本文選題：鐵過載 + 活性氧物質(zhì)��； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的：體外分離并培養(yǎng)單個核細(xì)胞(MNC),建立鐵過載造血細(xì)胞模型,探討鐵過載對造血細(xì)胞內(nèi)活性氧物質(zhì)(ROS)水平的影響以及ROS升高對造血干祖細(xì)胞造血功能的影響及作用機(jī)制。 方法： 1.體外分離培養(yǎng)骨髓及臍血來源的MNC,通過在培養(yǎng)液中添加枸櫞酸鐵銨(FAC),誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞鐵過載,從而建立鐵過載造血細(xì)胞模型。并通過檢測細(xì)胞內(nèi)可變鐵池(LIP)水平驗證這一模型的建立。 2.分別采用流式細(xì)胞術(shù)檢測鐵過載造血細(xì)胞的ROS水平、凋亡水平、各系造血細(xì)胞計數(shù),采用甲基纖維素半固體培養(yǎng)法檢測造血集落形成,采用western blot方法檢測ROS相關(guān)信號因子p38MAPK/p-p38MAPK和AKT表達(dá)的水平。 3.分別用去鐵胺(DFO)祛鐵或抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(NAC)、谷胱甘肽(GSH)清除過多的ROS后,檢測上述指標(biāo)的變化。 結(jié)果： 1.在體外培養(yǎng)骨髓來源的MNC過程中加入不同濃度(50、200、400μmol/L)FAC培養(yǎng)不同時間(2、4、8、12、24、36、48h),發(fā)現(xiàn)骨髓造血細(xì)胞內(nèi)LIP水平升高,且具有時間和濃度依賴性,在含400μmol/L FAC的培養(yǎng)液中培養(yǎng)24h時LIP水平達(dá)到最高。并且在400μmol/L FAC濃度下,培養(yǎng)骨髓造血細(xì)胞24h后骨髓造血細(xì)胞內(nèi)總的ROS、髓系細(xì)胞和紅系細(xì)胞內(nèi)ROS水平顯著升高,分別為對照組的1.77、1.75和2.12倍。分別用DFO和NAC處理后發(fā)現(xiàn),細(xì)胞內(nèi)ROS水平明顯降低(p0.05)。 2.在體外培養(yǎng)臍血來源的MNC過程中加入不同濃度FAC (50、100、200、400μmol/L)培養(yǎng)不同時間(6、12、24h),發(fā)現(xiàn)ROS水平隨著FAC的濃度的增加和培養(yǎng)時間的延長而變化,且在200μmol/L FAC的培養(yǎng)液中培養(yǎng)24h時ROS水平達(dá)到最高。用抗氧化劑NAC和GSH聯(lián)合FAC處理細(xì)胞發(fā)現(xiàn),抗氧化劑處理組細(xì)胞內(nèi)總的ROS以及髓系細(xì)胞和紅系細(xì)胞內(nèi)的ROS明顯低于FAC組(p值均小于0.05)。此外,在200μmol/L FAC的濃度下,培養(yǎng)臍血MNC24h后細(xì)胞內(nèi)總的LIP、髓系細(xì)胞和紅系細(xì)胞內(nèi)LIP水平顯著高于對照組(p0.05),但抗氧化劑NAC和GSH對鐵過載細(xì)胞內(nèi)LIP均無明顯影響。 3.對ROS相關(guān)信號因子的檢測發(fā)現(xiàn)與對照組相比,FAC組p38MAPK/p-p38MAPK、AKT的表達(dá)明顯增強(qiáng),用DFO和NAC處理后其表達(dá)均明顯減弱。 4.對骨髓來源造血干祖細(xì)胞功能的檢測發(fā)現(xiàn)FAC組細(xì)胞凋亡比例[(24.80±2.99)%]較對照組[(8.90±0.96)%]顯著升高(p0.05)；造血集落形成單位(CFU-E、CFU-GM、BFU-E和CFU-mix)計數(shù)明顯低于對照組(p值均小于0.05)；CD34+細(xì)胞比例[(0.39±0.07)%]較對照組[(0.91±0.12)%]也顯著降低(p0.05)。對臍血造血干祖細(xì)胞造血功能的檢測發(fā)現(xiàn)：FAC組細(xì)胞凋亡比例[(20.90±3.45)%]明顯高于對照組[(9.20±1.29)%](p0.05)；造血集落形成單位(CFU-E、BFU-E、CFU-GM、CFU-mix)計數(shù)明顯低于對照組(其中CFU-E、 BFU-E、CFU-GM差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)；CD34-、CD33+、GlyA+細(xì)胞比例及細(xì)胞計數(shù)均顯著低于對照組(p值均小于0.05)；以上這些損傷均可通過DFO和NAC處理而部分恢復(fù)。 結(jié)論： 細(xì)胞外鐵可以進(jìn)入造血干祖細(xì)胞內(nèi),造成細(xì)胞內(nèi)LIP水平升高,誘導(dǎo)細(xì)胞鐵過載。鐵過載通過誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)ROS生成增加影響造血干祖細(xì)胞造血功能(如造血干祖細(xì)胞集落形成、細(xì)胞凋亡和造血干祖細(xì)胞計數(shù)),這與ROS相關(guān)的信號分子p38MAPK/p-p38MAPK和AKT介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)通路改變有關(guān),且這些損傷均可以通過祛鐵和抗氧化處理減輕。因此,鐵過載通過誘導(dǎo)造血干祖細(xì)胞內(nèi)ROS水平升高進(jìn)而影響造血細(xì)胞凋亡,增殖分化等,清除細(xì)胞內(nèi)多余的鐵和ROS均有利于維持造血干祖細(xì)胞的功能。
[Abstract]:Objective : To study the effect of iron overload on the level of active oxygen species ( ROS ) in hematopoietic cells and the effect of ROS on the hematopoietic function of hematopoietic progenitor cells .

