本文選題：樹突狀細(xì)胞 + OK-432��； 參考：《福建醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的本課題旨在比較體外單獨或聯(lián)合應(yīng)用TLR配體沙培林（OK-432）和聚肌胞對樹突狀細(xì)胞（dendritic cells,DCs）成熟狀態(tài)的影響，并將DCs與小鼠前胃癌細(xì)胞上清液共培養(yǎng)，，檢測DCs存活率，探討OK-432聯(lián)合聚肌胞對小鼠前胃癌細(xì)胞上清液誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及機(jī)制。為臨床上獲取理想的高成熟狀態(tài)的DCs提供有效方法及科學(xué)依據(jù)。 方法采用重組小鼠粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(rmGM-CSF)聯(lián)合重組小鼠白細(xì)胞介素-4(rmIL-4)，誘導(dǎo)小鼠骨髓源性的單個核細(xì)胞分化為未成熟的DCs（immatureDCs,imDCs），分別經(jīng)OK-432、聚肌胞或OK-432聯(lián)合聚肌胞誘導(dǎo)DCs成熟，未成熟或成熟的DCs分別與不同濃度的小鼠前胃癌細(xì)胞上清液共培養(yǎng)24小時。電鏡和光鏡下觀察DCs的細(xì)胞形態(tài)變化，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面抗原CD83和CD86的表達(dá)情況，ELISA法測定DCs上清液中IL-12的分泌水平，MTT法測定DCs體外刺激同種混合淋巴細(xì)胞增殖的免疫活性；光鏡下觀察DCs損傷的形態(tài)學(xué)變化，MTT法測定DCs與不同濃度小鼠前胃癌細(xì)胞上清液共培養(yǎng)24小時后的活性，免疫組化法檢測DCs中鋅指蛋白A20（Zinc finger protein A20,A20）的表達(dá)水平。 結(jié)果 1聯(lián)合刺激組誘導(dǎo)的DCs光鏡和電鏡下最具備成熟DCs的形態(tài)學(xué)特征。 2流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示，聯(lián)合刺激組誘導(dǎo)的DCs，其表面抗原CD83和CD86表達(dá)均明顯高于單一刺激組（P＜0.01）。 3MTT法檢測結(jié)果顯示，聚肌胞組和OK-432組的DCs刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力明顯增加，與空白組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01）；而聯(lián)合刺激組DCs刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力又顯著高于單獨刺激組（聚肌胞組和OK-432組）（P0.01）。 4ELISA法檢測結(jié)果顯示，聚肌胞組（91.19±6.16pg/ml）和OK-432組（92.95±5.68pg/ml）IL-12的分泌量明顯增加，與空白組（31.49±4.91pg/ml）相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01），而聯(lián)合刺激組DCs IL-12的分泌量（175.69±15.26pg/ml）又顯著高于單獨刺激組（P0.01）。 5光鏡下可觀察到小鼠前胃癌細(xì)胞上清液損傷DCs的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。 6MTT法檢測結(jié)果顯示，聯(lián)合刺激組DCs與前胃癌細(xì)胞上清液共培養(yǎng)24小時后，其存活率顯著高于其它實驗組（P0.01）；OK-432組與聚肌胞組比較（P0.05），存活率差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 7免疫組化法檢測結(jié)果顯示，聚肌胞組、OK-432組和聯(lián)合刺激組DCs胞質(zhì)中的A20蛋白表達(dá)水平均升高與空白組相比P＜0.01，其中聯(lián)合刺激組的A20蛋白表達(dá)量最高，與聚肌胞組和OK-432組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01）。聚肌胞組DCs內(nèi)A20蛋白表達(dá)水平與OK-432組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。 結(jié)論 1OK-432聯(lián)合聚肌胞誘導(dǎo)的DCs，無論在形態(tài)學(xué)、表型還是功能學(xué)上都具有更高的成熟度。 2小鼠前胃癌細(xì)胞上清對DCs有損傷作用。 3OK-432聯(lián)合聚肌胞可以上調(diào)DCs的A20蛋白表達(dá)，后者對小鼠前胃癌細(xì)胞上清液誘導(dǎo)的DCs損傷有保護(hù)作用。
[Abstract]:Objective to compare the effects of TLR ligand OK-432) and polymyocytes on the maturation of dendritic cells (DC) in vitro, and to coculture DCs with mouse gastric cancer cells supernatant to detect the survival rate of DCs. To investigate the protective effect and mechanism of OK-432 combined with polymyocyte on dendritic cell injury induced by supernatant of mouse gastric carcinoma cells. It provides an effective method and scientific basis for obtaining ideal high mature DCs in clinic. Methods Recombinant mouse granulocyte-macrophage colony stimulating factor (rmGM-CSF) combined with recombinant mouse interleukin-4 rmIL-4 was used to induce the differentiation of murine bone marrow-derived mononuclear cells into immature DCs maturation by OK-432, polymyocyte or OK-432 combined with polymyocyte. Immature or mature DCs were co-cultured with different concentrations of mouse pregastric cancer cell supernatant for 24 hours. The morphological changes of DCs were observed under electron microscope and