本文選題：胰島素樣生長因子-1 + 缺氧缺血性腦損傷�。� 參考：《鄭州大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的 應(yīng)用新生7日齡SD大鼠建造缺氧缺血性腦損傷(HIBD)動物模型,經(jīng)鼻腔遞送胰島素樣生長因子-1(IGF-1),免疫組化法檢測內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖、遷移、分化情況,探索IGF-1對神經(jīng)的營養(yǎng)保護(hù)作用；RT-PCR法檢測HIBD后各組大鼠FoxglmRNA表達(dá)變化情況,探索IGF-1對其表達(dá)的影響。。 材料與方法 取7日齡SD新生大鼠,單純隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型對照組、IGF-1干預(yù)組。每組按處死時間點(diǎn)不同,又分為HIBD后1d、3d、5d、7d、14d等5個亞組,共15個亞組。采用Rice法制作新生大鼠HIBD動物模型。模型對照組于HI后1h鼻腔遞送生理鹽水0.1ml；IGF-1干預(yù)組于HI后1h鼻腔遞送IGF-12.5μg；假手術(shù)組僅分離頸總動脈,不結(jié)扎不缺氧,不鼻腔灌注。選用5’-嗅尿嘧啶(Brdu)標(biāo)記新增殖細(xì)胞,巢蛋白(Nestin)標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞,神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)標(biāo)記成熟神經(jīng)元,膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)標(biāo)記星形膠質(zhì)細(xì)胞,Brdu-Nestin標(biāo)記新增殖的神經(jīng)干細(xì)胞,Brdu-NSE標(biāo)記增殖細(xì)胞分化的神經(jīng)元,Brdu-GFAP標(biāo)記增殖細(xì)胞分化的星形膠質(zhì)細(xì)胞。分別于術(shù)后1、3、5、7、14d處死大鼠。用于免疫組化實驗的大鼠,在處死前一天被腹腔注射Brdu(50mg/kg/次,共3次),最后一次注射4小時后斷頭取腦,固定、切片,HE染色觀察腦損傷組織形態(tài)結(jié)構(gòu)變化；單、雙標(biāo)免疫組化染色法檢測側(cè)腦室室管膜下區(qū)(SVZ)、海馬區(qū)以及皮層區(qū)Brdu陽性細(xì)胞、Brdu-Nestin、Brdu-NSE、Brdu-GFAP雙陽性細(xì)胞數(shù)；用于RT-PCR實驗的大鼠,常規(guī)斷頭取腦,半定量RT-PCR法檢測各組大鼠腦組織FoxglmRNA的表達(dá)。 結(jié)果 1模型鑒定 大鼠制模前行為能力均正常,制模后翻身不能,夾尾不叫,夾尾左旋,常規(guī)HE染色顯示結(jié)扎側(cè)出現(xiàn)明顯的病理變化,主要為神經(jīng)元壞死,出現(xiàn)“紅色神經(jīng)元”。 2免疫組化結(jié)果 ①Brdu陽性細(xì)胞、Brdu-Nestin雙陽性細(xì)胞：模型對照組術(shù)后第1天開始增多,3天達(dá)高峰,7天減少,14天明顯減少,1d、3d、5d、7d、14d的Brdu陽性細(xì)胞數(shù)分別為：321.00±23.02、368.00±26.07、384.00±27.93、342.00±20.25、157.00±20.25; Brdu-Nestin雙陽性細(xì)胞分別為：10.00±2.28、24.00±5.66、21.00±3.41、15.00±3.41、8.00±2.83；IGF-1干預(yù)組術(shù)后第1天增加明顯,3天顯著增多,5天達(dá)高峰期,7天稍減少,’14天明顯減少,Brdu陽性細(xì)胞數(shù)值分別為：357.00±11.40、438.00±20.25、476.00±27.39、385.00±11.83、204.00±22.80；Brdu-Nestin雙陽性細(xì)胞分別為：18.00±3.41、43.00±7.07、85.00±7.07、56.00±7.07、37.00±3.41；假手術(shù)組無明顯增殖現(xiàn)象,隨著時間的延長漸漸恢復(fù)到靜息狀態(tài),Brdu陽性細(xì)胞數(shù)分別為240.00±21.21、200.00±7.07、120.00±7.07、60.00±10.00；Brdu-Nestin幾無表達(dá)。在同一時間點(diǎn)各組間比較,IGF-1干預(yù)組高于模型對照組高于假手術(shù)組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；②Brdu-NSE、Brdu-GFAP雙標(biāo)陽性細(xì)胞：模型對照組術(shù)后第7天開始出現(xiàn),但胞體小,突起細(xì)、短,第14天細(xì)胞數(shù)增多,且胞體增大,突起增粗、增長,Brdu-NSE每個時間點(diǎn)數(shù)值為：15.00±2.27、25.00±3.96; Brdu-GFAP數(shù)值分別為：35.00±3.96、45.00±4.72；IGF-1干預(yù)組術(shù)后第5天就有少量陽性細(xì)胞,第7天在腦部有明顯增加,14天增多達(dá)高峰,每個時間點(diǎn)數(shù)值分別為：Brdu-NSE:40.00±10.06、50.00±6.39; BrdU-GFAP:20.00±3.42、26.00±6.28。假手術(shù)組無表達(dá)。同一時間點(diǎn)兩組比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義儼0.05)。 3半定量RT-PCR結(jié)果 假手術(shù)組Foxg1mRNA的表達(dá)基本穩(wěn)定,無明顯的變化,第1、3、5、7、14d的結(jié)果分別為0.77±0.046、0.65±0.134、0.76±0.041、0.68±0.047、0.72±0.024；模型對照組：前3天Foxg1mRNA的表達(dá)減少,3天后開始增加,7天時接近假手術(shù)組,結(jié)果分別為0.60±0.037、0.53±0.056、0.62±0.054、0.74±0.053、0.78±0.043；IGF-1干預(yù)組：Foxg1mRNA的表達(dá)趨勢與模型對照組相同,但表達(dá)量高于同時間的對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),結(jié)果分別為0.65±0.054、0.64±0.059、0.73±0.051、0.80±0.051、0.84±0.051。 結(jié)論 鼻腔遞送IGF-1能促進(jìn)HIBD后內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、分化；IGF-1也能促進(jìn)Foxg1基因的表達(dá),使其更好地發(fā)揮神經(jīng)調(diào)控作用。
[Abstract]:Purpose

