本文選題：Apelin + 抑郁��； 參考：《南華大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的： 本實(shí)驗(yàn)室基于大鼠強(qiáng)迫游泳與習(xí)得性無助模型，首次表明Apelin可發(fā)揮抗抑郁效應(yīng)且海馬是Apelin發(fā)揮抗抑郁效應(yīng)的關(guān)鍵腦區(qū)。本研究擬在前期工作的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步采用WKY轉(zhuǎn)基因大鼠強(qiáng)迫游泳模型、小鼠懸尾模型、大鼠慢性溫和應(yīng)激模型評(píng)估Apelin的抗抑郁效應(yīng)；同時(shí)采用行為藥理學(xué)、免疫組化等方法檢測(cè)海馬神經(jīng)發(fā)生在Apelin抗抑郁效應(yīng)中的作用。 方法： 1、基于WKY大鼠強(qiáng)迫游泳模型評(píng)估Apelin抗抑郁效應(yīng) 雄性WKY大鼠與Wistar大鼠麻醉后，行側(cè)腦室導(dǎo)管埋置術(shù)，術(shù)后恢復(fù)1周。WKY大鼠與Wistar大鼠各自分為溶媒對(duì)照組、丙咪嗪組與Apelin組。手術(shù)后1周行強(qiáng)迫游泳測(cè)試程序，測(cè)試前23.5h、2.5h與0.5h經(jīng)側(cè)腦室微注射3次溶媒、丙咪嗪(200μg/rat)或Apelin-13(2μg/rat)。Wistar組大鼠在第一次檢測(cè)完成后，間隔24小時(shí)后進(jìn)行第二次強(qiáng)迫游泳檢測(cè)，并于檢測(cè)前0.5h經(jīng)側(cè)腦室微注射1次溶媒、丙咪嗪或Apelin-13。記錄并分析大鼠在強(qiáng)迫游泳期間的累計(jì)不動(dòng)時(shí)間。 2、基于小鼠懸尾測(cè)試模型評(píng)估Apelin抗抑郁效應(yīng) 雄性昆明小鼠麻醉后，行側(cè)腦室導(dǎo)管埋置術(shù)，術(shù)后恢復(fù)1周。小鼠分為溶媒對(duì)照組、丙咪嗪組與Apelin組。手術(shù)后1周行懸尾測(cè)試程序，測(cè)試前23.5h、2.5h與0.5h經(jīng)側(cè)腦室注射3次溶媒、丙咪嗪(200μg/mouse)或Apelin-13(2μg/mouse)。在第一次檢測(cè)完成后，間隔24小時(shí)后進(jìn)行第二次懸尾測(cè)試，并于檢測(cè)前0.5h經(jīng)側(cè)腦室微注射1次溶媒、丙咪嗪或Apelin-13。記錄并分析小鼠在懸尾期間的累計(jì)不動(dòng)時(shí)間。 3、基于大鼠慢性溫和應(yīng)激模型評(píng)估Apelin抗抑郁效應(yīng) 雄性Wistar大鼠麻醉后，行側(cè)腦室導(dǎo)管埋置術(shù)，術(shù)后恢復(fù)1周。大鼠分為模型對(duì)照組、溶媒對(duì)照組、丙咪嗪組與Apelin組；除模型對(duì)照組不接受應(yīng)激外，其余各組進(jìn)行慢性溫和應(yīng)激處理5周，自第4周起經(jīng)側(cè)腦室注射溶媒、丙咪嗪(200μg/rat)或Apelin-13(2μg/rat)，每天1次，持續(xù)2周。在第0、1、2、3、4、5周周末稱量大鼠體重，并在第1、2、3、4、5周周末檢測(cè)大鼠蔗糖偏好(以蔗糖攝入量與總液體攝入量的比值表示)。 4、評(píng)估海馬神經(jīng)發(fā)生在Apelin抗抑郁效應(yīng)中的作用 1) Apelin對(duì)海馬神經(jīng)祖細(xì)胞的增殖、分化及新生細(xì)胞存活的影響 雄性Wistar大鼠麻醉后，行側(cè)腦室導(dǎo)管埋置術(shù)，術(shù)后恢復(fù)1周。經(jīng)側(cè)腦室給予大鼠溶媒或Apelin-13(2μg/rat)處理，1天1次，，持續(xù)2周。(1)為了觀察Apelin對(duì)海馬祖細(xì)胞增殖的影響，采用BrdU標(biāo)記新增生細(xì)胞，于Apelin處理1周后開始注射BrdU (50mg/kg,i.p,1次/天)直至Apelin處理結(jié)束，處理結(jié)束后24小時(shí)將大鼠處死取腦。石蠟切片后行BrdU免疫組化及定量分析。