本文選題：β1 + 4-GalT-Ⅰ��； 參考：《大連醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：目的：探討雌、孕激素作用下，著床前子宮內(nèi)膜（RL95-2細(xì)胞）β1,4-GalT-I表達變化及對胚胎與子宮內(nèi)膜黏附的影響，分析不同雌、孕激素作用下對EGFR相關(guān)信號通路表達的影響，調(diào)控子宮內(nèi)膜β1,4-GalT-I表達后EGFR表達的相應(yīng)變化，進一步分析子宮內(nèi)膜β1,4-GalT-I調(diào)控胚胎著床的分子機制，探討與EGFR信號通路的相關(guān)性。 方法：（1）通過體外著床模型（以人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞RL95-2模擬著床前子宮內(nèi)膜，以人絨毛癌細(xì)胞JAR模擬著床前胚胎），改變子宮內(nèi)膜環(huán)境雌、孕激素的水平：免疫印跡技術(shù)檢測雌、孕激素對子宮內(nèi)膜β1,4-GalT-Ⅰ表達的影響，免疫細(xì)胞化學(xué)染色分析雌、孕激素對β1,4-GalT-Ⅰ半乳糖基化的改變；RCA-1Lectin-blot技術(shù)分析雌、孕激素作用下Galβ1-4GlcNAc糖蛋白分支形成情況；檢測雌、孕激素影響子宮內(nèi)膜EGFR相關(guān)信號通路蛋白表達水平；免疫印跡技術(shù)分析孕激素水平與p-EGFR表達相關(guān)性；計數(shù)JAR細(xì)胞在RL95-2細(xì)胞上黏附率，分析與雌、孕激素水平的關(guān)系；（2）將β1,4-GalTⅠ基因過表達質(zhì)粒、干擾質(zhì)粒、空質(zhì)粒和干擾對照質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染RL95-2細(xì)胞，分析調(diào)控子宮內(nèi)膜β1,4-GalTⅠ表達水平后，，JAR細(xì)胞在RL95-2細(xì)胞上黏附變化情況；應(yīng)用免疫印跡技術(shù)分析調(diào)控子宮內(nèi)膜β1,4-GalTⅠ表達對EGFR表達的影響。 結(jié)果：（1）子宮內(nèi)膜β1,4-GalT-Ⅰ表達與雌、孕激素呈劑量、時間-效應(yīng)關(guān)系，雌激素最佳作用條件為10-4ug/ul、48h（P0.01），孕激素最佳作用條件為10-4ug/ul、48h（P0.01）;（2）子宮內(nèi)膜雌、孕激素可促進JAR細(xì)胞對RL95-2細(xì)胞的黏附作用，黏附率：雌激素組（84.7±0.4%）、孕激素組（91.4±0.7%）、雌孕聯(lián)合組（88.0±0.9%），均明顯高于正常組（78.3±0.7%）（P0.01），以孕激素上調(diào)作用更為顯著；孕激素組、雌孕聯(lián)合組可明顯上調(diào)子宮內(nèi)膜EGFR、NF-κB、ICAM-1和Galβ1-4GlcNAc的表達（P0.01）；雌激素組、孕激素組、雌孕聯(lián)合組明顯上調(diào)β1,4-GalT-Ⅰ、EGF蛋白表達（P0.01）；（3）孕激素作用下促進子宮內(nèi)膜EGFR磷酸化水平（P0.01）；（4）子宮內(nèi)膜細(xì)胞轉(zhuǎn)染β1,4-GalTⅠ基因調(diào)控質(zhì)粒后，JAR細(xì)胞在RL95-2細(xì)胞上的黏附率分別為：過表達組(90.5±1.3%)高于正常組(77.9±0.9%)、空載體組(79.0±1.9%)和干擾對照組(80.1±1.6%)，干擾組黏附率則顯著降低（55.2±0.6%）（P0.01）；同時檢測到干擾組EGFR表達水平上調(diào)，過表達組無明顯變化（P0.01）。 結(jié)論：（1）雌、孕激素可調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜細(xì)胞β1,4-GalT-Ⅰ的表達（呈現(xiàn)時間、劑量依賴關(guān)系），促進JAR細(xì)胞對RL95-2細(xì)胞的黏附作用；（2）孕激素可上調(diào)子宮內(nèi)膜細(xì)胞EGFR相關(guān)信號通路分子表達來調(diào)控胚胎著床。（3）調(diào)控β1,4-GalT-Ⅰ表達影響胚胎著床可能通過EGFR相關(guān)信號通路。
[Abstract]:Objective: to investigate the changes of 尾 _ 1N _ 4-GalT-I expression and its effect on the adhesion of embryo to endometrium under the action of estrogen and progesterone, and to analyze the effect of different estrogen and progesterone on the expression of EGFR related signal pathway in RL95-2 cells. The corresponding changes of EGFR expression after regulating the expression of 尾 _ 1O _ 4-GalT-I in endometrium were studied. The molecular mechanism of 尾 _ 1N _ 4-GalT-I regulating embryo implantation was further analyzed, and the correlation with EGFR signaling pathway was discussed. Methods in vitro implantation model (human endometrial carcinoma cell RL95-2 was used to simulate preimplantation endometrium, human villous cancer cell JAR was used to simulate preimplantation embryo) to change the level of estradiol and progesterone: Western blot technique was used to detect the level of progesterone. The effects of progesterone on the expression of 尾 _ 1N _ 4-GalT- 鈪

本文編號：1810862