本文選題：腺相關(guān)病毒 + mi�。� 參考：《中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志》2017年25期

【摘要】：目的獲得表達(dá)micro RNA-29b-3p的重組腺相關(guān)病毒(rAAV-mi R-29b-3p),并檢測(cè)其在大鼠前額葉皮質(zhì)中的感染效果和表達(dá)水平。方法將前體mi R-29b-3p基因片段置入AAV表達(dá)質(zhì)粒中構(gòu)建重組AAV質(zhì)粒,將重組AAV質(zhì)粒、包裝質(zhì)粒和輔助質(zhì)粒通過脂質(zhì)體Lipa Fiter TM共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞包裝r AAVmi R-29b-3p。從轉(zhuǎn)染的HEK293細(xì)胞中收集并通過樹脂柱純化r AAV-mi R-29b-3p,通過實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(q RT-PCR)測(cè)定r AAV-mi R-29b-3p滴度。通過腦立體定位儀注射r AAV-mi R-29b-3p至大鼠前額葉皮質(zhì),免疫熒光顯微鏡觀察r AAV-mi R-29b-3p的感染效果,q RT-PCR檢測(cè)r AAV-mi R-29b-3p表達(dá)水平。結(jié)果成功包裝的r AAV-mi R-29b-3p經(jīng)純化后獲得了高純度的r AAV-mi R-29b-3p,q RT-PCR檢測(cè)r AAV-mi R-29b-3p的病毒滴度達(dá)到1.0×1012 vg/ml,經(jīng)感染21 d后,腦組織前額葉皮質(zhì)熒光表達(dá)明顯,mi R-29b-3p表達(dá)水平明顯提高。結(jié)論構(gòu)建的r AAV-mi R-29b-3p可使大鼠前腦皮層mi R-29b-3p高表達(dá),為進(jìn)一步研究mi R-29b-3p的生物學(xué)功能提供了有效工具。
[Abstract]:Objective to obtain recombinant adeno-associated virus (rAAV-mi R-29b-3pN) expressing micro RNA-29b-3p, and to detect its infection effect and expression level in prefrontal cortex of rats. Methods the precursor mi R-29b-3p gene fragment was inserted into the AAV expression plasmid to construct the recombinant AAV plasmid. The recombinant AAV plasmid, the packaging plasmid and the auxiliary plasmid were co-transfected into HEK293 cell package r AAVmi R-29b-3p. by liposome Lipa Fiter TM. R AAV-mi R-29b-3pwas collected from transfected HEK293 cells and purified by resin column. The titer of r AAV-mi R-29b-3p was determined by real-time quantitative polymerase chain reaction (Q RT-PCR). R AAV-mi R-29b-3p was injected into the prefrontal cortex of rats by stereotactic locator. The infection effect of r AAV-mi R-29b-3p was observed by immunofluorescence microscope and the expression of r AAV-mi R-29b-3p was detected by Q RT-PCR. Results the virus titer of r AAV-mi R-29b-3p detected by highly purified r AAV-mi R-29b-3pnq RT-PCR was 1. 0 脳 1012 vg / ml. After 21 days of infection, the fluorescence expression of R-29b-3p in prefrontal cortex of brain tissue was significantly increased. Conclusion the constructed r AAV-mi R-29b-3p can increase the expression of mi R-29b-3p in rat forebrain cortex, which provides an effective tool for further study of the biological function of mi R-29b-3p.
【作者單位】： 西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院麻醉科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No:81271478)
【分類號(hào)】：R3416

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本文編號(hào)：1857801