Method :

1 . In vitro isolation and culture of MNC from bone marrow and cord blood source , the iron overload of hematopoietic stem progenitor cells was induced by adding ferric citrate ( FAC ) to the culture solution , thus establishing an iron overload hematopoietic cell model .

2 . Flow cytometry was used to detect the level of ROS , the level of apoptosis , the count of hematopoietic cells in each system , and the formation of hematopoietic colony was detected by the semi - solid culture method of methyl cellulose , and the level of ROS - related signal factor p38MAPK / p - p38MAPK was detected by western blot .

3 . After removing excessive ROS from iron or antioxidant N - acetyl cysteine ( NAC ) and glutathione ( GSH ) respectively , the changes of these indexes were detected .

Results :

1 . Different concentrations ( 50 , 200 , 400 渭mol / L ) FAC were added to culture bone marrow - derived MNC for different time ( 2 , 4 , 8 , 12 , 24 , 36 , 48 h ) .

2 . Different concentrations of FAC ( 50 , 100 , 200 , 400 渭mol / L ) were added to culture cord blood in vitro for different time ( 6 , 12 , 24 h ) . The ROS level was highest when the concentration of FAC increased and the culture time was prolonged .

3 . Compared with the control group , the expression of p38MAPK / p - p38MAPK was significantly increased in FAC group compared with the control group , and the expression of p38MAPK / p - p38MAPK was significantly decreased after treatment with DFO and NAC .

4 . Detection of hematopoietic stem progenitor cells from bone marrow showed that the percentage of apoptosis in FAC group was significantly higher than that in control group ( 24.80 鹵 2.99 ) % , which was significantly higher than that in control group ( 8.90 鹵 0.96 ) % ( p < 0.05 ) .
CFU - E , CFU - GM , BFU - E and CFU - mix were significantly lower in CFU - E , CFU - GM , BFU - E and CFU - mix than in the control group ( p < 0.05 ) .
The percentage of CD34 + cells ( 0.39 鹵 0.07 ) % was significantly lower than that in control group ( 0.91 鹵 0.12 ) % ( p < 0.05 ) .
CFU - E , BFU - E , CFU - GM , CFU - mix were significantly lower in CFU - E , BFU - E and CFU - GM ( p < 0.05 ) .
The percentage of CD34 - , CD33 + , GlyA + cells and cell count were significantly lower than those in control group ( p < 0.05 ) .
All of these lesions can be partially recovered by treatment with DFO and NAC .

