本文選題：動(dòng)物源醫(yī)療器械 + 生物材料��； 參考：《藥物分析雜志》2017年10期

【摘要】：目的:通過優(yōu)化α-Gal抗原檢測(cè)的方法及改善相關(guān)試劑的穩(wěn)定性,研發(fā)α-Gal抗原定量檢測(cè)試劑盒,并評(píng)價(jià)該試劑盒的穩(wěn)定性、可靠性和適用性。方法:以醫(yī)療器械行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(YY/T 1561—2017組織工程醫(yī)療器械產(chǎn)品動(dòng)物源性支架材料殘留α-Gal抗原檢測(cè))中的α-Gal抗原檢測(cè)酶聯(lián)免疫抑制方法為基礎(chǔ),通過評(píng)價(jià)回收率、相關(guān)系數(shù)R2、最大吸收值和一抗的最高結(jié)合抑制率,對(duì)一抗、酶標(biāo)二抗和固相抗原包被反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化。預(yù)先制備好抗原包被板以及即用型試劑,制備成套試劑盒。通過考察Gal-BSA標(biāo)準(zhǔn)品的Gal抗原含量,評(píng)價(jià)試劑盒的檢測(cè)回收率、標(biāo)準(zhǔn)曲線的R2值、最高反應(yīng)的吸收度(A)和最高結(jié)合抑制率,考察其穩(wěn)定性。使用優(yōu)化好的試劑盒檢測(cè)幾種樣品的Gal抗原,考察試劑盒的適用性。結(jié)果:經(jīng)過優(yōu)化后的試劑盒Gal抗原最低檢測(cè)限為5.64×1012個(gè)/每反應(yīng),檢測(cè)回收率80%~120%;相關(guān)系數(shù)R20.98;6批次的板內(nèi)、板間檢測(cè)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD5%;陰性參考品無Gal抗原檢出。使用該試劑盒能夠準(zhǔn)確檢測(cè)小鼠臟器Gal抗原含量,其結(jié)果顯示小鼠各臟器Gal抗原表達(dá)趨勢(shì)與Gal抗原調(diào)控基因的m RNA表達(dá)趨勢(shì)完全一致,間接地佐證了該試劑盒的準(zhǔn)確性和可信性。檢測(cè)生物型硬腦膜補(bǔ)片原材料Gal抗原含量為(8.34±1.17)×1014個(gè)·mg-1,產(chǎn)品Gal抗原含量為(4.16±2.56)×1012個(gè)·mg-1,計(jì)算得抗原清除率為99.5%。結(jié)論:該試劑盒具有較好的靈敏度,特異性,適用于依照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY/T 1561—2017進(jìn)行動(dòng)物源醫(yī)療器械/生物材料α-Gal抗原殘留量的定量和Gal抗原清除率檢測(cè),為行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施提供技術(shù)保障。
[Abstract]:Objective: to develop and evaluate the stability, reliability and applicability of 偽 -Gal antigen quantitative detection kit by optimizing the method of 偽 -Gal antigen detection and improving the stability of related reagent. Methods: based on the detection of 偽 -Gal antigen in the tissue engineering medical device product animal source scaffold material, the method of Elisa was used to evaluate the recovery rate of 偽 -Gal antigen in the medical device industry standard (YY / T 1561-2017). The correlation coefficient R2, the maximum absorption value and the highest binding inhibition rate of the first antibody were optimized. The reaction conditions of the first antibody, the enzyme labeled second antibody and the solid phase antigen coating were optimized. A complete kit was prepared by preparing the antigen coating plate and the self-use reagent. The stability of Gal-BSA was investigated by investigating the Gal antigen content of the standard Gal-BSA, the detection recovery of the kit, the R2 value of the standard curve, the highest absorptivity of the reaction and the highest binding inhibition rate. The Gal antigens of several samples were detected by the optimized kit, and the applicability of the kit was investigated. Results: the minimum detection limit of Gal antigen of the optimized kit was 5.64 脳 1012 per reaction, the detection recovery was 80 ~ 120, the correlation coefficient was R20.98 ~ 6 batches, the relative standard deviation of intraplate detection was RSD _ 5 and the negative reference was not detected by Gal antigen. The results showed that the expression trend of Gal antigen in mouse viscera was consistent with that of m RNA gene regulated by Gal antigen. The accuracy and credibility of the kit are proved indirectly. The content of Gal antigen in raw material of biological dura mater patch was 8.34 鹵1.17 脳 10 14 mg -1, and the content of Gal antigen in product was 4.16 鹵2.56 脳 1012 mg -1. The antigen clearance rate was 99.5%. Conclusion: the kit has good sensitivity and specificity. It is suitable for the quantitative determination of 偽 -Gal antigen residues and the clearance rate of Gal antigen in animal medical devices / biomaterials according to industry standard YY/T 1561-2017. To provide technical support for the implementation of industry standards.
【作者單位】： 北京三藥科技開發(fā)公司;中國(guó)食品藥品檢定研究院;北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司;
【基金】：再生型醫(yī)用植入器械國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室PI項(xiàng)目(課題編號(hào):2012NELRMD002) 科技部生物醫(yī)用材料研發(fā)與組織器官修復(fù)替代重點(diǎn)專項(xiàng)(2016YFC1103200,2016YFC1103203)
【分類號(hào)】：R392-33

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本文編號(hào)：1818798