light microscope. The expression of cell surface antigen CD83 and CD86 was detected by flow cytometry. The level of IL-12 secretion in the supernatant of DCs was determined by Elisa. The immunological activity of DCs stimulated the proliferation of allogeneic mixed lymphocytes in vitro was determined by MTT assay. The morphological changes of DCs damage were observed under light microscope. The activity of DCs co-cultured with the supernatant of mouse gastric precancerous cells at different concentrations for 24 hours was determined. The expression of A20(Zinc finger protein A20A20 in DCs was detected by immunohistochemistry. Result 1 the morphologic characteristics of mature DCs were the most obvious under light microscope and electron microscope induced by combined stimulation group. 2 the results of flow cytometry showed that the expression of surface antigen CD83 and CD86 in the combined stimulation group was significantly higher than that in the single stimulation group (P < 0.01). The results of 3MTT assay showed that the ability of DCs to stimulate lymphocyte proliferation was significantly increased in polymyocyte group and OK-432 group, compared with the blank group. The difference was statistically significant (P 0.01), and the ability of DCs to stimulate lymphocyte proliferation was significantly higher in the combined stimulation group than in the single stimulation group (P 0.01). The results of 4ELISA assay showed that the secretion of DCs IL-12 in the polymyocyte group (91.19 鹵6.16pg / ml) and OK-432 group (92.95 鹵5.68pg/ml)IL-12) was significantly higher than that in the blank group (31.49 鹵4.91pg / ml), while the secretion of DCs IL-12 in the combined stimulation group was 175.69 鹵15.26pg / ml higher than that in the control group. 5 the morphological changes of DCs damage in the supernatant of mouse gastric precancerous cells were observed under light microscope. The results of 6MTT assay showed that the survival rate of DCs combined with P0.01OK-432 group was significantly higher than that of P0.01OK-432 group and P0.05 group after co-culture with the supernatant of pregastric cancer cells for 24 hours. There was no significant difference in survival rate between the two groups. 7 the results of immunohistochemistry showed that the expression of A20 protein in the cytoplasm of DCs in the OK-432 group and the combined stimulation group was higher than that in the blank group (P < 0.01), and the expression of A20 protein in the combined stimulation group was the highest, compared with that in the polymyocytic group and the OK-432 group. The difference was statistically significant (P 0.01). There was no significant difference in A20 protein expression in DCs between polymyocyte group and OK-432 group (P 0.05). Conclusion 1OK-432 combined with polymyocyte-induced DCS has higher maturity in morphology, phenotype and function. 2 the supernatant of mouse gastric precancerous cell had the effect of damaging DCs. 3OK-432 combined with polymyocytes could up-regulate the expression of A20 protein of DCs, which had a protective effect on the DCs damage induced by the supernatant of mouse gastric cancer cells.
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R392

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本文編號：1869917