Conclusion :

Iron overload can increase the level of ROS in hematopoietic stem cells ( such as hematopoietic stem progenitor cell colony formation , apoptosis and hematopoietic stem progenitor cell count ) .

【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R329.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 黃聰武,白嵐;鐵過載和肝臟疾病[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2002年04期

2 徐莉,高飛;活性氧與細(xì)胞增殖[J];國外醫(yī)學(xué).腫瘤學(xué)分冊;2002年04期

3 張欣欣,韓東一,丁大連,戴樸,楊偉炎,姜泗長,Richard J.Salvi;Cu/ZnSOD基因敲除小鼠耳蝸易于出現(xiàn)mtDNA缺失突變—ROS對組織損傷的特異性研究(英文)[J];Chinese Medical Journal;2002年02期

4 張燕;李雪犁;盧乃浩;高中洪;;蛋白質(zhì)酪氨酸硝化與鐵過載促進(jìn)糖尿病的關(guān)系[J];生物物理學(xué)報;2009年S1期

5 吳天明;羅漣;;酒精性脂肪肝鐵過載的檢測及意義[J];浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志;2010年08期

6 董培智,王秋娟;血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡與動脈粥樣硬化[J];山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2002年05期

7 劉樂江;唐圣松;;ROS介導(dǎo)JNK信號通路的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年07期

8 顧伊麗;邵宗鴻;;鐵負(fù)荷過載研究進(jìn)展及治療[J];中國實用內(nèi)科雜志;2010年12期

9 任凌燕;廖輝;;輸血性鐵過載[J];臨床血液學(xué)雜志;2011年06期

10 黃行許,陳練波,馬曉冬,喬東訪,鮑永耀,樸英杰*;ROS對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞凋亡的影響[J];免疫學(xué)雜志;2000年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 謝芳;趙明峰;李玉明;朱海波;盧文藝;鄧琦;;鐵過載誘導(dǎo)ROS生成對骨髓造血功能的影響[A];第13屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

2 賴永榕;劉寧;劉容容;楊高輝;彭鵬;;廣西重型β-地中海貧血患者臟器鐵過載的研究[A];第13屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

3 張燕;李雪犁;盧乃浩;高中洪;;蛋白質(zhì)酪氨酸硝化與鐵過載促進(jìn)糖尿病的關(guān)系[A];第十一次中國生物物理學(xué)術(shù)大會暨第九屆全國會員代表大會摘要集[C];2009年

4 馮玉爽;徐又佳;;高齡女性骨質(zhì)疏松性骨折血清鐵過載指標(biāo)臨床意義[A];中華醫(yī)學(xué)會第六次全國骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會議暨中華醫(yī)學(xué)會骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病分會成立十周年論文匯編[C];2011年

5 王昊;徐立紅;;關(guān)鍵被攻擊分子PP2A與ROS[A];中國活性氧生物學(xué)效應(yīng)學(xué)術(shù)會議論文集（第一冊）[C];2011年

6 ;LJK-1 SPECIFICALLY INDUCES CANCER CELL APOPTOSIS BY GENERATING ROS AND CAUSING LONG-TERM TYROSINE PHOSPHORYLATION IMBALANCE[A];2011醫(yī)學(xué)科學(xué)前沿論壇第十二屆全國腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

7 胡粟;胡春洪;張京剛;王芳芳;張敏鴿;;磁共振-R2~*值無創(chuàng)評估鐵過載肝臟鐵含量的實驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十八次全國放射學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

8 賴永榕;李春付;黃紹良;李琪;沈志祥;劉容容;;地拉羅司治療中國重型地貧鐵過載—EPIC多中心臨床試驗療效分析[A];第13屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

9 劉濤;李向臣;浦亞斌;姚雅馨;關(guān)偉軍;馬月輝;;活性氧(ROS)對牛卵母細(xì)胞體外成熟凋亡的影響[A];第十二次全國畜禽遺傳標(biāo)記研討會論文集[C];2010年

10 劉仲榮;楊慧蘭;;低劑量長波紫外線誘導(dǎo)人皮膚成纖維細(xì)胞適應(yīng)性反應(yīng)中ROS的變化觀察[A];2011全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 辛聞;安聯(lián)收購俄羅斯第三大保險公司ROSNO[N];中國保險報;2001年

