發(fā)布時(shí)間：2018-04-29 13:09

  本文選題：抗酶抑制因子 + 原核表達(dá)�。� 參考：《生物技術(shù)通報(bào)》2017年03期

【摘要】：原核表達(dá)純化人抗酶抑制因子-1((antizyme inhibition factor-1,AZIN1),制備并鑒定抗AZIN1多克隆抗體。p ET-28a/AZIN1表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)后,IPTG誘導(dǎo)蛋白表達(dá),利用Ni-NTA樹(shù)脂于變性條件下親和層析純化人AZIN1蛋白。將重組AZIN1蛋白用作抗原免疫BALB/c小鼠以制備多克隆抗體,ELISA檢測(cè)抗AZIN1抗體效價(jià),Western bloting、細(xì)胞免疫熒光、細(xì)胞免疫化學(xué)方法檢測(cè)抗體的應(yīng)用。結(jié)果顯示,重組p ET-28a/AZIN1表達(dá)質(zhì)粒經(jīng)酶切及測(cè)序鑒定構(gòu)建正確。細(xì)菌內(nèi)重組AZIN1蛋白可被IPTG誘導(dǎo)表達(dá)并以包涵體的形式存在。用親和層析法能有效純化原核表達(dá)的AZIN1蛋白,該蛋白在小鼠體內(nèi)能夠誘導(dǎo)抗AZIN1特異性抗體產(chǎn)生,血清效價(jià)達(dá)到1，

本文編號(hào)：1820068