇病毒A16實(shí)驗(yàn)研究[A];新發(fā)傳染病防治學(xué)習(xí)研討會(huì)論文集[C];2008年

9 賴燕群;;手-足-口病的家庭護(hù)理[A];全國口腔科護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2007年

10 侯俊;馬洪濱;李魯平;楊靜;郭靜霞;劉愛霞;徐軍;聶為民;李伯安;毛遠(yuǎn)麗;;腸道病毒71型血清學(xué)檢測方法的建立及初步應(yīng)用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)成立30周年慶典大會(huì)資料匯編[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 本版編輯邋記者 周立民 熊潤頻 代群 黎昌政;衛(wèi)生部向阜陽派駐工作組[N];人民日報(bào)海外版;2008年

2 本版編輯邋崔靜 周婷玉 代群;腸道病毒EV71從皖傳至豫,說法不科學(xué)[N];新華每日電訊;2008年

3 白瑩;7招預(yù)防手足口病[N];北京日報(bào);2008年

4 劉劍輝;高度重視外省疫情 打好腸道病毒EV71感染疾病預(yù)防狙擊戰(zhàn)[N];菏澤日報(bào);2008年

5 鄭靈巧邋馮立中;腸道病毒EV71感染并非新發(fā)疾病[N];健康報(bào);2008年

6 本報(bào)記者 鐘可芬;腸道病毒EV71感染事件——或帶動(dòng)新疫苗研發(fā)熱[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2008年

7 周立民;阜陽789名兒童感染腸道病毒,死亡19人[N];新華每日電訊;2008年

8 本版編輯邋唐夏 孟剛;衛(wèi)生部發(fā)布手足口病預(yù)防控制指南[N];中國消費(fèi)者報(bào);2008年

9 朱本浩;小兒腸道病毒疾病知多少[N];科技日報(bào);2005年

10 成都市第八人民醫(yī)院副主任醫(yī)師 寧蔚夏;手足口病及其預(yù)防[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 陳慧誠;腸道病毒71型滅活疫苗（人二倍體細(xì)胞）免疫后攻毒及未免疫攻毒恒河猴嬰猴丘腦組織的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

2 潘文勝;新型病原體的探索研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;1999年

3 朱勇U，

本文編號(hào)：1888518