2 本報記者 白毅;對輸血依賴患者勿忘“祛鐵”治療[N];中國醫(yī)藥報;2010年

3 張燕南 周力;安聯(lián)進(jìn)軍俄羅斯保險市場[N];中華工商時報;2001年

4 本報記者 慕欣;輸血后,祛鐵治療不可或缺[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2010年

5 老木;安聯(lián)以收購并購擴(kuò)大實力[N];金融時報;2001年

6 王雅慧;博達(dá)八年鑄劍[N];中國計算機(jī)報;2002年

7 ;世界冬季體育運(yùn)動器材銷售繼續(xù)增長[N];中國信息報;2001年

8 ;2008年度“中國高等學(xué)校十大科技進(jìn)展”揭曉[N];中國教育報;2008年

9 吳平;紙漿價格今秋趨穩(wěn)[N];國際經(jīng)貿(mào)消息;2001年

10 記者 李鵬;中國申辦貨代奧運(yùn)會勝算大[N];國際商報;2002年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 陳勇;AKT活化的腫瘤細(xì)胞中HIF-1清除ROS的機(jī)制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2011年

2 柏樺;ROS調(diào)控正常肝細(xì)胞增殖—靜息轉(zhuǎn)變的信號作用及機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2011年

3 王欣;ROS對胰島素分泌、利用障礙及其關(guān)鍵分子的調(diào)控與干預(yù)機(jī)制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2012年

4 陳葉珊;eNOS和ROS介導(dǎo)的辛伐他汀對腫瘤血管正常化作用的初步研究[D];華中科技大學(xué);2012年

5 秦勇;細(xì)胞內(nèi)ROS水平改變對細(xì)胞活性及相關(guān)信號傳導(dǎo)途徑的影響[D];浙江大學(xué);2012年

6 鄒菁;維持體外擴(kuò)增臍帶血干細(xì)胞干性：下調(diào)異常升高的ROS和p38MAPKα信號[D];華中科技大學(xué);2011年

7 李凡;小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)鉀離子通道Kv1.2及其對細(xì)胞因子和活性氧生成的調(diào)控作用[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2008年

8 趙越;鐵過載對生物節(jié)律和血液系統(tǒng)干擾機(jī)制的研究[D];南京理工大學(xué);2012年

9 凌云揚(yáng);芯片毛細(xì)管電泳分析生物樣品的應(yīng)用研究[D];浙江大學(xué);2005年

10 林納;HBV X基因及其產(chǎn)物對成人肝細(xì)胞HL-7702線粒體結(jié)構(gòu)和功能的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 謝芳;鐵過載誘導(dǎo)ROS生成對造血干祖細(xì)胞功能的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

2 劉寧;廣西重型β-地中海貧血患者臟器鐵過載的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年

3 唐紅;20-HETE誘導(dǎo)ROS生成加重心肌缺血再灌注損傷[D];東北師范大學(xué);2012年

4 黃以;鐵過載心、腎損傷及黃芩的干預(yù)作用[D];華中科技大學(xué);2010年

5 楊翌;ROS對PC-3荷瘤小鼠腫瘤生長的影響及機(jī)制[D];南華大學(xué);2011年

6 魏揠琴;七氟醚后處理對成人瓣膜置換術(shù)中血清肌鈣蛋白T濃度和心肌細(xì)胞內(nèi)ROS水平的影響[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2010年

7 李祝;不同體積分?jǐn)?shù)氧對早產(chǎn)鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞生長狀態(tài)的影響及ROS誘導(dǎo)WNT信號通路表達(dá)的變化[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

8 高曉平;阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征患者白細(xì)胞粘附分子CD15、CD11c的表達(dá)和ROS產(chǎn)生的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

9 崔澤文;DATS通過ROS活化MLK3-JNK誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡[D];南華大學(xué);2010年

10 馬洪巖;低氧對大鼠大腦皮層細(xì)胞凋亡及ROS、NO水平的影響[D];上海體育學(xué)院;2011年

，

本文編號：1878889