本文選題：微小隱孢子蟲 + 樹突狀細胞　； 參考：《中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志》2017年03期

【摘要】：目的體外分析Toll樣受體(TLR)4誘導感染微小隱孢子蟲(Cryptosporidium parvum)小鼠的樹突狀細胞(DC)功能。方法純化脫囊隱孢子蟲經5(6)-羧基二乙酸熒光素琥珀酰亞胺酯標記隱孢子蟲子孢子,PCR鑒定隱孢子蟲種。制備小鼠骨髓源樹突狀細胞,培養(yǎng)至第7天,于培養(yǎng)板各孔中分別加入1 ml DC,TLR4抗體組加入1 ml脫囊標記的隱孢子蟲子孢子(2×10~5/孔)和0.5 ml TLR4抗體(終濃度為1μg/ml),感染組加入脫囊標記的隱孢子蟲子孢子1 ml和0.5 ml RPMI 1640培養(yǎng)基,空白對照組加入1.5 ml RPMI 1640培養(yǎng)基。每組各3孔。培養(yǎng)2 h后,流式細胞術檢測各組的CD11c~+相對表達水平,Flowjo軟件比較各組樹突狀細胞的成熟情況。感染后24 h,熒光顯微鏡觀察各組隱孢子蟲子孢子與樹突狀細胞的黏附情況。各組CD11c~+相對表達水平間的差異采用χ~2檢驗。結果純化后的隱孢子蟲經PCR擴增,獲得長度為830 bp的條帶,鑒定為微小隱孢子蟲。流式細胞術檢測結果顯示,TLR4抗體組和感染組的樹突狀細胞CD11c~+相對表達水平分別為67.67±1.80和83.37±3.73,與空白對照組(7.06±0.02)比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05);TLR4抗體組與感染組間差異也有統(tǒng)計學意義(P0.05)。Flowjo軟件分析結果顯示,TLR4抗體組的CD11c+相對表達水平的峰值低于感染組,表明TLR4抗體組DC的成熟度低于感染組。熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),TLR4組和感染組的隱孢子蟲子孢子均可與樹突狀細胞發(fā)生黏附現(xiàn)象。結論 TLR4可誘導感染隱孢子蟲小鼠的DC成熟。
[Abstract]:Objective to study the dendritic cell (DC) function of Cryptosporidium parvum infected by Toll like receptor TLR4 in vitro. Methods Cryptosporidium demystis were purified and identified by PCR. Mouse bone marrow-derived dendritic cells were prepared and cultured until the 7th day. 1 ml DDC TLR4 antibody group was added to the culture plate, and 1 ml demystified Cryptosporidium spores 2 脳 10 5 / well and 0. 5 ml TLR4 antibody (final concentration 1 渭 g / ml) were added to the culture plate, respectively. The infected group added 1 ml and 0. 5 ml RPMI 1640 culture medium of demystified Cryptosporidium spores, respectively. 1. 5 ml RPMI 1640 medium was added to the blank control group. Each group had 3 holes. After cultured for 2 h, the relative expression level of CD11c- ~ was detected by flow cytometry. Flowjo software was used to compare the maturation of dendritic cells in each group. The adhesion of Cryptosporidium spores to dendritic cells was observed by fluorescence microscope 24 hours after infection. The difference of CD11c- relative expression level in each group was tested by 蠂 ~ 2 test. Results the purified Cryptosporidium was amplified by PCR and identified as Cryptosporidium minima. The expression of CD11c~ in dendritic cells in TLR4 antibody group and infected group was 67.67 鹵1.80 and 83.37 鹵3.73respectively, which was compared with that in control group (7.06 鹵0.02). There was significant difference between the antibody group and infected group. The results showed that the peak level of CD11c expression in the antibody group was lower than that in the infected group, indicating that the maturity of DC in the TLR4 antibody group was lower than that in the infected group. Fluorescence microscopy showed that Cryptosporidium spore of TLR4 group and infected group could adhere to dendritic cells. Conclusion TLR4 can induce DC maturation in Cryptosporidium mice.
【作者單位】： 安徽農業(yè)大學動物科技學院;
【基金】：安徽省自然科學基金(No.1308085MC49)~~
【分類號】：R382.3

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