(2)為了觀察Apelin處理誘導(dǎo)的海馬新增生細(xì)胞可否向神經(jīng)元或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞分化，在Apelin處理的最后兩天進(jìn)行BrdU(75mg/kg,i.p,4次/天,間隔2小時(shí))處理。最后一次BrdU處理后28天將大鼠處死取腦。石蠟切片后行免疫熒光雙標(biāo)(BrdU/NeuN)及定量分析。(3)為了觀察Apelin對(duì)海馬新增生細(xì)胞存活的影響，在Apelin處理的前兩天進(jìn)行BrdU(75mg/kg,i.p,4次/天,間隔2小時(shí))處理；最后一次BrdU處理后28天將大鼠處死取腦。石蠟切片后行免疫熒光雙標(biāo)(BrdU/NeuN)。 2)Apelin對(duì)慢性溫和應(yīng)激抑制海馬神經(jīng)發(fā)生的影響 為了檢測(cè)Apelin處理可否逆轉(zhuǎn)慢性溫和應(yīng)激誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)發(fā)生的抑制，將雄性Wistar大鼠分為模型對(duì)照組、溶媒對(duì)照組與Apelin組；大鼠麻醉后，行側(cè)腦室導(dǎo)管埋置術(shù)，術(shù)后恢復(fù)1周。給予溶媒對(duì)照組與Apelin組大鼠慢性溫和應(yīng)激處理5周。自第3周起經(jīng)側(cè)腦室注射溶媒或Apelin(2μg/rat），每天1次，持續(xù)2周。為標(biāo)記新增生細(xì)胞，自第四周起注射BrdU(50mg/kg,i.p,1次/天)，持續(xù)1周。處理結(jié)束后24小時(shí)將大鼠處死取腦。石蠟切片后行BrdU免疫組化及定量分析。 3)抑制海馬神經(jīng)發(fā)生對(duì)Apelin抗抑郁效應(yīng)的影響 雄性Wistar大鼠麻醉后，行側(cè)腦室導(dǎo)管埋置術(shù)，術(shù)后恢復(fù)1周。大鼠分為模型對(duì)照組、溶媒對(duì)照組、AZT組、Apelin組與Apelin+AZT組；除模型對(duì)照組外，其余各組大鼠慢性溫和應(yīng)激處理5周，自第4周起經(jīng)側(cè)腦室注射溶媒或Apelin(2μg/rat），每天1次，持續(xù)2周。在每次Apelin注射前2小時(shí)側(cè)腦室微量注射AZT(1μmol/rat)，持續(xù)2周。采用BrdU標(biāo)記新增生細(xì)胞，第5周開始注射BrdU(50mg/kg,i.p,1次/天)，持續(xù)1周。在第1、2、3、4、5周周末檢測(cè)大鼠蔗糖偏好(以蔗糖攝入量與總液體攝入量的比值表示)。最后一次蔗糖偏好檢測(cè)后將大鼠處死取腦。石蠟切片后行BrdU免疫組化。 結(jié)果： 1、基于WKY大鼠強(qiáng)迫游泳模型評(píng)估Apelin抗抑郁效應(yīng) 在第一次強(qiáng)迫游泳測(cè)試期間,WKY大鼠溶媒對(duì)照組大鼠不動(dòng)時(shí)間顯著性高于Wistar大鼠溶媒對(duì)照組。WKY大鼠組間比較顯示，丙咪嗪組與Apelin組大鼠不動(dòng)時(shí)間顯著性低于溶媒組。Wistar大鼠組間比較顯示，丙咪嗪組大鼠不動(dòng)時(shí)間顯著性低于溶媒組。Apelin組大鼠不動(dòng)時(shí)間與溶媒組無顯著性組間差異。在第二次強(qiáng)迫游泳測(cè)試期間, Wistar大鼠組間比較顯示，丙咪嗪組與Apelin組大鼠不動(dòng)時(shí)間均顯著性低于溶媒組。 2、基于小鼠懸尾測(cè)試模型評(píng)估Apelin抗抑郁效應(yīng) 在第一次懸尾測(cè)試期間，丙咪嗪組小鼠不動(dòng)時(shí)間顯著性低于溶媒組；Apelin組小鼠不動(dòng)時(shí)間與溶媒組相比無顯著性組間差異。在第二次懸尾測(cè)試期間，丙咪嗪組與Apelin組小鼠不動(dòng)時(shí)間均顯著性低于溶媒組。 3、基于大鼠慢性溫和應(yīng)激模型評(píng)估Apelin抗抑郁效應(yīng) 慢性溫和應(yīng)激1周后，溶媒對(duì)照組、丙咪嗪組與Apelin組大鼠體重與模型對(duì)照組比較均顯著性降低，該效應(yīng)一直持續(xù)至應(yīng)激結(jié)束。