本文選題：Apelin + 抑郁　； 參考：《南華大學》2012年碩士論文

【摘要】：目的： 本實驗室基于大鼠強迫游泳與習得性無助模型，首次表明Apelin可發(fā)揮抗抑郁效應且海馬是Apelin發(fā)揮抗抑郁效應的關鍵腦區(qū)。本研究擬在前期工作的基礎上，進一步采用WKY轉基因大鼠強迫游泳模型、小鼠懸尾模型、大鼠慢性溫和應激模型評估Apelin的抗抑郁效應；同時采用行為藥理學、免疫組化等方法檢測海馬神經發(fā)生在Apelin抗抑郁效應中的作用。 方法： 1、基于WKY大鼠強迫游泳模型評估Apelin抗抑郁效應 雄性WKY大鼠與Wistar大鼠麻醉后，行側腦室導管埋置術，術后恢復1周。WKY大鼠與Wistar大鼠各自分為溶媒對照組、丙咪嗪組與Apelin組。手術后1周行強迫游泳測試程序，測試前23.5h、2.5h與0.5h經側腦室微注射3次溶媒、丙咪嗪(200μg/rat)或Apelin-13(2μg/rat)。Wistar組大鼠在第一次檢測完成后，間隔24小時后進行第二次強迫游泳檢測，并于檢測前0.5h經側腦室微注射1次溶媒、丙咪嗪或Apelin-13。記錄并分析大鼠在強迫游泳期間的累計不動時間。 2、基于小鼠懸尾測試模型評估Apelin抗抑郁效應 雄性昆明小鼠麻醉后，行側腦室導管埋置術，術后恢復1周。小鼠分為溶媒對照組、丙咪嗪組與Apelin組。手術后1周行懸尾測試程序，測試前23.5h、2.5h與0.5h經側腦室注射3次溶媒、丙咪嗪(200μg/mouse)或Apelin-13(2μg/mouse)。在第一次檢測完成后，間隔24小時后進行第二次懸尾測試，并于檢測前0.5h經側腦室微注射1次溶媒、丙咪嗪或Apelin-13。記錄并分析小鼠在懸尾期間的累計不動時間。 3、基于大鼠慢性溫和應激模型評估Apelin抗抑郁效應 雄性Wistar大鼠麻醉后，行側腦室導管埋置術，術后恢復1周。大鼠分為模型對照組、溶媒對照組、丙咪嗪組與Apelin組；除模型對照組不接受應激外，其余各組進行慢性溫和應激處理5周，自第4周起經側腦室注射溶媒、丙咪嗪(200μg/rat)或Apelin-13(2μg/rat)，每天1次，持續(xù)2周。在第0、1、2、3、4、5周周末稱量大鼠體重，并在第1、2、3、4、5周周末檢測大鼠蔗糖偏好(以蔗糖攝入量與總液體攝入量的比值表示)。 4、評估海馬神經發(fā)生在Apelin抗抑郁效應中的作用 1) Apelin對海馬神經祖細胞的增殖、分化及新生細胞存活的影響 雄性Wistar大鼠麻醉后，行側腦室導管埋置術，術后恢復1周。經側腦室給予大鼠溶媒或Apelin-13(2μg/rat)處理，1天1次，，持續(xù)2周。(1)為了觀察Apelin對海馬祖細胞增殖的影響，采用BrdU標記新增生細胞，于Apelin處理1周后開始注射BrdU (50mg/kg,i.p,1次/天)直至Apelin處理結束，處理結束后24小時將大鼠處死取腦。石蠟切片后行BrdU免疫組化及定量分析。(2)為了觀察Apelin處理誘導的海馬新增生細胞可否向神經元或神經膠質細胞分化，在Apelin處理的最后兩天進行BrdU(75mg/kg,i.p,4次/天,間隔2小時)處理。最后一次BrdU處理后28天將大鼠處死取腦。石蠟切片后行免疫熒光雙標(BrdU/NeuN)及定量分析。(3)為了觀察Apelin對海馬新增生細胞存活的影響，在Apelin處理的前兩天進行BrdU(75mg/kg,i.p,4次/天,間隔2小時)處理；最后一次BrdU處理后28天將大鼠處死取腦。石蠟切片后行免疫熒光雙標(BrdU/NeuN)。 2)Apelin對慢性溫和應激抑制海馬神經發(fā)生的影響 為了檢測Apelin處理可否逆轉慢性溫和應激誘導的海馬神經發(fā)生的抑制，將雄性Wistar大鼠分為模型對照組、溶媒對照組與Apelin組；大鼠麻醉后，行側腦室導管埋置術，術后恢復1周。給予溶媒對照組與Apelin組大鼠慢性溫和應激處理5周。自第3周起經側腦室注射溶媒或Apelin(2μg/rat），每天1次，持續(xù)2周。為標記新增生細胞，自第四周起注射BrdU(50mg/kg,i.p,1次/天)，持續(xù)1周。處理結束后24小時將大鼠處死取腦。石蠟切片后行BrdU免疫組化及定量分析。 3)抑制海馬神經發(fā)生對Apelin抗抑郁效應的影響 雄性Wistar大鼠麻醉后，行側腦室導管埋置術，術后恢復1周。大鼠分為模型對照組、溶媒對照組、AZT組、Apelin組與Apelin+AZT組；除模型對照組外，其余各組大鼠慢性溫和應激處理5周，自第4周起經側腦室注射溶媒或Apelin(2μg/rat），每天1次，持續(xù)2周。在每次Apelin注射前2小時側腦室微量注射AZT(1μmol/rat)，持續(xù)2周。采用BrdU標記新增生細胞，第5周開始注射BrdU(50mg/kg,i.p,1次/天)，持續(xù)1周。在第1、2、3、4、5周周末檢測大鼠蔗糖偏好(以蔗糖攝入量與總液體攝入量的比值表示)。