本文選題：沙門氏菌 + 多位點(diǎn)序列分析��； 參考：《吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：沙門氏菌(Salmonella)是一種重要的人畜共患型食源性致病菌,在全世界范圍內(nèi)廣泛流行,嚴(yán)重威脅人類健康,并給畜牧業(yè)及食品加工業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。沙門氏菌在食品加工業(yè)的儀器設(shè)備中常以生物被膜的形式存在,給食品生產(chǎn)過(guò)程中的消毒滅菌工作帶來(lái)很大難度。因此,對(duì)沙門氏菌的流行病學(xué)進(jìn)行調(diào)查,以及研究野生分離株沙門氏菌的生物被膜形成能力具有重要意義。 本研究通過(guò)在豬肉食品生產(chǎn)加工的不同階段采集樣品,先采用我國(guó)沙門氏菌檢測(cè)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法中規(guī)定的選擇性增菌液和選擇性平板分離得到疑似沙門氏菌后,再采用PCR方法鑒定疑似菌株。共采集得到15株沙門氏菌。通過(guò)研究野生分離菌株的來(lái)源情況,得出結(jié)論認(rèn)為豬肉食品中沙門氏菌的污染主要來(lái)自于后期屠宰和加工階段,養(yǎng)殖場(chǎng)中生豬的帶菌率很低。將分離得到的沙門氏菌采用多位點(diǎn)序列分析(MLST)方法進(jìn)行分子分型,然后與血清學(xué)分型結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。發(fā)現(xiàn)MLST分型方法對(duì)沙門氏菌的分型能力要優(yōu)于血清學(xué)分型方法。 本研究通過(guò)結(jié)晶紫染色法結(jié)合細(xì)胞微孔培養(yǎng)板,定量研究了野生分離菌株在模式培養(yǎng)基胰蛋白胨大豆肉湯(TSB)中的生物被膜的形成能力,并且研究了其中兩株具有強(qiáng)生物被膜形成能力的菌株在不同培養(yǎng)條件下生物被膜形成能力的變化。發(fā)現(xiàn)高滲溶液對(duì)沙門氏菌生物被膜的形成有抑制作用,并且氯化鈉(NaCl)溶液的抑制作用強(qiáng)于蔗糖溶液。 本研究通過(guò)將沙門氏菌黏附素蛋白基因misL包含其啟動(dòng)子及轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列與pUC18質(zhì)粒構(gòu)建重組質(zhì)粒,并轉(zhuǎn)入模式菌株大腸桿菌MG1655和AAEC189中,分析該基因?qū)?xì)菌形成生物被膜能力的影響,發(fā)現(xiàn)該基因?qū)?xì)菌的生物被膜形成能力具有促進(jìn)作用。 本研究構(gòu)建了pET-28a-MisL重組表達(dá)載體,轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21中,利用原核表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)出沙門氏菌黏附素蛋白MisL。為深入研究該蛋白的功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Salmonellais is an important zoonotic foodborne pathogen, which is widespread in the world. It is a serious threat to human health and brings great economic losses to animal husbandry and food processing industry. Salmonella often exists in the form of biofilm in the equipment of food processing industry, which makes it difficult to disinfect and sterilize food. Therefore, it is of great significance to investigate the epidemiology of Salmonella and to study the biofilm forming ability of wild isolates of Salmonella. In this study, samples were collected at different stages of pork food production and processing, and then the suspected salmonella was isolated by selective bacteriostasis and selective plate, which was stipulated in the national standard method for the detection of salmonella in China. The suspected strain was identified by PCR method. A total of 15 Salmonella strains were collected. By studying the source of wild isolated strains, it is concluded that the contamination of salmonella in pork food mainly comes from the later stage of slaughter and processing, and the rate of carrying bacteria in live pigs in breeding farm is very low. The isolated Salmonella was classified by multilocus sequence analysis (MLST) and compared with serological typing. It was found that the MLST typing method was superior to the serological typing method in the typing of Salmonella. In this study, the biofilm forming ability of wild isolated strains in the model medium of tryptone soybean broth (TSBs) was quantitatively studied by means of crystal violet staining and cell micropore culture plate. The changes of biofilm formation ability of two strains with strong biofilm formation ability under different culture conditions were studied. It was found that hypertonic solution inhibited the formation of salmonella biofilm, and the inhibitory effect of sodium chloride solution was stronger than that of sucrose solution. In this study, recombinant plasmids were constructed from Salmonella adhesion protein gene misL containing its promoter and transcriptional regulatory sequence and pUC18 plasmid. The recombinant plasmids were transformed into Escherichia coli MG1655 and AAEC189. By analyzing the effect of the gene on the biofilm formation ability of bacteria, it was found that the gene could promote the biofilm formation ability of bacteria. In this study, the recombinant pET-28a-MisL expression vector was constructed and transferred into Escherichia coli BL21, and the Salmonella adhesion protein Misl was successfully expressed by prokaryotic expression system. It lays a foundation for further study of the function of the protein.
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R378

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本文編號(hào)：1865772