應(yīng)激處理3周后，溶媒對(duì)照組、丙咪嗪組與Apelin組大鼠蔗糖偏好水平與模型對(duì)照組比較均顯著性降低；在第4周，丙咪嗪組大鼠蔗糖偏好水平與溶媒對(duì)照組比較顯著性升高；在第5周，丙咪嗪組與Apelin組大鼠蔗糖偏好水平與溶媒對(duì)照組比較均顯著性升高，而與模型對(duì)照組比較均無顯著性組間差異。 4、評(píng)估海馬神經(jīng)發(fā)生在Apelin抗抑郁效應(yīng)中的作用 (1) Apelin對(duì)海馬神經(jīng)祖細(xì)胞的增殖、分化及新生細(xì)胞存活的影響 在海馬細(xì)胞增殖BrdU免疫組化及定量分析顯示，與溶媒組相比，Apelin組大鼠的海馬區(qū)BrdU陽性細(xì)胞顯著性增多；在海馬細(xì)胞分化的BrdU/NeuN免疫熒光雙標(biāo)及定量分析顯示，Apelin組大鼠的海馬區(qū)BrdU/NeuN雙標(biāo)的陽性細(xì)胞顯著性高于溶媒組；在海馬新生細(xì)胞存活的BrdU/NeuN免疫熒光雙標(biāo)及定量分析顯示，Apelin組大鼠的海馬區(qū)BrdU/NeuN雙標(biāo)的陽性細(xì)胞顯著性高于溶媒組。 (2)Apelin對(duì)慢性溫和應(yīng)激抑制海馬神經(jīng)發(fā)生的影響 新增生細(xì)胞的免疫組化及定量分析顯示，與模型對(duì)照組比較，溶媒對(duì)照組大鼠海馬BrdU陽性細(xì)胞數(shù)顯著性降低；與溶媒對(duì)照組比較，Apelin組大鼠海馬BrdU陽性細(xì)胞數(shù)顯著性升高，而與模型對(duì)照組比較無顯著性組間差異。 (3)抑制海馬神經(jīng)發(fā)生對(duì)Apelin抗抑郁效應(yīng)的影響 慢性溫和應(yīng)激處理2周后，溶媒對(duì)照組、AZT組、Apelin組與Apelin+AZT組大鼠蔗糖偏好水平與模型對(duì)照組比較均顯著性降低；在第4周與第5周，與溶媒對(duì)照組大鼠比較，Apelin組大鼠蔗糖偏好水平顯著性升高，而與模型對(duì)照組無顯著性組間差異；Apelin+AZT組大鼠蔗糖偏好水平與溶媒對(duì)照組比較無顯著性組間差異。新生細(xì)胞增殖的BrdU免疫組化及定量分析顯示，與模型對(duì)照組比較，溶媒對(duì)照組、AZT組與Apelin+AZT組的海馬BrdU陽性細(xì)胞數(shù)均顯著性降低；與溶媒對(duì)照組比較，Apelin組大鼠海馬BrdU陽性細(xì)胞數(shù)顯著性增加，而與模型對(duì)照組無顯著性組間差異。 結(jié)論： Apelin在多種抑郁模型中均具有抗抑郁效應(yīng)；并且在慢性溫和應(yīng)激模型中，Apelin發(fā)揮抗抑郁效應(yīng)需要海馬神經(jīng)發(fā)生的參與。
[Abstract]:Objective:
Based on the rat model of forced swimming and acquired helplessness, the laboratory shows that Apelin can play an antidepressant effect and the hippocampus is the key brain area for Apelin to play an antidepressant effect. On the basis of earlier work, this study is to use the forced swimming model of WKY transgenic rats, the tail model of mice and the chronic mild stress model of rats. The antidepressant effect of Apelin was evaluated. Meanwhile, behavioral pharmacology and immunohistochemistry were used to detect the role of hippocampal neurogenesis in Apelin antidepressant effect.
Method錛

本文編號(hào)：1850720