最后一次蔗糖偏好檢測后將大鼠處死取腦。石蠟切片后行BrdU免疫組化。 結果： 1、基于WKY大鼠強迫游泳模型評估Apelin抗抑郁效應 在第一次強迫游泳測試期間,WKY大鼠溶媒對照組大鼠不動時間顯著性高于Wistar大鼠溶媒對照組。WKY大鼠組間比較顯示，丙咪嗪組與Apelin組大鼠不動時間顯著性低于溶媒組。Wistar大鼠組間比較顯示，丙咪嗪組大鼠不動時間顯著性低于溶媒組。Apelin組大鼠不動時間與溶媒組無顯著性組間差異。在第二次強迫游泳測試期間, Wistar大鼠組間比較顯示，丙咪嗪組與Apelin組大鼠不動時間均顯著性低于溶媒組。 2、基于小鼠懸尾測試模型評估Apelin抗抑郁效應 在第一次懸尾測試期間，丙咪嗪組小鼠不動時間顯著性低于溶媒組；Apelin組小鼠不動時間與溶媒組相比無顯著性組間差異。在第二次懸尾測試期間，丙咪嗪組與Apelin組小鼠不動時間均顯著性低于溶媒組。 3、基于大鼠慢性溫和應激模型評估Apelin抗抑郁效應 慢性溫和應激1周后，溶媒對照組、丙咪嗪組與Apelin組大鼠體重與模型對照組比較均顯著性降低，該效應一直持續(xù)至應激結束。應激處理3周后，溶媒對照組、丙咪嗪組與Apelin組大鼠蔗糖偏好水平與模型對照組比較均顯著性降低；在第4周，丙咪嗪組大鼠蔗糖偏好水平與溶媒對照組比較顯著性升高；在第5周，丙咪嗪組與Apelin組大鼠蔗糖偏好水平與溶媒對照組比較均顯著性升高，而與模型對照組比較均無顯著性組間差異。 4、評估海馬神經發(fā)生在Apelin抗抑郁效應中的作用 (1) Apelin對海馬神經祖細胞的增殖、分化及新生細胞存活的影響 在海馬細胞增殖BrdU免疫組化及定量分析顯示，與溶媒組相比，Apelin組大鼠的海馬區(qū)BrdU陽性細胞顯著性增多；在海馬細胞分化的BrdU/NeuN免疫熒光雙標及定量分析顯示，Apelin組大鼠的海馬區(qū)BrdU/NeuN雙標的陽性細胞顯著性高于溶媒組；在海馬新生細胞存活的BrdU/NeuN免疫熒光雙標及定量分析顯示，Apelin組大鼠的海馬區(qū)BrdU/NeuN雙標的陽性細胞顯著性高于溶媒組。 (2)Apelin對慢性溫和應激抑制海馬神經發(fā)生的影響 新增生細胞的免疫組化及定量分析顯示，與模型對照組比較，溶媒對照組大鼠海馬BrdU陽性細胞數(shù)顯著性降低；與溶媒對照組比較，Apelin組大鼠海馬BrdU陽性細胞數(shù)顯著性升高，而與模型對照組比較無顯著性組間差異。 (3)抑制海馬神經發(fā)生對Apelin抗抑郁效應的影響 慢性溫和應激處理2周后，溶媒對照組、AZT組、Apelin組與Apelin+AZT組大鼠蔗糖偏好水平與模型對照組比較均顯著性降低；在第4周與第5周，與溶媒對照組大鼠比較，Apelin組大鼠蔗糖偏好水平顯著性升高，而與模型對照組無顯著性組間差異；Apelin+AZT組大鼠蔗糖偏好水平與溶媒對照組比較無顯著性組間差異。新生細胞增殖的BrdU免疫組化及定量分析顯示，與模型對照組比較，溶媒對照組、AZT組與Apelin+AZT組的海馬BrdU陽性細胞數(shù)均顯著性降低；與溶媒對照組比較，Apelin組大鼠海馬BrdU陽性細胞數(shù)顯著性增加，而與模型對照組無顯著性組間差異。 結論： Apelin在多種抑郁模型中均具有抗抑郁效應；并且在慢性溫和應激模型中，Apelin發(fā)揮抗抑郁效應需要海馬神經發(fā)生的參與。
[Abstract]:Objective:
Based on the rat model of forced swimming and acquired helplessness, the laboratory shows that Apelin can play an antidepressant effect and the hippocampus is the key brain area for Apelin to play an antidepressant effect. On the basis of earlier work, this study is to use the forced swimming model of WKY transgenic rats, the tail model of mice and the chronic mild stress model of rats. The antidepressant effect of Apelin was evaluated. Meanwhile, behavioral pharmacology and immunohistochemistry were used to detect the role of hippocampal neurogenesis in Apelin antidepressant effect.
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本文編號：1850720