本文選題：肺泡Ⅱ型上皮細胞 + 肺成纖維細胞　； 參考：《昆明醫(yī)學院》2011年碩士論文

【摘要】：[目的]通過構建礦粉誘導永生化大鼠肺泡Ⅱ型上皮轉化過程中與大鼠肺成纖維細胞相互作用的細胞共培養(yǎng)模型,探討肺成纖維細胞作為腫瘤基質成纖維細胞在肺泡Ⅱ型上皮細胞轉化中的作用。 [方法] (1)選用200μg/ml個舊錫礦礦粉,分別對永生化大鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞(RLE-6TN)及永生化大鼠肺成纖維細胞(RFL-6)染毒,每次染毒72h,隔代染毒直至第20代,自第21代起分組共培養(yǎng)至第40代。(2)倒置顯微鏡觀察活細胞形態(tài)。(3)電鏡觀察肺泡Ⅱ型上皮細胞染毒前后超微結構改變。(4)流式細胞儀分析細胞周期變化。(5)刀豆凝集素實驗。(6)錨著獨立性生長實驗檢測上皮細胞惡性轉化。(7)免疫細胞化學檢測肺泡Ⅱ型上皮細胞高分子角蛋白改變、SP-B改變,成纖維細胞活化標志α-SMA、以及上皮細胞惡性轉化標志FHIT和Ki-67。(8)免疫印跡檢測肺泡Ⅱ型上皮細SP-C改變。 [結果] (1)經(jīng)過個舊錫礦粉礦粉20代隔代染毒后,肺泡Ⅱ型上皮細胞細胞形態(tài)發(fā)生變化,超微結構改變,板層小體消失；SP-B、SP-C表達下降,但各項惡性轉化指標均為陰性；成纖細胞活化標志α-SMA陽性,說明其已被活化。(2)經(jīng)過20代共培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)染毒肺泡Ⅱ型上皮細胞細胞形態(tài)進一步改變,近似于惡性細胞；刀豆凝集素實驗、錨著獨立性生長實驗均為陽性；FHIT表達逐步下降而Ki-67表達趨于增強,其中與染毒成纖維細胞共培養(yǎng)組表現(xiàn)更為顯著,差異具有統(tǒng)計學意義。(3)未染毒肺泡Ⅱ型上皮細胞與肺成纖維細胞共培養(yǎng)后,未見顯著差異。(4)活化后的肺成纖維細胞經(jīng)與染毒肺泡Ⅱ型上皮細胞共培養(yǎng)其α-SMA表達較對照組增強,差異具有統(tǒng)計學意義。 [結論] (1)單純以200ug/ml礦粉作用20代,不足以使RLE-6TN細胞發(fā)生惡性轉化,而與礦粉作用的成纖維細胞共培養(yǎng)能促使上皮細胞發(fā)生惡性轉化。(2)在礦粉誘導RLE-6TN上皮細胞惡性轉化的過程中存在FHIT蛋白的丟失,并伴隨Ki-67的表達增高,且這一現(xiàn)象能被成纖維細胞所促進。(3)礦粉誘導可導致RLE-6TN上皮細胞的增殖活性增強、Ki-67高表達,與成纖維細胞共培養(yǎng)后,增殖活性的升高尤為明顯。(4)200ug/ml礦粉能誘導成纖維細胞RFL-6活化,繼而表達α-SMA,其活化能被經(jīng)礦粉作用的上皮細胞所促進。
[Abstract]:Objective : To investigate the role of lung fibroblasts as tumor stromal fibroblasts in the transformation of alveolar type II epithelial cells by constructing a cell co - culture model of the interaction between lung fibroblasts in rat alveolar type II epithelial cells induced by mineral powder .

The changes of cell cycle of alveolar type 鈪，

本文編號：1887695