To establish an animal model of hypoxic - ischemic brain damage ( HIBD ) in neonatal 7 - day - old SD rats . Insulin - like growth factor - 1 ( IGF - 1 ) was delivered through nasal cavity . Immunohistochemical method was used to detect the proliferation , migration and differentiation of endogenous neural stem cells .
The effects of IGF - 1 on the expression of FoxglmRNA in rats after HIBD were detected by RT - PCR .

Materials and Methods

SD neonatal rats were randomly divided into sham operation group , model control group and IGF - 1 intervention group . Each group was divided into 5 subgroups of 1d , 3d , 5d , 7d , 14d after HIBD .
IGF - 1 intervention group delivered IGF - 12.5 渭g in nasal cavity after HI .
The neural stem cells were labeled with 5 ' - sniffing uracil ( Brdu ) , neural stem cells were marked by Nestin , neural stem cells were marked by Brdu - NSE . Brdu - Nestin - labelled proliferating cells were injected with Brdu - NSE ( 50mg / kg / time , totally 3 times ) .
The number of Brdu - positive cells , Brdu - Nestin , Brdu - NSE , Brdu - GFAP double positive cells in the lateral ventricle of lateral ventricle ( SVZ ) , hippocampus and cortical area were detected by immunohistochemistry staining .
The expression of FoxglmRNA was detected by RT - PCR and semi - quantitative RT - PCR .

Results

1 Model Identification

Normal HE staining showed obvious pathological changes on the ligation side , mainly neuronal necrosis , and " red neurons " appeared .

2 Immunohistochemical results

( 1 ) Brdu - positive cells , Brdu - Nestin - positive cells : the number of Brdu - positive cells increased at 1 day after operation , peaked at 3 days , decreased in 7 days , and the number of Brdu - positive cells in 1d , 3d , 5d , 7d and 14d were 321.00 鹵 23.02 , 362.00 鹵 20.25 , 157.00 鹵 20.25 ; Brdu - Nestin - positive cells were 10.00 鹵 2.28 , 24.00 鹵 5.66 , 21.00 鹵 3.41 , 15.00 鹵 3.41 , 8.00 鹵 2.83 , respectively ;
The number of Brdu positive cells was 357.00 鹵 11.40 , 4380.00 鹵 20.25 , 476.00 鹵 27.39 , 385.00 鹵 11.83 , 204.00 鹵 22.80 , respectively .
Brdu - Nestin - positive cells were 18.00 鹵 3.41 , 43.00 鹵 7.07 , 85.00 鹵 7.07 , 56.00 鹵 7.07 , 37.00 鹵 3.41 , respectively .
The number of Brdu positive cells was 240.00 鹵 21.21 , 200.00 鹵 7.07 , 120.00 鹵 7.07 , 60.00 鹵 10.00 , respectively .
There was no expression of Brdu - Nestin . In the same time , the IGF - 1 intervention group was higher than that in the sham operation group ( P0.05 ) .
( 2 ) Brdu - NSE , Brdu - GFAP double labeled positive cells : the model control group began to appear on the 7th day after operation , but the cell body was small , the protrusion was thin , short , the number of cells in the 14th day increased , and the number of cells increased , the protrusion increased , and the Brdu - NSE value was 15 . 00 鹵 2 . 27 , 25 . 00 鹵 3.96 ; Brdu - GFAP value was 35.00 鹵 3.96 , 45.00 鹵 4.72 ;
There was a small number of positive cells in the IGF - 1 intervention group on the 5th day after operation . On the 7th day , there was a marked increase in the brain . The number of each time point was : Brdu - NSE : 40.00 鹵 10.06 , 50.00 鹵 6.39 ; and no expression of the sham operation group . The difference was statistically significant ( 0.05 ) at the same time point .

3 Semi - quantitative RT - PCR Results

The expression of Foxg1mRNA in sham operation group was stable without significant changes . The results were 0.77 鹵 0.046 , 0.65 鹵 0.134 , 0.76 鹵 0.041 , 0.68 鹵 0.047 , 0.72 鹵 0.024 , respectively .
The expression of Foxg1mRNA was decreased in the first 3 days and increased after 3 days . The results were 0.60 鹵 0.037 , 0.53 鹵 0.056 , 0.62 鹵 0.054 , 0.74 鹵 0.053 , 0.78 鹵 0.043 , respectively .
The expression of Foxg1mRNA was the same as that in the control group , but the expression level was higher than that in the control group with the same time ( P0.05 ) . The results were 0.65 鹵 0.054 , 0.64 鹵 0.059 , 0.73 鹵 0.051 , 0.80 鹵 0.051 , 0.84 鹵 0.051 , respectively .

Conclusion

The nasal delivery of IGF - 1 can promote the proliferation and differentiation of endogenous neural stem cells after HIBD .
IGF - 1 can also promote the expression of Foxgl gene , and make it better play the role of neuromodulation .

【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R-332;R651.1

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本文編號：1864000